UNIVERSIDAD VERACRUZANA

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1 UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA MANUAL DE EVALUACIÓN DE SEMEN EN BOVINOS TRABAJO RECEPCIONAL EN LA MODALIDAD DE: T R A B A J O P R Á C T I C O E D U C A T I V O COMO REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER EL TÍTULO DE MÉDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA PRESENTA: JOSÉ NICOLÁS ANGELINO OLIVERA ASESOR: PH D RODOLFO CANSECO SEDANO VERACRUZ, VER. JULIO 2009

2 INDICE GENERAL INDICE DE CUADROS vii ÍNDICE DE FIGURAS.viii AGRADECIMIENTO.xi DEDICATORIA. xii INTRODUCCIÓN... 1 JUSTIFICACIÓN... 4 OBJETIVO GENERAL... 5 OBJETIVOS ESPECÍFICOS... 5 METODOLOGÍA... 6 DESARRLLO DEL TEMA ANATOMÍA REPRODUCTIVA DEL TORO... 7 TESTÍCULOS... 7 EPIDÍDIMO... 8 LOS CONDUCTOS EFERENTES Y EL CANAL EPIDIDIMARIO... 9 ESCROTO LAS VESÍCULAS SEMINALES PRÓSTATA URETRA iii

3 GLÁNDULA BULBO URETRAL PENE MÚSCULOS RETRACTORES DEL PENE ESPERMATOGÉNESIS ESPERMATOCITOGÉNESIS ESPERMIOGÉNESIS SEMEN DEFINICION DE ESPERMATOZOIDE MORFOLOGIA DEL ESPERMATOZOIDE 21 EXAMEN FÍSICO GENERAL EXAMEN DE ÓRGANOS SEXUALES EXTERNOS EXAMEN GENITAL EXTERNO EXAMEN DEL ESCROTO EXAMEN DE TESTÍCULOS EXAMEN DE EPIDÍDIMOS EXAMEN DE PENE: EXAMEN DE ÓRGANOS SEXUALES INTERNOS TÉCNICA: PALPACIÓN DE VESÍCULAS SEMINALES PALPACIÓN DE LAS ÁMPULAS iv

4 DESCRIPCIÓN DE LOS MÉTODOS PARA LA COLECCIÓN DE SEMEN COLECCIÓN DE SEMEN CON VAGINA ARTIFICIAL (VA) TÉCNICA DE RECOLECCIÓN DE SEMEN CON VAGINA ARTIFICIAL. (VA) COLECCIÓN DE SEMEN POR ELECTROEYACULACIÓN EQUIPO TÉCNICA PARA LA RECOLECCIÓN DE SEMEN POR ELECTRO EYACULACIÓN: COLECCIÓN DE SEMEN USANDO MASAJE PROSTÁTICO EVALUACIÓN DEL SEMEN CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS VOLÚMEN DENSIDAD Y COLOR CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS MOTILIDAD O MOVIMIENTO EN MASA MOTILIDAD INDIVIDUAL PROGRESIVA MÉTODOS PARA CALCULAR LA CONCENTRACIÓN O DENSIDAD PARÁMETROS DE COMPOSICIÓN DEL SEMEN INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS REPRODUCTOR POTENCIAL SATISFACTORIO REPRODUCTOR POTENCIAL INSATISFACTORIO v

5 CLASIFICACIÓN APLAZADA CONCLUSIONES. 57 LITERATURA CITADA 58 vi

6 INDICE DE CUADROS cuadro 1. Medida de circunferencia escrotal acuerdo a la edad Cuadro 2. Calificación de la consistencia testicular o tono testicular (tt) cuadro 3. Clasificación densidad y color del semen cuadro 4. Clasificación de motilidad en masa del semen cuadro 5. Calificación descriptiva del movimiento en masa cuadro 6. Evaluación descriptiva de la motilidad individual cuadro 7. Morfología espermática..53 vii

7 INDICE DE FIGURAS Figura 1. Anatomía del aparato genital del toro Figura 2. Espermatogénesis y sus fases. 16 figura 3. Espermiogénesis figura 4. Estructura del espermatozoide figura 5. Toro a evaluar Figura 6. Medición de la circunferencia escrotal figura 7. Evaluación del testículo figura 8. Evaluación de epidídimos Figura 9. Evaluacion del pene 28 figura 10. Palpación de órganos sexuales internos figura 11. Partes de la vagina artificial Figura 12. Inmovilización de la vaca.. 32 figura 13. Lubricación de la vagina artificial (va) figura 14. Llenado con agua entre el tubo de plástico y el látex figura 15. Llenado de aire a la vagina (va) figura 16. Protección de la vagina artificial figura 17. Preparación para la monta figura 18. Monta falsa viii

