UNIVERSIDAD NACIONAL DEL LITORAL FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS CÁTEDRA DE TERIOGENOLOGIA

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1 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL LITORAL FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS CÁTEDRA DE TERIOGENOLOGIA Trabajo Práctico N 10 Tema: RECOLECCIÓN DE SEMEN E INSEMINACIÓN ARTIFICIAL EN EQUINOS Objetivos Que el alumno logre: - reconocer las utilidades de la técnica de IA en equinos. - comprender ventajas y desventajas de la técnica. - identificar las distintas formas de utilización del semen equino. - identificar y enumerar cronológicamente los pasos a seguir durante el recolección de semen equino. - identificar y enumerar cronológicamente los pasos a seguir en los distintos métodos de inseminación artificial en yeguas. - conocer las perspectivas futuras de la técnica. Recursos auxiliares Tizas, pizarrón, proyector de multimedia, diapositivas. Materiales Padrillo entero para realizar extracción. Yegua en celo. Potro de salto. Vagina artificial. Jeringa con émbolo de plástico (el émbolo de goma mata los espermatozoide). Pipetas de IA. Botas. Guantes obstétricos. Guardapolvo u overol. Contenidos 1.- Introducción 2.- Recolección, evaluación y procesamiento del semen Recolección Evaluación Factores que afectan la conservación Procesamiento 3.- Inseminación artificial en equinos Selección de yeguas Manejo de la inseminación Momento de la inseminación Técnica de inseminación Perspectivas futuras 4.- Bibliografía 1

2 1.- INTRODUCCIÓN La IA consiste en recolectar semen de un padrillo y depositarlo en el útero de la yegua, sin la intervención del macho. Como toda técnica presenta ventajas y desventajas. Entre las ventajas se incluyen mejor aprovechamiento de los reproductores para servir mayor número de yeguas, incluso a aquellas con alteraciones músculo-esqueléticas adquiridas, de temperamento difícil o susceptibles a endometritis, además de favorecer el control de las enfermedades venéreas. Otra ventaja es el aumento de la mejora genética en la crianza. La interrupción de las carreras o la participación en las exposiciones no es necesaria. Con ésta técnica se dispone de semen de buena calidad en zonas alejadas de donde se localizan los donantes, ello evita el traslado de la yegua con o sin potrillo al pié hasta el reproductor, permitiendo de ésta forma extender la temporada de servicio a otro hemisferio. Permite la detección precoz de eventuales problemas del semen. Además, ayuda a mejorar la fertilidad y facilita los programas de selección. En la especie equina es un buen método de control del estrés sexual, que no es tan deseado en el celo del potro y en yeguas vírgenes y, aunque también tiene desventajas y limitaciones, éstas se reducen al mínimo si es practicada por personal cualificado y adiestrado. Por otro lado, es una técnica que tiene una vertiente terapéutica y está indicada en determinados casos de infertilidad; por ejemplo en algunas yeguas viejas y/o con deficiencias uterinas, en las que es contraproducente la cubrición, ya que son incapaces de eliminar la contaminación post coito que induce toda cubrición en un tiempo prudencial para la viabilidad del embrión. En estos animales se recomienda la inseminación, ya que se reduce la intensidad de la respuesta inflamatoria del útero poscubricion, incrementándose así las posibilidades de gestación. Entre las desventajas atribuidas a la IAE se incluyen la reducción del pool de genes, mayor oportunidad de fraudes, riego para las personas que realizan la recolección de semen, y la variación significativa de la calidad del semen disponible. Muchas de estas desventajas pueden ser eliminadas con medidas simples. Uno de los factores que ha influido, entre otros, en el rechazo a inseminar a las yeguas es la creencia de que es menos eficaz que la monta del caballo porque se tiene aún la idea de que, cuanto más cubra el caballo a la yegua, con más seguridad se queda ésta preñada. Otro error muy frecuente es comparar la eficacia de la IA en la especie equina con la de vacuno; así, se cree que el semen congelado del caballo es similar al del toro en cuanto a fertilidad y rendimiento espermático. Sin embargo, en la especie equina la fertilidad del semen congelado es muy inferior a la del toro, ya que los espermatozoides son más sensibles a la congelación-descongelación. Esto, unido a que el eyaculado de un caballo fértil no alcanza la concentración y porcentaje de espermatozoides móviles normales de un toro, provoca que el rendimiento de un caballo que congele bien sea muy inferior al de un toro. Así mismo, existen claras diferencias entre los machos en la respuesta a la congelacióndescongelación, de tal modo que aproximadamente sólo un 25-30% de los sementales producen esperma que tiene a la descongelación una aceptable capacidad fecundante, mientras que en el resto se pueden diferenciar los que tienen congelabilidad moderada y mala. Esto, unido a que cada yegua necesita al menos entre dos a tres dosis, según la frecuencia a la que se le someta a exploraciones ecográficas, se comprende que la rentabilidad de la técnica no es tan importante como en vacuno. Sin embargo, con los nuevos métodos de inseminación uterina profunda se está consiguiendo buena fertilidad con dosis que llevan menos cantidad de espermatozoides, con lo cual se pueden inseminar más yeguas por eyaculado. 2

