man ual del usuario Español Hoefer PR150 Incubación del colector mu PR150-IM/Spanish/Rev.E0/08-12

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1 man ual del usuario Español Hoefer PR150 Incubación del colector mu PR150-IM/Spanish/Rev.E0/08-12

2 Tabla de contenidos Introducción...1 Manual de instrucciones...3 Cuidado y mantenimiento...6 Información para pedidos...6 pi

3 Introducción La transferencia de proteínas o ácidos nucleicos, fraccionados mediante electroforesis en gel, para una superficie de la membrana inmovilizar aumenta la sensibilidad de una amplia gama de métodos de detección, reduce el tiempo de análisis y hace posible secuencial de sondeo. En particular, se ha hecho posible utilización de procedimientos inmunológicos que no son prácticas para llevar a cabo en un gel. Para material de ensayo en una hoja de membrana con sondas diferentes simultáneamente comúnmente requiere primero el corte de la membrana en una serie de tiras paralelas. Este procedimiento sin embargo destruye la correspondencia entre los carriles o posiciones diferentes sobre un gel. Fig 1. Componentes de la PR150. Presión de la junta junta los labios de asientos muestra de la junta junta los labios de asientos sellado de canto cámara de muestreo Ejemplo de placa Placa de presión p1

4 El PR150 Hoefer ha sido diseñado específicamente para conservar esta correspondencia y reducir al mínimo el volumen de las mezclas de reacción necesarias para los ensayos individuales. Dos placas de acrílico resistentes, cada uno de 1 cm de grosor y cm cuadrados, una abrazadera de 8,8 8,8 cm de membrana de transferencia entre dos juntas de silicona. Diez canales paralelos cortados en un lado de la placa superior convertirse en cámaras individuales de incubación cuando la unidad está montada. Las juntas de garantizar que las muestras líquidas y las sondas no se derramen en las cámaras adyacentes. Todas las etapas de incubación puede llevarse a cabo en la membrana intacta, sin tener la unidad de separación. Puesto que la membrana se sujeta firmemente entre las dos placas, no se puede flotar en la superficie de la mezcla de reacción o burbujas trampa debajo. Balanceo suave de la unidad completamente expone la superficie de la membrana para pequeños volúmenes de reactivos, evitando así los artefactos causados por la exposición incompleta o de mezcla. Desde cámaras de reacción son completamente cerrado, los materiales peligrosos puede ser guardado en forma segura. La PR150 tiene dos aplicaciones principales: 1. Hasta diez sondas o antisueros se podrá comprobar si una sola muestra de proteínas o ácidos nucleicos. La muestra se cargó en un gel de losa en una sola, a todo lo ancho también. Cuando sujeta en los PR150, diez diferentes sondas o antisueros se podrá comprobar si los mismos materiales separados. 2. Es apropiado para el uso eficiente de los volúmenes preciosos o pequeñas sondas o de antisueros que necesitan ser contrastadas con varias muestras. p2

5 Manual de instrucciones Las partes de la PR150 se muestra en la figura 1, (página 1). El producto incluye dos placas de plástico mecanizadas y dos juntas de silicona, una ranura y un sólido. La unidad está montada y fijada con cuatro tornillos de nylon. 1 Para probar una sola muestra con sondas múltiples o antisueros, separar la muestra en un preparatorio en formato mini (8,8 8,8 cm) de gel. Esto puede hacerse con un peine de ancho completo o simplemente mediante la aplicación de la muestra directamente a la parte superior de un molde de gel sin pozos. 2 Si el análisis de múltiples muestras en un minive Hoefer o Hoefer SE260 unidad vertical, utilice los compatibles diez peine así (ver datos del pedido) para formar los pozos de muestras en el gel. El espaciado de los dientes de este peine corresponde al espaciamiento de las cámaras individuales de la PR Después de la electroforesis, transferir la proteína o ácido nucleico separadas en el gel a un 8,8 8,8 cm de hoja de una membrana adecuada. La orientación de la membrana debe estar marcada con un lápiz antes de comenzar la transferencia. El gel no debe ser pre-equilibrada antes de la transferencia, ya que tiende a reducir el tamaño del gel. 4 Abra la PR150. Coloque tanto la placa de muestra y la placa de cierre con sus lados mecanizadas hacia arriba sobre una superficie plana. 5 Colocar la junta de estanqueidad ranurada sobre las cámaras de muestra de manera que los bordes de la junta encajan exactamente en el labio junta asiento superficial en la placa. Las ranuras de la junta deben estar alineados con las cámaras de incubación de la placa de la muestra. Esto se hace más fácilmente p3