8 Figura 19. Desviación del pene e introducción a la vagina artificial (va).35 Figura 20. Recolección del semen. 36 Figura 21. Equipo de electroeyaculador Figura 22. Inmovilización del toro (a, b, c.) Figura 24. Medición de la circunferencia escrotal (ce) Figura 25. Vaciamiento de la materia fecal en recto y palpación de las ampollas deferentes Figura 26. Lubricación (a) e introducción de sonda en recto (b) Figura 27. Estimulación del toro Figura 28. Sostener el prepucio e introducir el pene al cono colector Figura 29. Recolección de semen..41 Figura 30. Retiro de la sonda.. 42 Figura 31. Medición (a, b) (c) y evaluación del semen Figura 32. Medición del volumen del semen Figura 33. Movimiento en masa de espermatozoides. (a, b, c.) Figura 34. Evaluación de la motilidad individual (a, b, c.)...48 Figura 35. Equipo de espermatocitómetro...49 Figura 36. Computer assisted semen analysis Figura 37. Cámara de newbauer Figura 38. Conteo de espermatozoides con cámara de newbauer Figura 39. Algunas anormalidades frecuentes en los espermatozoides.53 ix

9 AGRADECIMIENTOS A mis padres quienes me infundieron la ética y el rigor que guían mi transitar por la vida. A mis hermanos, gracias por confiar en mi y que siempre estaremos unidos. Quiero expresar mi agradecimiento a mi asesor de este trabajo práctico al Dr. Rodolfo Canseco Sedano por su incondicionable colaboración para llevar acabo éste trabajo en todo su momento y hora. Al MVZ. Pérez Villanueva por brindarme su amistad y confianza en su clínica. A mis amigos. Medico Iván y Cruz por su confianza y apoyo que me brinda en la clínica. Tavo y Juan, por darme su confianza y amistad y decirles que tienen un amigo que le brindara apoyo siempre. x

10 DEDICATORIA Dedico a este trabajo a mis padres: Constanza Olivera Bautista, Gracias a todo su apoyo brindado desde todos mis estudios y por su confianza incondicional que me ha dado. Esto es tuyo, es tu obra, gracias a tu lucha y no dejarme caer nunca, tu más que a nadie te lo mereces por que sabes algo?...eres grande TE AMO MAMI. Silvano Angelino Pérez, A ti papá, por tus regaños por intentar guiarme y que me has guiado por un camino correcto, te dedico este trabajo con mucho amor, sé que ya no estás pero al saber esto, sé que te sientes muy feliz por lograr la meta propuesta. A mis hermanos; por brindarme siempre sus apoyos, para seguir adelante mis estudios sin ustedes no hubiese logrado nada A mi primo Eddie gracias por tu apoyo brindado, apareciste cuando menos lo esperaba gracias. Gracias a todos, a pesar de los momentos difíciles que hemos pasado,,, pero saben algo??? Se ha logrado lo querido LOS AMO. xi

11 INTRODUCCIÓN La baja tasa anual de nacimientos es un importante punto de estrangulamiento en los sistemas de producción de bovinos, el número de terneros nacidos destetados cada año depende de la fertilidad de las vacas y de los toros. En lo que respecta a los machos, la verificación de un buen desempeño reproductivo después de un periodo de empadre, es un indicador eficiente de la fertilidad de un toro o un grupo de ellos. Cuando un error se debe a la baja capacidad reproductiva de los toros y es detectado después del final de la temporada reproductiva, el daño es irreversible. El punto clave es cómo se pueden identificar a toros fértiles antes de los empadres? La evaluación andrológica es una metodología que puede ser empleada para la identificación a priori de la fertilidad de los toros y a si saber el estado en la que se encuentra el semental. (Galina et al., 2006) La principal función de un semental en un hato, es la de lograr preñar el mayor número de vacas en la temporada de servicio, sobre todo en ambientes tropicales, donde más del 90 % de los sistemas de producción utilizan la monta natural como técnica reproductiva; sin embargo, para lograr este objetivo, el toro, además de un apropiado deseo sexual (libido), debe producir suficientes espermatozoides con excelente viabilidad para garantizar el éxito de la fertilización (Madrid et al., 1992). Existen varias situaciones por las que la capacidad reproductiva de un toro puede ser afectada, como son: El nivel nutricional, topografía del terreno, el 1

12 número de vacas por toro, la edad y enfermedades principalmente. Si los toros están trabajando en potreros con baja producción de forraje, es recomendable una suplementación. Esto probablemente no sea posible en algunos ranchos por lo que otra alternativa será entonces separar a uno o varios toros de las vacas para que descansen por períodos de 15 días a un mes aproximadamente, de modo que se puedan recuperar físicamente. Esto puede aumentar la producción de becerros y reducir la época de monta (Pedroza., 1986). Es conveniente evaluar a un toro al momento de comprarlo o venderlo, de esta manera ambas partes están seguras que en el momento de la operación, el toro funciona adecuadamente (Madrid et al., 1992). En toros que están trabajando, una vez al año (1 mes antes de que comiencen las lluvias o la época de empadre), o bien después de padecer alguna enfermedad febril o estrés. Diversos estudios han mostrado que bajo condiciones tropicales, del 15 al 30% de los toros utilizados para monta natural tienen una calidad de semen no satisfactoria o dudosa, por lo tanto, para evitar toda esta pérdida de tiempo, dinero y esfuerzo, es aconsejable que a todos los toros se les evalúe la capacidad reproductiva cuando mucho un mes antes de que se lleve a cabo la venta. De esta manera, si el toro es vendido con un certificado de fertilidad que sea expedido por un Médico Veterinario Zootecnista con cédula profesional y de preferencia especialista en el área de reproducción animal, se protege tanto el vendedor como al comprador, ya que el primero está certificando que el toro que está vendiendo 2

