Evaluación preliminar de un repelente comercial a base de aceite de citronela contra picaduras de Aedes aegypti.

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1 Tlamati Sabiduría Volumen 7 Número Especial 1, Septiembre er. Encuentro de Jóvenes en la Investigación de Bachillerato-CONACYT Acapulco, Guerrero de Septiembre 2016 Memorias Evaluación preliminar de un repelente comercial a base de aceite de citronela contra picaduras de Aedes aegypti. Verónica Visca Cocotzin (Becaria). vevico_32@outlook.es Unidad Académica Preparatoria No. 26, Universidad Autónoma de Guerrero. Dr. Ewry Arvid Zárate Nahón (Asesor). aeznx1@hotmail.com Unidad Académica Centro de Investigación de Enfermedades Tropicales, Universidad Autónoma de Guerrero. Introducción Las Enfermedades Transmitidas por Vector (ETV) son un reto de salud pública a nivel global y condicional alrededor del 17% de la carga mundial estimada de enfermedades infecciosas. Se calcula que cerca del 60% del territorio mexicano proporciona condiciones que facilitan la transmisión de las ETV, en donde residen más de 50 millones de habitantes expuestos a contraer y padecer enfermedades vectoriales (Secretaría de Salud 2015). Las enfermedades dengue, chikungunya y zika son transmitidas al hombre por la picadura del vector Aedes aegypti, dichas enfermedades producen una alta morbilidad y mortalidad especialmente en países tropicales y subtropicales (WHO 2015). En la actualidad el dengue se considera como una de las infecciones más prevalentes en el mundo, provocando anualmente alrededor de 100 millones de casos sintomáticos, por otro lado, 837

2 Tlamati Sabiduría Volumen 7 Número Especial 1, 2016 cerca de la mitad de la población mundial está en peligro (Domínguez 2012). Indiscutiblemente, la desigualdad social, el aumento de población, la falta y el poco acceso de agua potable en países menos desarrollados, las migraciones y el aumento de viajes internacionales son factores que determinan la expansión de dicha enfermedad, además de la persistencia tanto del mosquito como del virus. Esta situación ahora facilita la introducción de otras infecciones transmitidas por el mismo vector (Ae. aegypti) ya mencionadas: chikungunya y zika que son enfermedades denominadas olvidadas o desatendidas que comenzaron a emerger y reemerger (Sánchez- González et al. 2016). La Organización Mundial de la Salud recientemente ha alertado de la rápida expansión geográfica del virus Zika, por lo que es un peligro para toda la población y, sin duda, una amenaza para los pacientes con enfermedades crónicas (WHO 2016). Hace casi medio siglo se llegó a pensar que la lucha contra los vectores mediante el uso de insecticidas llegaría a la erradicación de esas enfermedades, sin embargo cada vez es más difícil (Diéguez Fernández et al. 2011). Al no existir una vacuna o quimioterapia efectiva contra dichas enfermedades, la prevención y el control dependen de la reducción del vector, llegando a su posible eliminación. Para el control de vectores se han empleado principalmente insecticidas químicos. Sin embargo, su uso indiscriminado produce efectos notables en la biología del vector que provocan cambios de comportamiento y en las funciones vitales, lo que conlleva a la aparición de resistencia, además de los efectos negativos sobre el ambiente. (Georghiou y Taylor 1977). El estado de Guerrero posee todas las características para que tanto Ae. aegypti, como los virus DENV, CHIKV y ZIKAV, sean transmitidos a la población. Históricamente Guerrero ha tenido gran cantidad de casos de dengue, el año pasado fue de los Estados con más casos de chikungunya en el país y ahora con zika se comienzan a ver brotes fuertes de la enfermedad en varios municipios. Como ya se mencionó el uso exclusivo de insecticidas (adulticidad y larvicidas) no es suficiente para el control del vector y mucho menos para la reducción de las enfermedades que este transmite. Por lo tanto, es necesario otras herramientas, así mismo la participación comunitaria es esencial, de esta manera la población debe asumir un papel activo en la prevención de dichas enfermedades, para ello no basta el patio limpio, también se debe utilizar protección personal, como ropa que cubra la mayor parte del cuerpo, desafortunadamente por las 838

