Diagnóstico Microbiológico

Transcripción

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5 Diagnóstico Microbiológico Toma de muestras clínicas representativas Sitios no contaminados con Flora Normal Biopsia de tejidos Sitios contaminados con Flora Normal Orina (micción espontánea o al acecho) Sangre/LCR Esputo Orina (punción suprapúbica) Material fecal

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7 Diagnóstico microbiológico Muestra clínica Medio Medio semisólido: Medio Stuart Medio Amies Medio Cary & Blair TRANSPORTE Medio líquido: Agua peptonada (Vibrio cholerae) PRAS/TAB (anaerobios) Frasco estéril: orina, materia fecal. Material necesario Hisopo en medio semisólido: fauces, recto, endocervix, uretra. Frasco con medio para anaerobios: anaerobios Frasco de hemocultivo: sangre

8 Diagnóstico microbiológico Conservación de las muestras TIPO DE MUESTRA TEMPERATURA AMBIENTE HELADERA (4ºc) SANGRE X ORINA X EXUDADOS FARINGEOS X ESPUTO Y MUESTRAS RESPIRATORIAS X EXUDADOS GENITALES LCR Punciones o biopsias de PIEL Y TEJ. BLANDOS EXUDADOS OCULARES MUESTRAS PARA ANAEROBIOS MATERIA FECAL X ( hisopo en medio Amies o Stuart para Neisseria gonorrhoeae) X X X X X

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10 Diagnóstico Microbiológico Observación microscópica Cultivo Medios Selectivos Medios diferenciales Medios de enriquecimiento Detección de antígenos bacterianos Métodos moleculares Pruebas Bioquímicas Identificación Sensibilidad antibiótica

11 Diagnóstico microbiológico Procesamiento de la muestra Cultivo Fresco Microscopia Presencia o no de bacterias Morfología Movilidad Células epiteliales Leucocitos Hematíes Candidas (hongo) Tinción GRAM ZIEHL NIELSEN GIEMSA OTROS Aislar Identificar Conocer el patrón de susceptibilidad antibiótica

12 Diagnóstico microbiológico Exámen en fresco Hematíes Células epiteliales Leucocitos Candida spp. (hongo)

13 Diagnóstico microbiológico Tinción de Gram Cocos Gram positivos Microscopio óptico En racimo Ej: Staphylococcus aureus En cadena Ej: Streptococcus spp

14 Diagnóstico microbiológico Microscopio óptico Bacilos gram-positivos Corynebacterium diphteriae (agrupamiento como letras chinas) Bastones o cilindros

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16 Diagnóstico microbiológico Microscopio óptico Tinción de Ziehl-Neelsen

17 Diagnóstico microbiológico Cultivo Medio líquido Medio sólido (enriquecer) (aislar)

18 Diagnóstico microbiológico Cultivo Medios Selectivos y Diferenciales Levine o EMB Chapman

19 Diagnóstico microbiológico Identificación bacteriana Pruebas bioquímicas Identificación de antígenos bacterianos Serotipificación API E

20 Diagnóstico microbiológico Serotipificación Se utilizan anticuerpos específicos para detectar antígenos en la superficie de la envoltura bacteriana Aglutinación = positivo 1 gota de Ac 1 colonia aislada

21 Diagnóstico microbiológico Repaso Cultivo Aislamiento - identificación- Microorganismo patógeno Pruebas de susceptibilidad antibiótica

22 Pruebas de susceptibilidad antibiótica OBJETIVOS Determinar la sensibilidad de una cepa bacteriana a un determinado antibiótico Determinar la eficacia de un antibiótico

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24 Antibiograma de difusión o método de Kirby & Bauer

25 Significado clínico de la prueba de Kirby & Bauer Bacterias sensibles Bacterias de susceptibilidad intermedia Bacterias resistentes

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29 Esta es la CIM Gradiente de concentraciones en la tira (µg/ml) E-Test La diferencia con el disco, es que el disco contiene una única concentración del antibiótico

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41 Diagnóstico Microbiológico Indirecto: detección de anticuerpos séricos Agente etiológico Treponema pallidum Método diagnóstico serológico IF (FTA-abs)/ HA (MHA-Tp) VDRL Brucella spp. Chlamydia trachomatis Leptospira interrogans Aglutinación/ ELISA IFD/ELISA Aglutinación Coxiella burnetti IFI FC: Fijación de complemento IF: inmunofluorescencia HA: hemoaglutinación FTA-abs: Fluorescent Treponemal Antibody with absorption. MHA-Tp: Microhemaglutinación del Treponema pallidum

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43 EJEMPLO NIÑO DE 3 AÑOS LLEGA A LA GUARDIA CON LOS SIGUIENTES SINTOMAS: VOMITOS Y FOTOFOBIA FIEBRE ALTA (38 a 40 0 C) FUERTE DOLOR DE CABEZA RIGIDEZ DE NUCA AL DIA CON EL CALENDARIO DE VACUNACION

44 Diagnóstico microbiológico de meningitis Líquido cefalorraquídeo (2 tubos de ensayo) Fisicoquímico PROCESAMIENTO INMEDIATO Cultivo TRANSPORTE SIN REFRIGERAR (N.meningitidis) X 3 HEMOCULTIVO

45 S SUBCULTIVOS Detección Visual: Turbidez, Formación de gas, de películas, coágulos o pequeñas colonias en los frasco Resiembra a ciegas menos de 24 h de incubación y a intervalos hasta 7 días de incubación, sin esperar la observación del desarrollo en el frasco

46 SUBCULTIVO sólo de hemocultvos positivos

47 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO LCR Sin centrifugar sobrenadante Centrifugado Observación en fresco (móvil)-giemsa- Tricrómico Diagnostico directo Virus ZN sedimento Gram Tinta china LATEX CIEF ELISA PCR Aislamiento Búsqueda ácidos nucleicos Cultivo Identificación por pruebas bioquímicas Antibiograma