13 es fértil en ese momento, y el segundo está asegurando que compra un toro que le va a funcionar siempre y cuando lo maneje adecuadamente. 3

14 JUSTIFICACIÓN La evaluación de sementales juega un papel preponderante en la práctica diaria del MVZ dedicado a la reproducción de grandes especies. Antes de comprar o vender un semental es importante asegurarse que el semen es de calidad suficiente para ser utilizado en programas de monta directa. Así mismo, el estudiante de medicina veterinaria que cursa las experiencias educativas de fisiología de la reproducción, reproducción animal y técnica de la reproducción, se enfrenta a la necesidad de aprender a evaluar sementales. Con elaboración de este manual, se tendrá mejor conocimiento y facilidad de acceso a más información sobre la parte reproductiva en la evaluación de semen en bovinos. 4

15 OBJETIVO GENERAL Elaborar un manual de evaluación de semen en bovinos, que apoye a los Médicos Veterinarios dedicados a la labor de reproducción en bovinos y a si mismo como medio de apoyo a los alumnos en la parte de la experiencia educativa de Reproducción Animal y Técnicas de la Reproducción Animal del Modelo Educativo Integral y Flexible (MEIF) de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Veracruzana. OBJETIVOS ESPECÍFICOS 1 Describir la técnica de valoración física del semental. 2 Describir los procedimientos para valorar las características macroscópicas y microscópicas el eyaculado. 3 Describir los parámetros necesarios para diagnosticar si un semental reúne los requisitos para funcionar como reproductor. 5

16 METODOLOGÍA Para la elaboración del manual de evaluación de semen en bovinos, las actividades se realizaron a nivel de campo, donde las técnicas para llevar a cabo la evaluación de los sementales, fueron obtenidas de diferentes fuentes bibliográficas, las cuales se estudiaron para poder obtener una técnica metódica y sencilla. Para realizar las actividades se tenía que trasladar al lugar y llevar a cabo los procedimientos. Una vez identificado al toro, se aisló en un corral o manga, en donde se recabaron sus datos, como: raza, edad, condición física y poder darnos cuenta del estado de salud en el que se encontraba y hacer evaluado. Como medio de apoyo en la parte ilustrativa y para la complejidad del trabajo, se tomaron imágenes fotográficas en cada uno de los pasos de cada de técnicas realizadas. Este proyecto consiste en un documento escrito y una colección de imágenes para cada una de las técnicas realizadas. 6

17 DESARROLLO DEL TEMA ANATOMÍA REPRODUCTIVA DEL TORO TESTÍCULOS Órganos sexuales primarios, que tiene como funciones principales la producción de espermatozoides (función exocrina) y la producción de hormonas esteroides (función endocrina Galina et al., 2006). En los rumiantes son pendulosos, con su eje longitudinal en posición vertical, de localización bilateral. Los testículos están rodeados por una firme capsula de tejido conectivo, la túnica albugínea, por fuera se encuentra la hoja visceral del proceso vaginal del peritoneo como una cubierta serosa de una sola capa. Desde la capsula irradian hacia el interior del testículo pequeños tabiques de tejido conectivo, los septos testiculares que dividen al parénquima testicular en lobulillos, estos tabiques de tejido conectivo se unen entre si en el eje testicular para formar el mediastino del testículo. El parénquima testicular incluye: túbulos seminíferos contorneados, túbulos seminíferos rectos y red del testículo con conductillos eferentes (Konig et al., 2002). Cada lobulillo testicular contiene entre dos y cinco canalículos testiculares contorneados y su función es la formación de células germinales masculinas. La pared de estos canalículos testiculares contiene células de sostén (células de Sertoli) y células del epitelio germinativo, estas últimas durante la 7

18 espermatogénesis se diferencian desde espermátides de la fase acrosómica, de la fase de Golgi y de la fase de maduración hasta convertirse en espermatozoides (Konig et al., 2002). La función de los testículos puede resumirse como: a) Producción de espermatozoides (EZ) o espermatogénesis. b) Producción de andrógenos. EPIDÍDIMO Se fija a lo largo de uno de los bordes mayores del testículo, en la parte caudomedial, y se extiende un poco hacia los dos extremos o polos testiculares (Dyce et al., 2007). Convencionalmente está dividido en tres regiones: Cabeza. Unido firmemente al testículo, ingresan los conductillos eferentes, es densamente contorneado, forma el primer cuerpo del epidídimo. Ésta situado en posición caudal o dorsal con respecto al contorno longitudinal media del testículo (Dyce et al., 2007). Cuerpo. Puede estar menos íntegramente fijado a la superficie del testículo, corre por el borde medial y posterior del testículo. Cola: situada en el polo distal del mismo y almacena una importante cantidad de espermatozoides. Esta fijada con firmeza al testículo por el ligamento propio, la cola del epidídimo reduce su volumen de allí se origina el ducto deferente (Dyce et al., 2007). 8

