Bases del diagnóstico parasitológico Catalina Rey Valeirón HEMOPARASITOSIS EN ANIMALES DOMÉSTICOS, DIAGNÓSTICO Y CONTROL Loja, Ecuador 10-14 Nov 2014
Parásito Transmisor Enfermedad Ambiente Hospedador TRÍADA DE LAS PARASITOSIS
Parasitemia (%) Prepatencia o período prepatente: La fase de la enfermedad entre la infección y la aparición de las formas parasitarias diagnosticables (estadíos sanguíneos). 12 10 Parasitemia (%) 8 6 4 2 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Días post-infección
Período de incubación: Tiempo entre la infección y el desarrollo de síntomas. 12 10 Parasitemia (%) 8 6 4 2 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Detectan niveles bajos de parasitemia y por tanto estatus de portador Examen físico Paciente Historia Después del Son excelentes para tratamiento comprobar Simple Identifican la eficacia No aún detecta dan Extendidos del Alta animales tratamiento y seguir bajas positivos sanguíneos el especificidad portadores desarrollo de y la Requiere de Muestra Métodos Pruebas crónicos parasitemias Muestra enfermedad laboratorio Bajo costo moleculares serológicas En otros especializado Simple Muestra Alta sensibilidad No casos, detecta - la costos Se Baja establecen y moderada bajas inmunidad Técnica de relaciones especificidad filogenéticas especificidad parasitemias humoral dura Woo de los parásitos Alta sensibilidad La algunos aparición de en casos agudos tripanosomas meses Se Bajo puede costo concluir es cíclica sobre vectores participantes en la transmisión Diagnóstico de agentes hemotrópicos en animales
Historia clínica
Examen físico Historia clínica
- Algunos síntomas en anaplasmosis, babesiosis o tripanosomosis son comunes y no son patognomónicos: fiebre, anemia, disminución del apetito, caída en la producción de leche y pérdida de la condición corporal, muerte
Condiciones de campo que sugieren la ocurrencia de enfermedad hemoparasitaria en bovinos
El propósito del examen parasitológico es -Identificar las formas parasitarias que se encuentren en sangre
El examen parasitológico es exitoso si -- La muestra de sangre fue tomada adecuadamente --Correcto envío al laboratorio
La recolección de muestras de sangre en campo generalmente es un proceso realizado inadecuadamente lo que pone en duda la veracidad y utilidad de los resultados obtenidos en el laboratorio. Debe ser el inicio de un proceso que garantice que al laboratorio llegue una muestra biológica apropiada que permita una adecuada interpretación del fenómeno que está afectando a los animales.
Toma de muestras Animales enfermos previo al tratamiento Identificar apropiadamente cada muestra En lo posible, describir en un listado anexo la condición o estado de cada animal. Recolectar muestras de animales sanos en contacto con los enfermos o pertenecientes al mismo grupo, con el fin de realizar la apropiada interpretación epidemiológica. La probabilidad de detección de hemoparásitos se aumenta cuando se utilizan frotis de sangre capilar.