3 Memorias del 3 er Encuentro de Jóvenes en la Investigación de Bachillerato-CONACYT Acapulco, Guerrero de Septiembre 2016 condiciones climáticas de Gurrero esto no es aceptado por la población, sobre todo en la región costera. Los repelentes son otra herramienta más para evitar la picadura del vector. Los hay químicos y naturales, los primeros no son bien aceptados por la población (por irritar la piel, aroma molesto, entre otras), los segundos tienen mayor aceptación, además que pueden ser aplicados a niños e incluso a bebes. Se ha probado una variedad de plantas como repelentes naturales contra mosquitos, de los cuales existen reportes para citronela, cedro, eucalipto, pimienta, limón, geranio, melisa, semillas de soya, árbol de neem y otras (Thavara et al. 2001, Rajkumar y Jebanesan 2005). Expuesto lo anterior, en el presente trabajo se probó la acción repelente del producto Fly Out, el producto contiene una combinación de aceites esenciales naturales, teniendo como ingrediente activo aceite de Citronela (Cymbopogan nardus), este repelente se probó sobre piel humana contra picadura de Ae. aegypti en condiciones de laboratorio. Objetivos 1. Establecer una colonia de Aedes aegypti. 2. Evaluar la actividad repelente de un producto comercial basado en aceite de citronela, contra picaduras de Aedes aegypti. Metodología Producto: Se eligió el producto repelente de insectos, FLY OUT, éste tiene como ingrediente activo aceite esencial de citronela (Cymbopogan nardus). La presentación que se utilizó fue de 30ml con atomizador (fig. 1). La aplicación se realizó colocando el repelente de insectos a una distancia aproximada de 20cm, aplicando mediante el atomizador sobre la mano y el brazo, tal como lo indica la etiqueta, se esperó 2 minutos para comenzar con el ensayo. Aedes aegypti Establecimiento de la colonia. Los huevos de Ae. aegypti se obtuvieron de papeletas guardadas en el laboratorio de cría de insectos de la UA-CIET (fig. 2). Se colocaron diez papeletas con un número no definido de huevos en dos charolas con agua libre de cloro. Las 839

4 Tlamati Sabiduría Volumen 7 Número Especial 1, 2016 charolas de plástico utilizadas miden 400cm 2 de superficie, con 500ml de agua; se utilizó una temperatura promedio de 31 ± 2 ºC, un fotoperiodo de 12:12 L:O, los adultos obtenidos de cada charola se colocaron en jaulas separadas con una humedad relativa (HR) de 75 ± 5%. Figura 1. Repelente FLY OUT de 30ml con atomizador. Figura 2. Papeleta con huevos de Ae. aegypti Alimentación del periodo larval. Las larvas fueron alimentadas con una dieta comercial para peces (concentrados de harina de pescado), la dieta se pulverizó y se agregó a las charolas (fig. 3). Periodo pupal. Las pupas se colocaron en cámaras de emergencia, las cuales se introdujeron a las jaulas. Figura 3. Charola con larvas en distintos estadios de Ae. aegypti. Fase de adulto. Se utilizaron jaulas de 900cm 3 los adultos emergieron y se alimentaron con sangre humana por las mañanas cada 48 horas, con una duración de minutos por jaula; como fuente de energía se utilizó solución de sacarosa al 10% colocada en torundas de algodón, cambiándose diariamente, 840

5 Memorias del 3 er Encuentro de Jóvenes en la Investigación de Bachillerato-CONACYT Acapulco, Guerrero de Septiembre 2016 se colocaron ovitrampas dentro de las jaulas para recuperar los huevos. Una parte de los las hembras emergidas no recibió alimentación sanguínea sólo solución de sacarosa al 10%, estos mosquitos son los que se utilizaron para los ensayos. Ensayos Los ensayos se realizaron mediante la prueba de mano-brazo en la jaula. Para cada ensayo se emplearon jaulas de 30x30x30cm con 20 hembras de Ae. aegypti sin alimentación sanguínea y con 48 a 72 horas de emerger. Antes de cada ensayo el voluntario lavó sus manos y brazos con jabón neutro y agua, una vez seco, se aplicó el producto como lo indica la etiqueta y se esperó 2 minutos para comenzar. Figura 4. Ensayo mediante la prueba mano-brazo. Una vez aplicado el producto, el voluntario introdujo su brazo (hasta el codo) a la jaula, en ese instante se inició el cronómetro (fig 4), el periodo de exposición fue de 20 minutos, con intervalos de 30 minutos de descanso, hasta que ocurriera la primera y segunda picadura. Seguidamente se registró el total de picaduras durante todo el ensayo (100min). Se efectuaron ocho repeticiones, cada una con diferentes grupos de Ae. aegypti. El control negativo fue el brazo de un voluntario sin la aplicación de producto, para el control positivo se utilizó repelente marca Off family de SC Johnson, en presentación de 177ml con atomizador, este repelente tiene como ingrediente activo el Dietil-meta-toluamina (DEET) al 5%. Se estimó el tiempo de protección el cual corresponde al tiempo que transcurre desde la aplicación del producto hasta que ocurra la segunda picadura (Scherck y Mc Govern 1989, Thavara et al. 2001). 841