19 LOS CONDUCTOS EFERENTES Y EL CANAL EPIDIDIMARIO Discurre levemente contorneado, en la mitad del testículo se desplaza en línea recta a lo largo de la superficie testicular medial hacia el cordón espermático hasta llegar al anillo vaginal. Están completamente rodeados por fibras musculares lisas circulares que se engruesan a nivel de la cola y comprenden también fibras longitudinales del mismo tipo. Esta musculatura presenta contracciones peristálticas regulares cada 2-10 segundos que aseguran el transporte de los espermatozoides (EZ) en el epidídimo. Con respecto las funciones epididimarias, se cuenta entre ellas el transporte, la sobrevivencia y la maduración funcional de los EZ. Los cambios en la maduración incluyen: *Adquisición de la capacidad de motilidad progresiva *Condensación final del núcleo y modificaciones en la forma del acrosoma *Formación de puentes disulfuro en las estructuras proteicas *Alteraciones en la naturaleza de la membrana plasmática *Migración de la gota citoplasmática proximal a una posición distal de la pieza intermedia *Disminución en la concentración de O2 para inhibir el metabolismo de los EZ *Reabsorción, fagocitosis y licuefacción de EZ deficientes *Almacenamiento de EZ (Hafez., 2000). 9

20 ESCROTO Cubierta protectora de piel gruesa y pilosa que envuelven a los testículos. Un tabique intermedio divide al escroto en dos compartimientos, uno para cada testículo. Forma parte del mecanismo termorregulador que permite a los testículos mantener una temperatura óptima para la espermatogénesis (Hafez., 2000). LAS VESÍCULAS SEMINALES Se encuentran en posición lateral respecto a las porciones terminales de cada conducto deferente, son compactas y lobuladas. El conducto de las vesículas seminales y el conducto deferente suelen compartir un conducto eyaculatorio común que se abre en la uretra (Hafez., 2000). PRÓSTATA Se encuentra en posición caudal respecto a las glándulas vesiculares y dorsal a la uretra. URETRA Comienza en el orificio uretral interno, en el extremo caudal del cuello de la vejiga y llega hasta el orificio uretral externo en la punta del pene. Revestida por un musculo esquelético capaz de continuar la ola de contracción eyaculativa. Alberga al colículo seminal de la uretra craneodorsal y recibe las secreciones de las glándulas vesiculares y el esperma proveniente de las ámpulas. Además, las aberturas de los conductos prostáticos vacían su 10

21 contenido en esta sección de la uretra antes y durante la eyaculación (Konig et al., 2002). GLÁNDULA BULBO URETRAL Se encuentra en posición dorsal a la uretra. Cerca de su terminación de su parte pélvica. En el toro esta casi ocultas por el músculo bulbo esponjoso. La secreción se estas glándulas no forman parte del eyaculado, ya que sus funciones son básicamente limpiar y lubricar la uretra para el paso del eyaculado (Galina et al., 2006). PENE La raíz se localiza en la región del musculo bulbo esponjoso. El toro tiene un pene fibroelástico, dada su estructura, su tamaño durante la erección varia tanto en diámetro y longitud. A medida que se sigue en dirección ventral, este forma una curva en forma de S o flexura sigmoide. La función de este segmento de unos 25 cm de largo es doblarse cuando el pene esta relajado, lo que permite retraerlo y mantenerlo protegido. Durante la erección, la flexura se endereza y el pene se extiende a los fines de la cópula (Galina et al., 2006). MÚSCULOS RETRACTORES DEL PENE Para facilitar la retracción y extensión del pene. Los músculos retractores pares se contraen durante el reposo y se relajan durante los periodos de excitación sexual. Estos músculos se fijan en la región de la ultima vertebra sacra, en la extremidad 11

22 superior y sobre la cara ventral interna del pene, en posición craneal respecto a la flexura sigmoide (Hafez., 2000). Figura 1. Anatomía del aparato genital del toro. 12

23 ESPERMATOGÉNESIS Es el proceso biológico de la transformación gradual de las células germinales en espermatozoides, durante un periodo de tiempo dentro de los límites de los túbulos seminíferos de los testículos. Este proceso involucra la proliferación celular por divisiones mitóticas, duplicación de cromosomas, recombinación genética, reducción y división meiótica, hasta producir espermátides haploides y la diferenciación terminal de las espermátides en espermatozoides (Knobil et al., 2003). La espermatogénesis incluye dos fases: la espermatocitogénesis, en la cual las espermatogonias sufren división celular hasta transformarse en espermátides y la espermiogénesis, en la que las espermátides sufren cambios morfológicos progresivos y se trasforman en espermatozoides completamente formados. (Hafez., 2000). ESPERMATOCITOGÉNESIS Es la suma de las divisiones mitóticas y meióticas de las células espermáticas precursoras (espermatogonios) que ocurren dentro del túbulo seminífero y resultan en la formación de los espermatozoides (Knobil et al., 2003). Y se inicia a partir de la pubertad. El ciclo de la espermatogénesis en el toro adulto dura aproximadamente 61 días (Chenoweth., 1997). Este proceso se lleva acabo en los compartimientos basal y adluminal del túbulo seminífero separados funcionalmente entre si por las células de Sertoli, que 13