3 2.- RECOLECCIÓN, EVALUACIÓN Y PROCESAMIENTO DEL SEMEN Recolección La recolección de semen se lleva a cabo mediante diferentes técnicas, entre las cuales se encuentran la estimulación manual, vagina artificial (VA) e inducción farmacológica, siendo la VA el método más utilizado. VAGINA ARTIFICIAL: existen varios modelos, todos tratan de imitar las condiciones de temperatura y presión de la vagina de la yegua, estímulos necesarios para desencadenar la eyaculación. -Modelos: Hannover, Missouri, Nishikawa, Cambridge y el polaco. Figura 1: Partes de una vagina artificial Missouri Para la recolección de semen es necesaria la presencia de una yegua en celo (o no), con quistes ováricos o tumores de la granulosa, ovariectomizadas con o sin tratamiento estrogénico. Los padrillos pueden ser entrenados para saltar sobre un maniquí, minimizando el riesgo de accidentes y evitando muchas veces la presencia de la yegua en celo. La recolección puede realizarse tanto en un área cubierta como al aire libre. La monta del macho responde a una cadena de reflejos copulatorios, por lo cual se debe imitar el acto de la monta natural. Pasos a seguir: El primer paso, es el lavado del pene con solución fisiológica (o agua) tibia y posterior secado. Luego, se realiza la excitación previa del macho, acercándolo a la hembra fijada con maneas y protegida. El salto sólo se permite después de la completa erección del pene. El operador se aproxima con la VA, toma el pene y lo desvía ligeramente, permitiendo de esta forma que el macho introduzca el pene en la VA, la cual se debe mantener firme simulando el comportamiento de la yegua. La mano del operador colocada en la base del pene permite reconocer el momento de la eyaculación. Luego del descenso, el pene debe ser higienizado con agua o solución fisiológica tibia. Inmediatamente después de la recolección, el semen es llevado al laboratorio Evaluación Examen macroscópico: - Volumen - Color 3

4 - Consistencia - Olor - ph Examen microscópico: - Motilidad - Concentración - N total de EZ - Relación vivos/muertos - Morfología - Hipo-ósmosis Factores que afectan la conservación Shock térmico Es el conjunto de alteraciones que sufren los espermatozoides cuando son sometidos a un enfriamiento rápido de 20 C a 5 C. Incluyen: alteración y pérdida de la motilidad, reducción del metabolismo, lesión del acrosoma y de la membrana plasmática, y pérdida de componentes intracelulares. Estos efectos son más evidentes en el congelamiento, y pueden ser reducidos controlando los intervalos críticos de temperatura entre 19 C y 8 C, y por medio de la adición de lípidos o proteínas al diluyente del semen. Plasma seminal A pesar de poseer diversas funciones (modula la inflamación inducida por la monta, inhibe la quimiotaxis y la fagocitosis de polimorfonucleares, protegiendo los EZ en el útero de la yegua) el plasma seminal no es el medio ideal para almacenar EZ, al tener un efecto negativo en la motilidad durante la conservación prolongada a bajas temperaturas. La proporción del plasma puede ser reducida mediante dilución, centrifugación o recolección fraccionada del eyaculado con una VA abierta. Centrifugación Método utilizado para separar el plasma seminal de la fase rica en espermatozoides, puede producir una pérdida del 10-20% de EZ en el sobrenadante, reducir la motilidad o aumentar el número de alteraciones morfológicas. Para reducir dichos efectos se puede disminuir la fuerza centrífuga, acortar el tiempo o usar diluyentes en la centrifugación. Diluyentes Contiene componentes protectores que permiten la supervivencia espermática, y aumentan el volumen de la dosis inseminante, pero no deben usarse para compensar la falta de higiene en la recolección o procesamiento del semen Procesamiento Semen fresco Utilizado para la IA debe emplearse antes de los 30 minutos de recolectado. Si la IA se realiza hasta 2 horas después de la recolección, se aconseja una dilución de 1:1 o 1:2, generalmente con diluyente a base de leche descremada en polvo. 4

