Nuevos avances en el diagnóstico de la Leishmaniasis

Transcripción

1 Nuevos avances en el diagnóstico de la Leishmaniasis Javier Rodríguez Granger UGC Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica Complejo Hospitalario Universitario de Granada H. Virgen de las Nieves Montevideo 6 Noviembre de 2016

2 Distribución de la Leishmaniasis Alvar et al, 2012

3 CASOS de Leishmaniasis OCUPA EL OCTAVO LUGAR ENTRE LAS ENFERMEDADES TROPICALES DESATENDIDAS Alvar et al, 2012

4 Taxonomía Dominio Eukarya ; clado Excavata ; filo Euglenozoa clase Kinetoplastea ; orden Trypanosomatida Adl et al, 2005 OMS 2010

5 Leishmania spp. Amastigote Fase diagnóstica Forma ovalada 3-5 µm Desprovista de flagelo Interior macrófagos del hospedador Promastigote Fase Infectiva Forma piriforme 2 x 12 µm Flagelo polar Interior tubo digestivo vector

6 Ciclo biológico de Leishmania spp. Hombre (HD): División amastigotes en macrófagos Flebotomo (HI): División promastigotes en aparato digestivo. CDC, imagen libre

7 Diagnóstico Clínico : LC y LMC : lesiones características LV : fiebre, esplenomegalia, pancitopenia. Importante diagnostico diferencial. Signos y sintomas alterados por otras infecciones o enfermedades DIRECTO INDIRECTO MICROSCOPÍA IFI CULTIVO DAT TAAN IC

8 Diagnóstico directo : toma de muestras LEISHMANIASIS CUTÁNEA / MUCOSA 1) Limpieza lesión con alcohol 70º/desbridamiento 2) Evitar exudados 3) Muestras: Aspirados de la base/borde de úlcera : 3-5 Raspado e incisión frotis Biopsia mucocutánea PAAF LEISHMANIASIS VISCERAL 1) Aspirados: Médula ósea Esplénicos : hemorragias? 2) Nódulos linfáticos 3) Biopsia hepática 4) Sangre periférica 5) Buffy coat 6) VIH : BAL, líquidos estériles, biopsia de diferente localización

9 Influencia de la muestra en el diagnóstico SENSIBILIDAD BDS = 90.4 % y MDS = 78.3 % en conjunto 95 %

10 Microscopía: muy específica, pero menos sensible Más utilizado

11 Cultivos : baja aplicación diagnóstica Observación de PROMASTIGOTES > Sensibilidad que microscopía Estudios epidemiológicos Microcultivos : mejora S y rapidez Medios de cultivo: 27ºC - Medio NNN (Novy-Nicolle-McNeal) - Medio líquido Schneider-Drosophila - Microcultivo (RPMI 1640-Schneider-NNN) Descontaminación: vancomicina y gentamicina (excepto MO) Lectura semanal : 4 subcultivos NEGATIVOS Más lento y tedioso: riesgo de contaminación Schneider-Drosophila Microcultivo capilar

12 SEROLOGÍA NO utilizables para las formas cutáneas y mucocutáneas

13 DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO: no invasivo y rápido

14 IMPORTANCÍA ANTÍGENO USADO Otros antígenos: proteínas nucleares, ribosomales y enzimas G. Srividya et al 2012

15 DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO: IC rk39

16 ANTÍGENO rk39 S: 92% E: 95%

17 INMUNOCROMATOGRAFÍA rk39 EN ORINA Trans R Soc Trop Med Hyg (2011) 105 (9): Insuficiente especifidad en orina

18 TEST AGLUTINACIÓN DIRECTA (DAT)

19 DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO: DAT S: 98,8% E: 97,1% F Chappuis et al 2006

20 AGLUTINACIÓN ANTÍGENO EN ORINA : KATEX

21 DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO: IFI Sensibilidad y Especificidad aceptables : % / 77%-100% Antígenos : PROMASTIGOTES Anticuerpos detectables en estadios tempranos de enfermedad No detectables en 6 o 9 meses después de la curación. Titulos bajos mantenidos indicativo de RECAIDA Necesario Microscopio de fluorescencia Titulo positividad : 1/80 (dependiendo de población)

22 DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO: limitaciones Títulos de anticuerpos permanecen detectables durante meses o años después de la curación. No permiten el diagnóstico de las recaídas en el caso de la LV. Detectan infecciones asintomáticas : 1. Seroprevalencia en población sana < 10% poblaciones de moderada-baja endemicidad 2. > 30 % en áreas de alta transmisión Reacciones cruzadas : trypanososmas, toxoplasma, tuberculosis Coinfecciones Leishmania / VIH, baja sensibilidad (40-50 %)

23 DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO EN VIH

24 DIAGNÓSTICO MOLECULAR FALTA ESTANDARIZACIÓN

25 DIAGNÓSTICO MOLECULAR : dianas K-DNA minicircle gen: Excelente diana para detección rápida y con la mayor sensibilidad Presente miles copias / células Mini-exon (spliced leader) gen: Involucrados en el proceso de empalme de mrna nuclear Presente de veces repetidas en tandem en el genoma ITS (internal transcribed spacer):

26 DIAGNÓSTICO MOLECULAR Paiva-Cavalcanti et al, 2015

27 DIAGNÓSTICO MOLECULAR : S y E C M de Ruiter et al, 2014

28 USO DE PCR FRENTE A OTROS MÉTODOS AdultosVIH- AdultosVHI+ Niños Antinori S et al., 2007

29 EFICACIA DE TRATAMIENTO Anfotericina liposomal miltefosina Antimo + Anfoter Antimoniales Anfotericina liposomal Anfotericina + antimoniales Antinori S et al., 2009

30 EFICACIA DE MÉTODOS DIAGNÓSTICOS G. Srividya et al 2012

31 DIFERENTES CONDICIONES DIAGNÓSTICAS Singh et al., 2015

32 DIFERENTES CONDICIONES DIAGNÓSTICAS

33 DIFERENTES CONDICIONES DIAGNÓSTICAS Singh et al., 2015

34 MUCHAS GRACIAS POR VUESTRA ATENCIÓN