24 garantiza el ambiente propicio para que se lleve acabo la espermatogénesis. (Maddocks et al., 1995) Las células de Sertoli están sobre la membrana basal de los túbulos seminíferos y representan el 25% del epitelio tubular. No se dividen después de la pubertad y mantienen contacto con las células vecinas y las células germinales en desarrollo. Así tenemos que las espermatogonias se ubican entre las células de Sertoli y la membrana basal del túbulo y otras están en las criptas inter citoplasmáticas de las células de Sertoli (Knobil et al., 2003). Las células de Sertoli responde a la FSH, regulando el numero de espermatogonias, que entran en el proceso de división celular y juegan un papel importante en la elongación nuclear y en la formación del acrosoma en las espermátides (Chenoweth, 1997). Bajo la acción de FSH las células de Sertoli secretan glicoproteínas como transferrina, ceruplasmina, inhibina y proteína transportadora de andrógeno ABP (Griswold, 1995). Durante el desarrollo embrionario, las células germinales primordiales emigran desde la región del saco vitelino del embrión hacia las gónadas no diferenciadas. Después de llegar a la gónada fetal, las células primordiales se dividen varias veces, formando los gonocitos. En el macho al parecer los gonocitos experimentan la diferenciación precisamente antes de la pubertad para formar los espermatogonios tipo AO, de los cuales se originan las otras células germinales. Los espermatogonios tipo A1 se divide progresivamente para formar los tipos A2, A3 y A4. El tipo A4 se divide una vez mas para formar 14

25 espermatogonios intermedios (tipo In), y de nuevo para formar el espermatogonio tipo B. los espermatogonios tipo B se divide por lo menos una vez, para formar los espermatocitos primarios, los cuales duplican su ADN y experimentan cambios nucleares progresivos de la profase meiótica conocida como; proleptoteno, leptoteno, cigoteno, paquiteno y diploteno antes de dividirse para formar los espermatocitos secundarios. Sin una síntesis posterior de DNA, los espermatocitos secundarios se dividen una vez mas para formar las células haploides conocidas como espermátides. El proceso divisional completo de la espermatogénesis desde espermatogonios hasta espermátides requiere unos 45 días (Hafez., 2000). 15

26 Figura 2. Espermatogénesis y sus fases. ESPERMIOGÉNESIS Serie de cambios morfológicos progresivos que sufre las espermátides redondas hasta transformarse en espermatozoides. En este cambio se incluye la condensación de la cromatina nuclear, formación de la cola o aparato flagelar de los espermatozoides y la formación del casquete acrosómico. fases: Las etapas de la trasformación de las espermátides se dividen en cuatro 16

27 De Golgi, de encasquetamiento, acrosómica y de maduración. Fase de Golgi: Se caracteriza por la formación de gránulos pro acrosómicos dentro del aparato de Golgi, la coalescencia de los gránulos en uno solo, la adhesión del granulo acrosómico resultante a la envoltura nuclear, y las etapas tempranas de la formación de la cola en el polo opuesto al de la adhesión del granulo acrosómico. El centriolo proximal se acerca más al núcleo. Se cree que ahí forma una base para la unión de la cola con la cabeza. (Hafez., 2000). El aparato de Golgi produce gránulos lisosomales elaborado desde el núcleo para formar el futuro acrosoma. El sistema acrosómico contiene enzimas hidrolíticas. Fase de encasquetamiento: se caracteriza por la dispersión del granulo acrosomico adherente en la superficie del núcleo de la espermátide. Este proceso continúa hasta que aproximadamente dos tercios de la porción anterior del núcleo de cada espermátide quedan cubiertos por un delgado saco membranoso de doble capa que se adhiere íntimamente a la envoltura nuclear, durante esta fase, los componentes axonémicos de la cola en desarrollo, formados a partir de elementos del centriolo distal, se alargan mas allá de la periferia del citoplasma celular (Hafez., 2000). Fase acrosómica: se caracteriza por cambios en los núcleos, los acrosomas y las colas de las espermátides en desarrollo. Los cambios son facilitados por la rotación de cada espermátide, de modo que el acrosoma se dirige hacia la base de la pared o la pared externa del túbulo seminífero y la cola se dirige hacia la luz. 17