6 Nota: El tamaño de la membrana es importante. Se debe estar completamente dentro de la región de la junta PR150 no debe extenderse más allá de los bordes de la junta muestra ranurada y que éste debe cubrir todas las ranuras más allá de las crestas de sellado para asegurar que no hay fugas cuando la membrana se sujeta en su lugar. Nota: Marcar la orientación de la membrana de transferencia antes de secante trazando los dientes de las diez peine así con un lápiz cerca de la parte superior de la membrana. El marcado debe realizarse antes de mojar la membrana. Coloque el lado no marcado de la membrana en la parte superior del gel. Alinear el lápiz trazado cuidadosamente para que coincida con la posición de los pocillos de muestra en el gel. manteniendo la junta ranurada flojamente por un borde en el extremo de las ranuras. Bajar la junta hasta el borde cae en su lugar en el borde de la placa de muestra. Bajar gradualmente el resto de la junta de modo que las bandas del material de la junta se suman a las crestas de sellado entre las cámaras. 6 La membrana elimina de la transferencia de gel debe ser colocada con la cara de contacto de gel hacia abajo contra la junta de estanqueidad. La membrana debe permanecer húmedo durante el procedimiento. (Una membrana seca tenderá a la mecha de la solución de incubación de cámaras teh.) La dirección de electroforesis debe ser paralelo a la dirección longitudinal de las ranuras. Todos los bordes de la membrana debe estar dentro de los bordes de la junta de estanqueidad pero también deben cubrir los bordes de todas las ranuras. 7 Si las muestras se han separado en los carriles individuales, ajustar la alineación de la membrana de modo que los carriles están por encima de las ranuras abiertas. El lápiz rastreo marcar los carriles debe estar en el lado superior de la membrana en este punto. 8 Coloque la junta de la presión sobre la membrana sólida de transferencia. Asegurarse de que todos los bordes están alineados con la junta ranurada y que están dentro de la muesca blanqueado de la placa de acrílico. Fig 2. Montaje de los componentes del colector de incubación PR150. placa de presión presión de la junta membrana muestra de la junta muestra de la placa p4

7 9 Cubrir la junta de presión con la placa de presión (Fig. 2). Fig 3. PR150 en la carga / posición de incubación. puertos de acceso Nota: Las moléculas pequeñas gradualmente se difunda fuera de las cámaras de incubación a través de la membrana. Este efecto mecha generalmente no es significativa durante unas pocas horas previstas de la membrana estaba mojada para empezar. Sin embargo, el PR150 no se recomienda para los procedimientos que se extienden durante un período de días. Gire a la asamblea sobre lo que las cámaras de incubación están por encima de la membrana de transferencia. Los puertos de acceso a las cámaras será entonces en la parte superior (Fig. 3).! Inserte los tornillos de nylon y apretar un cuarto cómodo a su vez el pasado. No apriete Cada cámara tiene capacidad para 2 ml. Con una mezcla adecuada, tan poco como 0,5 ml o menos puede ser usado en cada etapa de incubación. Añadir los reactivos a las cámaras a través de los puertos de acceso. Si desea cerrar las cámaras, coloque un pedazo de cinta adhesiva en la parte superior de la placa superior. # Colocar la unidad entera en un eje de balancín de modo que la mezcla de reacción en cada cámara fluye hacia atrás y adelante desde un extremo de la cámara a la otra. $ Después de una etapa de incubación en particular ha sido completado, retire la cinta de los agujeros y retirar la solución de cada cámara con una pipeta Pasteur. Cualquier número de reacciones secuenciales puede llevarse a cabo sin tomar la unidad de separación. % Cuando todas las etapas de reacción y lavado se han completado, desmontar la unidad y el aire seco de la membrana. Si una reacción inmunológica, junto con una generación enzimática de un producto coloreado se ha utilizado, las bandas de interés ya debe ser visible. Si un ensayo radioinmune ha sido empleado, la membrana seca está lista para autorradiografía. p5

8 Cuidado y mantenimiento Después de cada uso, lave el PR150, incluyendo la junta de la muestra, con un detergente suave. Enjuagar con agua del grifo y después con agua destilada. No utilice ácidos o bases fuertes, o disolventes orgánicos de ningún tipo, con la PR150. No enjuague con alcohol, como lo hará locura del plástico. Información para pedidos producto Hoefer PR150 Incubación del Colector Tornillos de nylon (paquete de 4) Ejemplo de junta Presión de la junta código PR150 PR153 PR152 PR así peines Peine, 0,75 mm de espesor Peine, 1,0 mm de espesor Peine, 1,5 mm de espesor SE211A SE211A SE211A p6

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