CITOESQUELETO I PROFESOR JUAN FERNANDEZ

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1 CITOESQUELETO I PROFESOR JUAN FERNANDEZ 2011

2 CELULA EN CULTIVO TEÑIDA CON COOMASSIE AZUL (TINCIÓN DE PROTEINAS) NUCLEO Y RED CITOPLASMATICA

3 LOS COMPONENTES DEL CITOESQUELETO VISUALIZADOS CON DEFERENTES TECNICAS Y EN DIFERENTES LUGARES Filamentos de acina Microtúbulos Filamentos intermedios

4 ESTRUCTURA DE LOS MICROTUBULOS SUBUNIDAD- β ME En rojo: sitios de unión as GTP SUBUNIDAD- α

5 CRECIMIENTO DE MICROTUBULOS DESDE LOS EXTREMOS DE UN AXONEMA (CILIO DESNUDO) EXTREMO(+) Pulso de tubulina marcada EXTREMO(-)

6 TREADMILLING E INESTABILIDAD DINAMICA EN EL MICROTUBULO DE UNA CELULA VIVA (-) (+) Microtúbulos fluorescentes pseudo coloreados verde Alberts et al., Mt. estacionario Treadmilling Inestabilidad dinámica

7 MICROFOTOGRAFIA QUE MUESTRA LA INESTABILIDAD DINAMICA DE LOS MICROTUBULOS EN UNA CELULA VIVA Microtúbulos fluorescentes pseudo coloreados

8 ESTABILIZACION Y DESTABILIZACION DE LOS MICROTUBULOS Alberts et al., 2008

9 POLARIDAD DE LOS MICROTÚBULOS Y DINÁMICA DE SUS EXTREMOS. INESTABILIDAD DINAMICA Crecimiento Catástrofe Rescate Microfotografías electrónicas GTP y estabilidad de los extremos Alberts et al., 2008

10 PROTEINAS ASOCIADAS A LOS MICROTUBULOS, ESTABILIDAD Y ARREGLOS ESTRUCTURALES Nucleación Bloqueo Catástrofe Formación de manojos Unión a otras estructuras Estabilización y ensamblaje Estabilización Unión a filamentos intermedios Alberts et al., 2008

11 DIAGRAMA QUE MUESTRA LA ESTRUCTURA DE UN CENTROSOMA

12 CENTRÍOLO DEL CENTROSOMA DE UNA CELULA PANCREATICA EMBRIONARIA -Triplete de mts (9x3 + 0) -Densidades pericentriolares -Microtúbulos Fawcett, 1966

13 MICROFOTOGRAFIA ELECTRONICA DE UN CENTROSOMA Centríolo y material pericentriolar

14 POLIMERIZACION DE TUBULINA NUCLEADA POR EL COMPLEJO DE ANILLO DE γ-tubulina M.E. de γ-turc γ-turc y microtúbulos

15 ESTRUCTURA DE UN MONOMERO Y DE UN FILAMENTO DE ACTINA Modelo estructural Micr. Elect.

16 CURSO TEMPORAL DE LA POLIMERIZACION DE ACTINA EN UN TUBO DE ENSAYO Sin partidor (nucleador) Con partidor

17 PROTEINAS ASOCIADAS A LOS FILAMENTOS DE ACTINA ESTABILIDAD Y ARREGLOS ESTRUCTURALES Promueve crecimiento Promueve nucleación Previene crecimiento Promueve crecimiento Fragmentación Estabiliza filamento Arreglos estructurales > Alberts et al., 2008

18 DIAGRAMAS Y MICROFOTOGRAFIA ELECTRONICA QUE ILUSTRAN LA NUCLEACION DE ACTINA Similitud estructural Complejo Arp 2/3 y nucleación Nucleación dendrítica

19 MAQUINARIA INVOLUCRADA EN LA NUCLEACION DE ACTINA Dos Remedios et al., 2003

20 MOTILIDAD DURANTE LA LOCOMOCION DE UNA CELULA Cambios de forma generalizados en el desplazamiento de una célula Mitchison y Cramer, 1996

21 QUERATOCITOS MIGRATORIOS DE LA EPIDERMIS DE UN PEZ

22 ACUMULACION DE ACTINA RAMIFICADA EN EL FRENTE DE AVANCE DE UNA CELULA (KERATOCITO DE PECES) (Microscopía electrónica de barrido) Svitkina y Borisy, 2006

23 LOCALIZACION INMUNOFLUORESCENTE E INMUNO-ORO PARA DEMOSTRAR LA DISTRIBUCION DE ACTINA Y DEL COMPLEJO Arp2/3 Queratocito Inmunofluorescencia Queratocito Inmuno-oro (Arp 2/3). M.E. Barrido Fibroblasto Inmunofluorescencia Fibroblasto Inmuno-oro (Arp 2/3). M.E. Barrido Svitkina y Borisy, 2006

24 LOCALIZACION DE COFILINA (VERDE) Y ACTINA (ROJO) EN EL QUERATOCITO DE RANA Queratocito Inmunofluorescencia Actina + ADF-cofilina Queratocito en movimiento Queratocito Inmuno-oro de Cofilina M.E. Barrido Svitkina y Borisy, 2006

25 EFECTO DE RHO, RAC Y CDC 42 (ACTIVADOS) SOBRE LA ORGANIZACION DE LOS FILAMENTOS DE ACTINA (FLUORESCENTES) DE FIBROBLASTOS

26 DIAGRAMA QUE ILUSTRA LOS MECANISMOS MOLECULARES INVOLUCRADOS EN LA NUCLEACION DE ACTINA EN VARIOS PATOGENOS

27 DIAGRAMA Y MICROFOTOGRAFIA DE INMUNOFLUORESCENCIA QUE MUESTRAN EL MOVIMIENTO DE LA BACTERIA LISTERIA MONOCYTOGENES Propulsión por nucleación de actina

28 POLIMERIZACION DE ACTINA EN BOLITAS DE LATEX CUBIERTAS DE Arp 2/3 Y SU MOVIMIENTO EN METIL CELULOSA INSTANTANEAS DE UNA ANIMACION Wiesner et al., 2003

29 INMUNOFLUORESCENCIA DE ACTINA Y DEL COMPLEJO Arp2/3 EN COMETAS FABRICADOS A PARTIR DE BOLITAS DE LATEX Wiesner et al., 2003

30 ACCIÓN DE DROGAS SOBRE MICROTUBULOS Y FILAMENTOS DE ACTINA Alberts et al., 2008

31 INMUNOFLUORESCENCIA DE CELULAS EPITELIALES CON FILAMENTOS DE QUERATINA ASOCIADOS A DESMOSOMAS

32 MICROTOGRAFIAS ELECTRONICAS DE FILAMENTOS INTERMEDIOS Neurofilamentos Filamentos gliales Neurofilamentos Congelación-grabado Micr. Electr.

33 MICROFOTOGRAFIA ELECTRONICA Y DIAGRAMAS QUE MUESTRAN LA ESTRUCTURA DE LOS FILAMENTOS INTERMEDIOS α-hélice Micr. Electr. Doble α-hélice Tetrámero Tetrámeros en tándem Filamento intermedio

34 DINAMICA DE LOS FILAMENTOS INTERMEDIOS: INTERCAMBIO DE FRAGMENTOS O SUBUNIDADES (VIMENTINA Y NEUROFILAMENTOS) Unión extremoextremo: crecimiento Intercalación de subunidades Incorporación de subunidades Liberación de subunidades Colakoglu and Brown, 2009

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