28 Los cambios nucleares incluyen condensación de la cromatina en gránulos densos y remodelación del núcleo, de esferoide ha alargado y aplanado. En este punto de su desarrollo las histonas nucleares son sustituidas progresivamente por proteínas transicionales. El acrosoma íntimamente adherido al núcleo, también se condensa y se alarga en una forma que concuerda con la de este. Estas modificaciones en la forma de núcleo y acrosoma son moldeadas por las células de Sertoli circundantes. (Knobil et al., 2003). Los cambios en la morfología nuclear se acompañan de desplazamiento del citoplasma hacia la parte caudal del núcleo, donde aquel rodea la parte la parte proximal de la cola en desarrollo. Dentro de este citoplasma, los microtúbulos se asocian y forman una vaina cilíndrica temporal llamada manguito que se proyecta en sentido posterior desde el borde caudal del acrosoma, donde rodea laxamente al axonema al axonema. Dentro de este manguito cilíndrico, una estructura citoplásmica especializada el cuerpo cromatoide- se condensa al redor del axonema para formar la estructura anular conocida como anillo citoplásmico. Este anillo se forma cerca del centriolo proximal y después, en una fase subsecuente del desarrollo emigra en sentido posterior a lo largo de la cola. Las mitocondrias, que estaban distribuidas por todo el citoplasma de la espermátide, comienzan a concentrarse cerca del axonema, donde forman la vaina que caracteriza al segmento medio de la cola. (Galina et al., 2006). Fase de maduración: Esta fase comprende la transformación final de las espermátides alargadas en células que serán liberadas en la luz del túbulo 18

29 seminal. Dentro del núcleo, los gránulos de cromatina experimentan condensación progresiva, mientras que las proteínas transicionales son sustituidas por protaminas que se transforman en un material homogéneo que llena de manera uniforme todo el núcleo espermático. Durante la fase de maduración, alrededor del axonema se forman una vaina fibrosa y las nueve fibras gruesas subyacentes. Al parecer dichas fibras se asocian individualmente con los nueve pares de micro túbulos del axonema y son continuas con las presentes en el cuello del segmento conector de la espermátide. La vaina fibrosa cubre el axonema desde el cuello hasta el inicio del segmento caudal. El anillo citoplásmico migra distalmente desde su posición adyacente al núcleo, a lo largo del núcleo, hasta un punto en que mas tarde separara el segmento medio del segmento principal de la cola. Las mitocondrias se empacan en una vaina continua que se extiende desde el cuello hasta el anillo citoplásmico. Durante la última fase de la espermiogénesis, el manguito desaparece y la célula de Sertoli forma entonces el citoplasma restante después de alargarse la espermátide para convertirse en un lóbulo esferoide llamado cuerpo residual. El lóbulo de citoplasma, que permanece unido a la espermátide alargada por medio de un delgado filamento citoplásmico, también esta interconectado con otros cuerpos residuales mediante puentes intercelulares resultantes de la división incompleta de las células germinales durante la espermatocitogénesis. Con la formación del cuerpo residual se completa la maduración final, y las espermátides alargadas están listas para ser liberadas como espermatozoides. (Hafez 2000) 19

30 Figura 3. Espermiogénesis. 20

31 SEMEN Suspensión celular liquida que contienen los gametos masculinos (espermatozoides) y las secreciones de los órganos accesorios sexuales del aparato reproductor masculino, y se mezclan en el momento de la eyaculación. (Knobil et al., 2003.) DEFINICION DE ESPERMATOZOIDE Gametos masculinos que se forman en los túbulos seminíferos de los testículos. Son células alargadas consistentes con cabeza aplanada portadora de núcleo y una cola que es el aparato necesario para la motilidad celular (Knobil et al., 2003). MORFOLOGÍA DEL ESPERMATOZOIDE. Cabeza. La característica principal de la cabeza del espermatozoide es el núcleo aplanado oval que contiene cromatina muy compacta. La cromatina consiste en un complejo formado por acido desoxirribonucleico (DNA) y proteína especiales llamadas protaminas espermáticas. Su número cromosómico y el contenido de DNA nuclear es haploide (Hafez., 2000). Acrosoma. Delgado saco membranoso de doble capa ubicado sobre el núcleo y que se establece en las últimas etapas de la formación del espermatozoide. Esta estructura en forma de casquete, que contiene acrosina, hialuronidasa y otras enzimas hidrolíticas participan en el proceso de la 21

32 fecundación. Este recubre el extremo anterior del núcleo espermático. (Knobil et al., 2003). Cola. Formada por el cuello y los segmentos medio, principal y caudal. El cuello o segmento conector forma una placa basal que embona en una depresión en el extremo posterior del núcleo (Hafez., 2000). La región de la cola comprendida entre el cuello y el anillo citoplasmático es el segmento medio. El centro de este segmento medio, junto con toda la longitud de la cola comprende el axonema. El axonema se compone de nueve pares de micro túbulos dispuestos radialmente alrededor de dos filamentos centrales. El segmento medio esta en disposición 9 mas 2 de los micro túbulos esta rodeado por nueve fibras gruesas o densas que al parecer están relacionadas con los nueve dobletes del axonema. El axonema y las fibras densas asociadas del segmento medio están cubiertos de manera periférica por numerosas mitocondrias. La vaina mitocondrial, dispuesta en un padrón heliocoidal alrededor de las fibras longitudinales de la cola, es la fuente de energía necesaria para la motilidad espermática (Hafez., 2000). El segmento principal, que continúa en sentido posterior desde el anillo citoplásmico y se extiende casi hasta la punta de la cola, esta formado por exonema en el centro y sus fibras gruesas asociadas. La vaina fibrosa da estabilidad a los elementos contráctiles de la cola. El segmento caudal, posterior a la terminación de la vaina fibrosa, contiene solo el axonema central cubierto por la membrana plasmática. El axonema es el 22