5 Semen refrigerado Actualmente, es la técnica más rentable. Entre las dificultades se encuentran la longevidad relativamente corta del semen (24-48hs), y no todos los padrillos producen semen que toleran la refrigeración y conservación. El semen debe ser mezclado con el diluyente pre-calentado (37 C) 2 a 5 minutos después de la eyaculación, en una relación 1:1 o 1:2. La concentración final de 25 a 50 x 10 6 EZ/ml favorece la supervivencia. Una vez diluido, puede ser enfriado de 37 C hasta la temperatura de almacenamiento que varía entre 6 C y 4 C, mediante el uso de unidades de refrigeración (ejemplo: Equitaner R, mantiene la temperatura 4 C a 6 C por 36hs aprox.). Para IA se emplea entre 10 y 25 ml de semen refrigerado (dosis de 250 a 500 x 10 6 EZ con movimiento progresivo). Semen congelado La criopreservación del semen implica almacenarlo por debajo de 0 C, utilizando normalmente al nitrógeno líquido (-196 C). El problema, es la sobrevivencia espermática después de la descongelación, que está limitada al 50%. Sumado a esto, otro factor es la variación en la congelabilidad del semen entre padrillos. La dilución del semen a ser congelado es 1:1 o 1:2, y sigue los mismos criterios utilizados para refrigerar. Para la IA está indicada una dosis de 250 x 10 6 EZ motiles en pajuelas de 0,5ml, pero existen diversas opiniones utilizando dosis entre 400 y 800 x 10 6 EZ/ml. 3.- INSEMINACIÓN ARTIFICIAL EN EQUINOS Selección de yeguas Se indica un examen ginecológico a toda yegua destinada a la IA, con el fin de valorar la integridad anatómica y funcional del aparato reproductor, descartando aquellas que presenten alteraciones que reduzcan la fertilidad, o tratándolas cuando sea necesario, para mejorar las perspectivas de concepción Manejo en la Inseminación Cuando se emplea la inseminación artificial es necesario contar con especialistas en reproducción equina que determinen si la yegua es apta para ser inseminada y, si lo fuera, deberán determinar el momento óptimo, coordinando la inseminación con la petición del esperma al centro correspondiente o elaborando la dosis de esperma refrigerado. Si se emplea esperma congelado no es necesaria esta última fase, ya que las dosis sólo se descongelan en el momento de su utilización Momento de la Inseminación El manejo reproductivo de la yegua que va a ser inseminada es diferente al de hembras de otras especies, ya que tiene características propias en su actividad ovárica y sexual que determinan un celo muy largo, con máxima fertilidad al final del mismo. La inseminación debe ser realizada durante el estro, lo más próximo posible a la ovulación, con celo natural o inducido con análogos de la prostaglandina. La exploración rectal mediante ecografía de sus ovarios y útero, repetida durante el tiempo del celo, es necesaria para determinar el momento más indicado de la IA, valorando el aspecto del folículo preovulatorio, midiendo su tamaño y forma, grosor de sus paredes y ecogenicidad del sedimento del líquido folicular. Cuando se emplea esperma congelado, se 5