6 Tlamati Sabiduría Volumen 7 Número Especial 1, 2016 Las pruebas se realizaron en condiciones de laboratorio para disminuir las potenciales variables de confusión. Resultados Los resultados obtenidos muestran que el repelente posee un desempeño bajo. De las ocho repeticiones en dos, la primera picadura ocurrió al minuto uno, prácticamente igual al control negativo (0.5min). El tiempo mayor para la primera picadura fue de seis minutos, en cambio en el control positivo la primera picadura fue al minuto 68. Para la segunda picadura en cuatro repeticiones ocurrió al minuto tres. El tiempo mayor para la segunda picadura fue de 14 minutos, en tanto para el control positivo la segunda picadura fue a los 91minutos (tabla 1). La media para la primera picadura es de 2.4min, y de 5.1min para la segunda picadura de Ae. aegypti. La media de tiempo de protección fue de 7.1min. Tabla 1. Tiempo de picadura y tiempo de protección repelente Fly Out v/s Ae. aegypti. Ensayo Total de hembras 1ra Picadura 2da Picadura Tiempo de Total de (repetición) por ensayo. (min) (min) protección (min) picaduras Control Control En cuanto al total de picaduras se observó que para la primera repetición se registraron 16 picaduras, lo que corresponde al 80% del total de hembras (20), en dos repeticiones picaron 11 mosquitos (55%), en la quinta repetición hay un 20% con un registro de cuatro picaduras solamente. En ningún ensayo picaron las 20 hembras utilizadas pero se observa que en seis de las 842

7 PORCENTAJE Memorias del 3 er Encuentro de Jóvenes en la Investigación de Bachillerato-CONACYT Acapulco, Guerrero de Septiembre 2016 ocho repeticiones picaron al menos el 50% de las hembras (gráfica 1), lo que indica baja protección del repelente evaluado, lo que en la realidad se traduce como un alto riesgo de adquirir cualquiera de los tres virus antes mencionados. En el control positivo el total de mosquitos que picaron fue de dos, durante los 100 minutos que duró la prueba. Lo cual muestra una gran diferencia entre el repelente natural comparado contra el repelente químico. Gráfica 1. Porcentajes del total de picaduras de Aedes aegypti en cada ensayo Control + Control - REPETICIÓN El tiempo de protección (TP) es el principal parámetro para afirmar que un repelente funciona, en el caso del producto Fly Out, se obtuvo para la primera repetición un TP de cuatro minutos, el cual fue el más bajo de toda la prueba. El mayor TP fue de 16min. (gráfica 2). En el caso del control positivo el TP fue de 93minutos, lo cual es aceptable comparado con los cuatro minutos que presento Fly Out. 843

8 TIEMPO DE PROTECCIÓN (MINUTOS) Tlamati Sabiduría Volumen 7 Número Especial 1, 2016 Gráfica 2. Tiempo de protección que brinda el repelente Fly Out en minutos Control + Control - REPETICIÓN Conclusión Los resultados obtenidos son preliminares, por lo que se requiere hacer comparaciones con distintos repelentes, sin embargo, el producto evaluado mediante este trabajo es de muy mala calidad, ya que el tiempo de protección es muy corto, no cumpliendo con los 180min de protección que exige la normativa en cuestión de repelentes contra mosquitos. El repelente Fly Out no es recomendable como medio efectivo de protección contra picaduras de Aedes aegypti, puesto que de ninguna manera brinda el tiempo que se menciona en la etiqueta del producto, que es de seis a ocho horas ( minutos), cuando el mayor tiempo obtenido en los ensayos fue de 16 minutos. A pesar de que el repelente de insectos utilizado tiene buena presentación, es ecológico, y es a base de extractos naturales, no cumple con su función, por lo que se deben buscar otras alternativas, ya sea repelentes que si brinden protección contra las picaduras de Aedes aegypti, ó 844