33 que le da motilidad al espermatozoide. Los pares externos de micro túbulos del patrón 9 más 2 generan las ondas de flexión de la cola por un movimiento deslizante entre pares adyacentes (Hafez., 2000). Figura 4. Estructura del espermatozoide. 23

34 EXAMEN FÍSICO GENERAL Consiste en la evaluación de la condición corporal y estado de salud del toro. Reconociendo que cualquier alteración orgánica compromete la función reproductiva. Así, defectos de la visión, dentadura o alteraciones en la estructura ósea o aplomos (patas y pezuñas) limitan significativamente la función reproductiva y acortan la vida útil de los sementales. Los problemas de visión o dentadura comprometen el desenvolvimiento del animal en condiciones naturales (potrero), detectando las vacas en celo alimentándose inadecuadamente (Molina., 2006). Las alteraciones músculo- esqueléticas limitan los movimientos y la capacidad de monta del toro. Entre los defectos de estructura del tren posterior mas comunes podemos mencionar: debilidad de los corvejones (sentado), patas rectas o de poste y problemas de pezuñas (Molina., 2006). 24

35 EXAMEN DE ÓRGANOS SEXUALES EXTERNOS EXAMEN GENITAL EXTERNO 1. Introducir el semental a la manga de manejo. Figura 5. Toro a evaluar. EXAMEN DEL ESCROTO El escroto y su contenido se observan y palpan exhaustivamente desde atrás con el toro bien sujeto para evitar accidentes, hay que prestar atención a eventuales asimetrías, al desplazamiento de testículos y a la superficie de la piel y pelos del escroto. Se mide la circunferencia escrotal ya que existe una correlación positiva entre la circunferencia escrotal y la producción de espermatozoides. A B Figura 6. Medición de la circunferencia escrotal. (A- B) 25

36 Cuadro 1. Medida de circunferencia escrotal acuerdo a la edad. Circunferencia escrotal mínima recomendada por edad SC (CM) < 15 meses * 30 > 15 < 18 meses 31 > 18 < 21 meses 32 > 21 < 24 meses 33 > (Spitzer., 2000) EXAMEN DE TESTÍCULOS. Los testículos varían en cierto modo respecto a tamaño, consistencia, desplazabilidad, aumento de temperatura, sensibilidad a la presión, forma y situación, aunque su estructura fundamental es la misma. Se les examina por inspección y palpación para esto se rodea la base del saco escrotal desde atrás con una mano y luego con la otra se hace presión con los pulgares se desplaza el testículo hacia abajo hasta que el escroto esté tenso y sin pliegues. La consistencia o tono testicular (TT) se puede palpar con la yema de los dedos y calificarla por una combinación de firmeza y elasticidad en una escala de 1 a 4: 26

37 Cuadro 2. Calificación de la consistencia testicular o tono testicular (TT) acuerdo a la firmeza y elasticidad en una escala de 1 a Muy firme y muy elástico. 2. Firme y elástico (el promedio). 3. Blando y esponjoso. 4. Muy blando y muy esponjoso. Figura 7. Evaluación del testículo. EXAMEN DE EPIDÍDIMOS El examen por inspección y palpación de los epidídimos que sirven para el transporte y maduración de los espermatozoides, se realiza también tomando manualmente un testículo deslizándolo hacia arriba y palpando el epidídimo que se desplaza a lo largo del testículo por la parte medial del mismo, por motivos prácticos se examina la cabeza, cuerpo y cola comparativamente entre ambos lados y luego en conjunto ya que forma una unidad funcional. (Gazitúa., 2004) 27

38 Figura 8. Evaluación de epidídimos. EXAMEN DE PENE: En el pene se busca movilidad, malformaciones, hemorragias, pérdida de sustancia, inflamaciones, adherencias, fracturas. El miembro envainado de tamaño normal tiene su punta en la mitad del trayecto prepucial entre el orificio del prepucio y el cuello del escroto su grosor es de 3 a 7 cm y mide alrededor de cm Y aun en estado flácido tiene una consistencia tensa, firme-elástica. La mucosa normal es húmeda, brillante, rosado pálido hasta rosado rojo. A) Pene en saca corcho B) Frenillo persistente. Figura 9. Evaluación del pene. 28

39 EXAMEN DE ÓRGANOS SEXUALES INTERNOS. TÉCNICA Todas estas glándulas vierten su secreción en la uretra donde en el momento de la eyaculación se mezclan con los espermatozoides para así formar el eyaculado. 1. Colocar un guante de palpar en el brazo a utilizar. 2. Untar lubricante al guante. 3. Introducir la mano en el ano del toro en forma de cono para evitar lesiones y dolor. 4. Se retira todo el excremento hasta estar prácticamente limpio y sea más fácil la palpación. Figura 10. Palpación de órganos sexuales internos. PALPACIÓN DE VESÍCULAS SEMINALES Par de glándulas lobuladas de forma irregular que se localizan desde el recto con la punta de los dedos en dirección cráneo-ventral sobre el piso de la pelvis. PALPACIÓN DE LAS ÁMPULAS Son el extremo engrosado glandular de cada conducto deferente y son accesibles a la palpación medialmente a cada glándula seminal. 29