Muestras de sangre venosa Recolectar en tubo vacutainer con EDTA, heparina o citrato de sodio utilizando sistema Vacutainer con una aguja nueva/animal No exponer los tubos al sol ni a refrigeración antes de la recolección Permitir el llenado del tubo hasta la mitad o mejor, hasta ¾ de capacidad Etiquetar el tubo con el número del animal, el predio y la fecha si es posible. Estos datos deben ser iguales a la planilla de registro Disponer de un cooler con frío en el mismo sitio de recolección
Muestras de sangre capilar Sujetar la borla de la cola del animal Depilar la punta de la cola con ayuda de una tijera Realizar la punción con aguja estéril en la punta de la cola Colocar un capilar heparinizado en la punción y esperar a que se llene Realizar el extendido en una lámina portaobjeto Fijar con metanol, teñir o enviar al laboratorio
Muestras de sangre capilar
El examen parasitológico es exitoso si -- La muestra de sangre fue tomada adecuadamente --Correcto envío al laboratorio -- Adecuado diagnóstico de laboratorio - si existen suficientes parásitos en sangre: Es decir, entre 10 5 y 10 7 parásitos/ml de sangre
Charles-Louis-Alfonse Laveran (18 Junio 1845 18 Mayo 1922) fue un médico francés que ganó el premio Nobel de Medicina y Fisiología en 1907, por sus descubrimientos de los protozoarios causantes de malaria y tripanosomosis utilizando extendidos sanguíneos sin teñir
Extendidos sanguíneos
http://www.tropeduweb.ch/parasitology_met hods_pdf/1_blood_films%20%201.pdf
Coloraciones de Romanovsky Giemsa Wright Giemsa-Wright May-Grünwald Hemacolor Diff-Quick Todos basados en la interacción de un colorante ácido (eosina) con componentes básicos de lós parásitos (por ej., proteínas citoplasmáticas) O de un colorante básico (azul de metileno o azur-b) con estructuras acídicas de los parásitos (por ej., núcleo) Previa fijación del extendido con metanol
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Una receta de la coloración de Giemsa Fijar con metanol calidad analítica 10 minutos Dejar secar Cubrir el extendido con una solución de Giemsa 1:10 por 20 minutos Lavar con agua destilada o buffer fosfato salino 20 mm, ph 7,2
Cuerpos de Howell-Jolly
Babesia bigemina
B. canis B caballi B. equi B. bovis
Trypanosoma evansi
A Caballero, 1993 B (A) Giemsa Anaplasma marginale (B) Naranja de acridina+bromuro de etidio
A ph 3,5, cuando la naranja de acridina + bromuro de etidio (que se enlazan a ADN/ARN) son excitadas por luz ultravioleta, se pueden diferenciar los procariotas de las células anucleadas bajo un microscopio de luz ultravioleta. Esto permite que a 400-1000x se pueda hacer un diagnóstico mucho más rápido que el de Giemsa. Los cuerpos de Anaplasma son fácilmente detectables en el interior de lós eritrocitos negros o marrón verdoso oscuro
Anaplasma platys Foto: Prof. Omaira Parra, Universidad del Zulia, Venezuela
Ehrlichia canis
Hepatozoon canis Foto: Prof. Bellmaris Chirino, Universidad Francisco de Miranda, Venezuela
El examen parasitológico es exitoso si -- La muestra de sangre fue tomada adecuadamente --Correcto envío al laboratorio -- Adecuado diagnóstico de laboratorio - si existen suficientes parásitos en sangre: Es decir, entre 10 5 y 10 7 parásitos/ml de sangre
TÉCNICA SENSIBILIDAD (% parasitemia *) Extendido sanguíneo 0,1-0,2 Sondas ARN/ADN 0,000025 * Número de glóbulos rojos parasitados por Anaplasma marginale por cada 100 glóbulos rojos
Técnicas de concentración para detección de tripanosomas Woo, 1969. The haematocrit centrifuge technique for the diagnosis of African trypanosomiasis Sensibilidad: 90-100%, si hay 700 parásitos/ml de sangre 50% si hay entre 60 a 300 parásitos/ml Desdeñable por debajo de 60 parásitos/ml
Técnicas de concentración para detección de protozoarios intracelulares
Frotis por aposición de cerebro para diagnóstico de Babesia bovis
Frotis por aposición de cerebro para diagnóstico de Babesia bovis
Inoculación de animales susceptibles -100-1000 ml de sangre portadora en un receptor susceptible, preferiblemente esplenectomizado, fue el método preferido en el pasado para identificar infecciones latentes. - Costoso, relativamente largo y se requiere de estabulación de los animales
Drs. Adolfo Bremo, Franklin Mujica ( ), Catalina Rey, Pedro Aso, Armando Reyna
Gracias por vuestra atención