9 Memorias del 3 er Encuentro de Jóvenes en la Investigación de Bachillerato-CONACYT Acapulco, Guerrero de Septiembre 2016 la utilización de ropa que cubra la mayor parte del cuerpo, o en su defecto permanecer en lugares con libres de mosquitos o que tengan tela mosquitera u otros medios para evitar el contacto con el vector. Referencias bibliográficas Agrela, I. F., Palacios, K., & Herrera, F. Efecto repelente de un extracto alcohólico de Syzygium aromaticum (Eugenia caryophyllata L. MYRTACEAE) contra Aedes aegypti (Linnaeus, 1792) sobre piel humana. Avances en Ciencias de la Salud, 2(2): Cucunubá, Z. M De la epidemia de Zika en Latinoamérica y la toma de decisiones bajo incertidumbre. Revista Salud Uis, 48(2), Diéguez Fernández, L., Cruz Pineda, C., & Acao Francois, L. (2011). Aedes (St.) aegypti: relevancia entomoepidemiológica y estrategias para su control. Revista Archivo Médico de Camagüey, 15(3), Domínguez, J. R Las enfermedades transmitidas por vector en México. Rev Fac Med UNAM, 45(3), Georghiou, G.; Taylor, C Genetic and biological influences in the evolution of insecticide resistance. Journal of Economic Entomology 70 (3): Leyva, M., Marquetti, M. D. C., Scull, R., Tiomno, O., Mesa, A., & Montada, D. (2009). Utilización de aceites esenciales de pináceas endémicas como una alternativa en el control del Aedes aegypti. Revista Cubana de Medicina Tropical, 61(3), Maguiña Vargas, C., Osores Plengue, F., Suárez Ognio, L., Soto Arquiñigo, L., & Pardo Ruiz, K. (2005). Dengue clásico y hemorrágico: una enfermedad reemergente y emergente en el Perú. Revista Médica Herediana, 16(2), Morales, J., Castillo, J., & Luna, I. (2010). Aceite esencial del fruto del noni (Morinda citrifolia: Rubiaceae) como larvicida del mosquito Aedes aegypti (Díptera: Culicidae). Tecnociencia, 12(1), Muñoz, V., Adriana, J., Staschenko, E., Ocampo, D., & Beatriz, C. (2014). Actividad insecticida de aceites esenciales de plantas nativas contra Aedes aegypti (Díptera: Culicidae). Revista Colombiana de Entomología, 40(2),

10 Tlamati Sabiduría Volumen 7 Número Especial 1, 2016 Rajkumar, S. & A. Jebanesan Repellency of volatile oils from Moschosma polystachyum and Solunum xanthocarpum against filarial vector Culex quinquefasciatus Say. Trop. Biomed. 22: Sánchez-González, J. M., Ramos-Remus, C., Jácome-Sánchez, B., García-Ortiz, R., Flores- Ramos, J., & Hernández, F. S. (2016). Virus Zika en México. Revista Latinoamericana de Patología Clínica y Medicina de Laboratorio, 63(1), Schreck, C.E. &. Mc Govern Repellents and other personal protection strategies agains Aedes albopictus. J. Am. Mosq. Control Assoc. 5: Secretaría de Salud (Acceso jul Thavara, U., A. Tawatsin, J. Chompoosri, W. Suwonkerd, U. Chansag & P. Asavadachanukorn Laboratory and field evaluations of the insect repellent 3535 (ethyl butylacetylaminopropionate) and DEET against mosquito vectors in Thailand. J. Am. Mosq. Control Assoc. 17: World Health Organization, Información sobre las enfermedades transmitidas por vectores, (Acceso jul 20, World Health Organization, Enfermedad por virus zika, 2016 (Acceso jul 25,