6 es aún más estricto en la selección y manejo de la yegua, llegando a someterla a exploraciones ecográficas seriadas cada seis horas. Además, el momento para realizar la inseminación artificial dependerá del tipo de esperma. Con refrigerado se realiza normalmente por exploración rectal ecográfica del aparato reproductor para identificar en un ovario la presencia de un folículo preovulatorio (FP), de tal manera que si está en celo y/o tiene un FP se insemina por primera vez y se repite a las 24 horas hasta que termine el celo (Palma, G.: 24hs antes a 12hs después de la ovulación). El porcentaje medio de fertilidad obtenido es del 60% o mayor. Sin embargo, cuando se quiere inseminar con esperma congelado conviene que la dosis se deposite en el útero entre las 6-8 horas anteriores a la ovulación o las 6 posteriores (Palma, G.: 12hs antes a 12hs después de la ovulación). Para poder predecir el momento de la misma es imprescindible el examen ecográfico seriado del ovario activo. La fertilidad del congelado varía mucho entre donantes (20-100%) y está influido por la hembra y la técnica de inseminación Técnica de Inseminación Preparación de la yegua: debe ser fijada, la cola vendada y desviada. La región perineal debe limpiarse y secarse. Preparación del semen: El semen fresco, refrigerado o descongelado se coloca en una jeringa con émbolo plástico (la goma puede ser tóxica para los espermatozoides). La jeringa es fijada a una pipeta de IA. Métodos: a) IA con control manual (rectovaginal): el operador introduce una mano en la vagina, la cual conduce y protege la pipeta, y la otra mano colocada vía rectal sirve como guía. La mano con guante y lubricada se introduce (luego de separar los labios vulvares) a través del vestíbulo; en la extremidad craneal de la vagina se localiza el cérvix, se introduce el dedo índice, y sobre éste se dirige la pipeta hacia el interior del útero, depositando la dosis seminal en el cuerpo o preferentemente en el cuerno del útero. b) Inseminación bajo control visual: mediante la ayuda de un especulo de Polansky y una pinza de Albrechtsen. Tradicionalmente, al inseminar se deja la dosis de semen en el cuerpo del útero. Sin embargo, actualmente, la tendencia es realizar la inseminación intrauterina profunda, porque permite incrementar los porcentajes de fertilidad y reducir la concentración de espermatozoides de la dosis. Esta variante está más indicada cuando se emplea esperma congelado (con menos capacidad fecundante). Resumiendo: Inseminar solo yeguas con muy buena condición corporal bien alimentadas, realizar los chequeos periódicos conforme al protocolo, verificar que el útero tenga algo de edema y crecimiento endometrial, inseminar la yegua cuando el folículo se encuentre entre 35mm y 42 mm. Chequear siempre ovulación y a los 15 días realizar la ecografía para hacer el diagnostico de gestación Perspectivas futuras Bajas dosis El uso de pequeñas dosis inseminantes es importante cuando el número de espermatozoides es reducido, como es el caso de padrillos subfértiles, semen criopreservado o sexado, y tal vez para reducir la incidencia de endometritis pos-servicio. 6

7 Para mejorar la tasa de preñez, se deposita cerca a la papila útero-tubárica del cuerno ipsilateral al ovario que contiene el folículo pre-ovulatorio. Existen 2 técnicas: 1) Inseminación histeroscópica: con la ayuda de un videoscopio. 2) Inseminación con pipeta flexible. Con 1 a 25 x 10 6 EZ con movimiento progresivo en volúmenes entre 20μm a 1000μm (20-200μm semen fresco y μm semen congelado) se obtuvieron buenas tasas de gestación. Inseminación artificial con espermatozoides del epidídimo Esta técnica resulta útil a la hora de preservar el material genético de machos valiosos que mueren o deben ser castrados. También es importante para las especies en vías de extinción, asegurando la variabilidad genética en cautiverios cerrados. El factor limitante es que el volumen total de espermatozoides almacenados en el epidídimo es frecuentemente bajo para inseminar. En las 2 colas del epidídimo de un padrillo normal es posible obtener 50 a 60 x 10 9 EZ. Los epidídimos pueden ser transportados en los testículos a 4 C durante 72hs a 96hs postmortem, con poca o ninguna pérdida de la motilidad y/o viabilidad. La recolección se realiza mediante un lavado retrógrado del epidídimo con 10 ml de diluyente; la adición de plasma seminal mejoró la motilidad progresiva inicial, pero no hubo cambios pasadas las 6 hs. Los espermatozoides de la cola pueden ser congelados. A pesar de que hubo una disminución de la motilidad después de descongelados, fue semejante a la observada en el semen eyaculado Cuidar las yeguas luego de inseminadas Una yegua puede quedar preñada con 2 ecografías y una inseminación, siempre que se manejen muy bien las variables, condición corporal, manejo y alimentación. Algunos aspectos a tener en cuenta luego de inseminar las yeguas son: - Alimentación: pasturas, sales, suplementos vitamínicos. - Instalaciones: utilizar cercas eléctricas, los límites de linderos deben ser de madera. - Operarios: realizar periódicos chequeos de rutia en los potreros y linderos. 5.- BIBLIOGRAFÍA - ALONSO, A.; PINTO, M.; GAMBAROTTA, M; MIRAGAYA, M. (2007). Obtención de Preñeces en Equinos por Primoinseminación utilizando Semen Congelado- Descongelado a Dosis. Premio Dirección de Actividades Hípicas 2007 Investigación en Reproducción Equina PALMA, G.A. (2008). Biotecnología de la Reproducción. Segunda Edición. Ed. Repro Biotec, Mar del Plata, Argentina. - Portal de consulta web: - RODRIGUEZ ARTILES, I. (2009). Inseminación Artificial o monta dirigida en la yegua. Profesora Titular de Universidad Departamento de Medicina y Cirugía Animal, Hospital Clínico Veterinario de la Universidad de Córdoba. 7