CONCEPTOS PRELIMINARES: 1) Crecimiento celular Vs crecimiento poblacional: En microbiología el término «crecimiento» se refiere a una población microbiana. Como ejemplo, valga una de las tareas que hacemos en el laboratorio: cuando inoculamos una muestra en un medio de cultivo solido, y al otro día observamos colonias, lo que ocurrió es el crecimiento de poblaciones derivadas de cada una de las células que han sido sembradas el día anterior. Placa de agar recientemente sembrada Placa de agar, inoculada e incubada el tiempo suficiente, muestra el crecimiento microbiano Cada célula inoculada ha generado una colonia, porque ha crecido un derivado clonal a partir de cada una
CONCEPTOS PRELIMINARES: 2) Crecimiento logarítmico
CRECIMIENTO LOGARITMICO: En algunas bacterias como en el caso la E. coli, en condiciones óptimas la duplicación celular se realiza cada 20 minutos, es así como en 10 horas se habrán producido 30 generaciones, es decir mil millones de células bacterianas. A partir de una célula de E. coli, se obtiene al cabo de 10 horas o sea 600 minutos, 600/20=30 generaciones. El número de células entonces sería 230
Vet. Sergio Abate, Dr. Mag. Profesor Adjunto Microbiología Sede Atlántica - UNRN
CONCEPTOS PRELIMINARES: 3) Tiempo generacional Es el tiempo en que demora una población en duplicar su número. Ese tiempo es variable entre diferentes microorganismos (algunos se multiplican rápidamente, otros lo hacen lentamente). Ademas, es variable para un mismo microorganismo, en función de la disponibilidad de nutrientes, condiciones adecuadas de cultivo (temperatura, ph, presión de gases, etc.)
CONCEPTOS PRELIMINARES: 4) Muerte microbiana Se entiende por Muerte Microbiana, al estado en el cual los microorganismos han perdido la capacidad de multiplicarse. Se entiende que un elemento (medio de cultivo, solución fisiológica, placa de petri, pipeta, etc.) está estéril, cuando hay ausencia de microorganismos con capacidad reproductiva (es decir, si los hay, están muertos)
CURVA DE CRECIMIENTO POBLACIONAL: Cultivo discontinuo
CURVA DE CRECIMIENTO POBLACIONAL: Cultivo continuo
CURVA DE CRECIMIENTO POBLACIONAL: Factores propios del microorganismo: algunos microroganismos tendrán curvas con pendientes pronunciadas, y otros con pendientes mas aplanadas Depende de la capacidad metabólica, según disponibilidad enzimática (condicionada por la carga genética de información), complejidad de estructuras que debe duplicar, etc. Factores externos al microorganismo, que condicionen la eficiencia de la actividad de sus enzimas, así como la disponibilidad de nuitrientes: Factores físicos: temperatura, osmolaridad, agua libre Factores químicos: presencia de nutrientes Factores biológicos: presencia de otros microorganismos competidores que eliminen al medio elementos químicos inhibidores
et. Sergio Abate, Dr. Mag. Profesor Adjunto Microbiología Sede Atlántica - UNRN El conocimiento de condiciones requeridas para el crecimiento de cada microorganismo, nos permite garantizar su crecimiento en el laboratorio de la manera mas eficiente, con diferentes fines Diagnóstico: Ej. aislamiento e identificación de patógenos Diagnóstico e Investigación: Ej recuentos de densidad microbiana en determinada muestra Industria y biotecnología: Ej producción de moleculas recombinantes por biotecnología: los microroganismos se transforman en fabricas de moleculas cuyo genoma codificante se ha insertado en los microroganismos, como sucede con la producción de insulina desde hace decadas.
RECUENTO DE MICROROGANISMOS et. Sergio Abate, Dr. Mag. Profesor Adjunto Microbiología Sede Atlántica - UNRN MICROORGANISMOS VIABLES: -Vivos y cultivables Recuento de UFC/unidad de volumen NMP/unidad de volumen MICROORGANISMOS TOTALES: -Vivos y cultivables -Muertos -Viables no cultivables Métodos turbidimétricos Recuento ocular de células Contador electrónico de células Citometría de flujo: cuenta y discrimina (identifica diferentes tipos de células)
et. Sergio Abate, Dr. Mag. Profesor Adjunto Microbiología Sede Atlántica - UNRN El conocimiento de condiciones requeridas para el crecimiento, permite hacer crecer a los microorganismos en el laboratorio de la manera mas eficiente Recuento de células viables en alimentos
et. Sergio Abate, Dr. Mag. Profesor Adjunto Microbiología Sede Atlántica - UNRN Como se evidencia el crecimiento de hongos y bacterias? Recuento de células viables en alimentos
et. Sergio Abate, Dr. Mag. Profesor Adjunto Microbiología Sede Atlántica - UNRN Como se puede estimar el número de microroganismos en una muestra? Recuento de células viables (Ej. en suelos, para estimar la actividad microbiana)
et. Sergio Abate, Dr. Mag. Profesor Adjunto Microbiología Sede Atlántica - UNRN Como se puede estimar el numero de virus en una muestra? Recuento viable de virus (recuento de partículas vivas con capacidad de reproducir)
et. Sergio Abate, Dr. Mag. Profesor Adjunto Microbiología Sede Atlántica - UNRN Como se puede estimar el numero total de microorganismos? Turbidez: Instrumental: Turbidímetro Ocular: Nefelómetro de Mc Farland
Como se puede estimar el numero total de microorganismos? Recuento celular directo: Método ocular Cámara cuenta células: Camara de Newbauer 1 mm x 1 mm x 0m1 mm Ej de aplicación: Nosemosis en abejas melíferas
Como se puede estimar el numero total de microorganismos? Recuento celular directo con contadores electrónicos Se utiliza el contador Coulter recuenta el número de células suspendidas en un líquido, a su paso por un orificio por donde fluye la corriente eléctrica. Se puede determinar a su vez el tamaño de las células. No distingue entre viables, muertas o partículas.
Como se puede estimar el numero total de microorganismos? Recuento celular directo con contadores electrónicos Citometría de flujo: