Determinación del nivel de ploidía en semillas de polinización abierta y de cruzamientos controlados de limonero. European Regional Development Fund
INTRODUCCIÓN Características de interés Ausencia de semillas Plantas triploides
INTRODUCCIÓN Las plantas triploides tienen muy baja fertilidad y generalmente no producen semillas ni inducen la formación de semillas en otras variedades por polinización cruzada. No se producen semillas debido a que al tener lugar la meiosis en estas plantas, se producen numerosas asociaciones multivalentes entre los cromosomas que dan lugar a la formación de gametos con diferentes dotaciones cromosómicas, derivando en una baja viabilidad de los mismos. Métodos de selección de plantas triploides Cruzamientos entre parentales diploides y tetraploides Cruzamientos entre parentales diploides x 4n 4n x x = 3n Alternativa
DESCENDIENTES GAMETOS PARENTALES Obtención de híbridos triploides X X 4n 4n n n 3n 3n
DESCENDIENTES GAMETOS PARENTALES Obtención de híbridos diploides Obtención de híbridos triploides X X n n n 3n
OBJETIVOS Selección de individuos triploides procedentes de semillas de polinización abierta y de cruzamientos controlados de limonero (Citrus limon (L.) Osbeck) y la determinación del método más adecuado para este proceso.
MATERIAL VEGETAL METODOLOGÍA Semillas de todos los tipos Germinación en vermiculita Semillas maduras de polinización abierta (Fino, Verna) Semillas desarrolladas Semillas no desarrolladas Semillas pequeñas desarrolladas Germinación in vitro Sin tegumento Con tegumento Con GA 3 Sin GA 3 Con GA 3 Sin GA 3 Semillas de cruzamientos controlados (V51xF49) Semillas inmaduras Semillas maduras Rescate de embriones inmaduros. Germinación in vitro Germinación en vermiculita
METODOLOGÍA Morfología de las semillas de polinización abierta Semillas desarrolladas Semillas no desarrolladas Semillas pequeñas desarrolladas
Análisis de ploidía: CITOMETRÍA DE FLUJO METODOLOGÍA 1 2 Pico 1: limón diploide Pico 2: limón triploide Partec PAII (Partec GMBH) Obtención de resultados en el software FloMax
RESULTADOS Semillas maduras de polinización abierta El conjunto de semillas que fueron germinadas en vermiculita mostraron un 1,6% y un 1% de plántulas triploides en limón tipo Fino y Verna, respectivamente. Al no ser capaces de germinar, la ploidía de las semillas no desarrolladas no pudo ser analizada. En cuanto a las semillas pequeñas desarrolladas, un 11% de las semillas germinadas de limón tipo Verna fueron triploides, aumentando hasta un 29% en limón tipo Fino. Estos resultados indican que este tipo de semillas no germinan en condiciones normales por lo que se necesita su cultivo in vitro para poder germinar. % Triploides 35 30 25 20 15 10 5 0 Germinación en vermiculita Semillas de polinización abierta Fino Variedad Todas + Desarrolladas Pequeñas desarrolladas Verna Germinación in vitro
RESULTADOS Germinación in vitro de semillas maduras de polinización abierta Las semillas de polinización abierta no desarrolladas no fueron capaces de germinar, por lo que no pudieron ser analizadas. De todas las combinaciones llevadas a cabo en el ensayo, las semillas sin tegumentos que fueron cultivadas en el medio de germinación sin ácido giberélico mostraron los mejores resultados, alcanzando hasta un 63% de germinación. El medio de cultivo con GA 3 disminuyó los porcentajes de germinación en semillas sin tegumento. % Germinación 70 60 50 40 30 20 10 0 Sem. limonero tipo Fino polinización abierta Sin GA3 Medio de cultivo Con GA3 Sin tegumento Con tegumento Germinación in vitro
Cruzamiento Tipo de semillas % Triploides RESULTADOS Semillas procedentes de cruzamientos controlados El cruzamiento realizado fue Verna 51 x Fino 49. En semillas inmaduras se obtuvo un 7% de embriones triploides, multiplicando por 7 los resultados obtenidos en semillas maduras de polinización abierta, aunque estos resultados fueron inferiores a los obtenidos mediante la germinación in vitro de semillas pequeñas desarrolladas de polinización abierta. Se dejaron en el árbol 25 frutos procedentes del cruzamiento hasta su maduración y sus semillas se germinaron ex vitro. Todas las plantas obtenidas fueron. V51xF49 Inmaduras 7% Maduras 0% Rescate de embriones y germinación in vitro
CONCLUSIONES Los embriones 3n presentan grandes dificultades para germinar desde semillas maduras. El rescate de embriones inmaduros (en hibridaciones controladas) o el cultivo in vitro de embriones (en semillas pequeñas adultas de polinización abierta) y la determinación del nivel de ploidía mediante citometría de flujo y son una metodología efectiva para la recuperación y selección de híbridos triploides de limonero
Determinación del nivel de ploidía en semillas de polinización abierta y de cruzamientos controlados de limonero. GRACIAS POR SU ATENCIÓN European Regional Development Fund