40 DESCRIPCIÓN DE LOS MÉTODOS PARA LA COLECCIÓN DE SEMEN Básicamente existen tres métodos de colección de semen en el toro. 1. Vagina artificial. 2. Electro eyaculación. 3. Masaje de las ampollas deferentes. COLECCIÓN DE SEMEN CON VAGINA ARTIFICIAL (VA). Es el método de elección en el bovino, ya que el eyaculado obtenido es normal y representativo del toro en ese momento. La vagina artificial consta de un tubo rígido de hule, con una válvula exterior; por el lumen del tubo se introduce una manga de látex, la que se dobla sobre los extremos del tubo creando así una recámara de aire. Después, un cono de látex con un tubo de centrifuga graduado se fija a uno de los extremos y al tubo de hule se le introduce agua caliente; Para efectuar la colección de semen, los toros requieren que la VA tenga una temperatura entre 42 y 50ºC. Para la monta se utiliza un señuelo que puede ser una vaca, un macho o un maniquí. Antes de colectar el semen se debe de tener en cuenta dos aspectos importantes: la higiene y el estimulo del semental (Galina et al., 2006). 30

41 d e a b c Figura 11. Partes de la vagina artificial. a. Tubo de recolección, puede ser un tubo de centrífuga graduado de cristal o de plástico o cualquier tubo. b. Tubo de látex (Tubo de Penrose N 1). c. Tubo de plástico rígido (Cuerpo de la vagina). d. Espacio relleno con agua caliente y aire. e. Orificio de entrada del agua y del aire. Antes de la monta se deberá lavar con agua y secar perfectamente el vientre y la zona del prepucio; el mechón de pelos del orificio prepucial estará limpio y los pelos se cortaran a una longitud de aproximadamente 2cm. El método más efectivo para estimular al toro es la monta falsa, que consiste en permitir al semental montar sobre el señuelo y desviar el pene tomando con la palma de la mano la piel del prepucio sin ofrecerle la vagina. Después de algunos segundos de intento de búsqueda de la vagina, el animal desciende; nunca se deberá tocar con la mano la mucosa del pene. En el siguiente intento de monta se coloca la punta del pene desviado en la entrada de 31

42 la vagina; inmediatamente el toro se lanza hacia delante en un empuje final que acompaña a la eyaculación. La monta falsa en el bovino aumenta la calidad del semen en cuanto a volumen, concentración espermática y motilidad (Galina et al., 2006). TÉCNICA DE RECOLECCIÓN DE SEMEN CON VAGINA ARTIFICIAL. (VA) 1. Inmovilizar a la vaca o toro, en el cual el semental realizara la monta para la recolección de semen por la vagina artificial. Figura 12. Inmovilización de la vaca o toro. 2. Lubricar de 10 a 15 cm de la entrada de la VA. Figura 13. Lubricación de la vagina artificial (VA). 32

43 3. Llenar el espacio entre el tubo de plástico y el de látex con agua entre 42 y 45 C. Figura 14. Llenado con agua entre el tubo de plástico y el látex. 4. Agregar aire a través de la válvula de agua para proporcionar la presión adecuada. Figura 15. Llenado de aire a la vagina (VA). 33

44 5. Colocar la camisa aislante que cubre el tubo o cono donde se recibirá el eyaculado para evitar el shock térmico. Figura 16. Protección de la vagina artificial. 6. Pasar al toro delante de otros toros o encerrándolo cerca de otros machos. Esto incrementara el volumen y la concentración espermática. Figura 17. Preparación para la monta. 34

45 7. Dejar dos o tres montas falsas antes de la monta firme. Figura 18. Monta falsa. 8. Cuando el macho monta a la hembra, se introduce la vagina artificial en el pene desviado, lo cual se logra sujetando el pene del prepucio con la mano libre de la persona que va colectar el semen. Figura 19. Desviación del pene e introducción a la vagina artificial (VA). 35

46 9. Se debe observar los movimientos del macho y cuando éste lleve a cabo el empuje de la cadera hacia delante el macho ha eyaculado y se procede a realizar la evaluación del mismo. Figura 20. Recolección del semen. 36

47 COLECCIÓN DE SEMEN POR ELECTROEYACULACIÓN EQUIPO. Los electroeyaculadores están diseñados para estimular los nervios pélvicos simpáticos y parasimpáticos con impulsos de bajo voltaje y amperaje y de esta forma pueden inducir erección peneana y eyaculación. Un sistema de electroeyaculación está constituido por los siguientes componentes: la caja de transporte, la sonda rectal, la unidad de control, el cargador de batería, el cable de energía, el cable de conexión de la sonda, el mango, el cono y el envase de colección. Figura 21. Equipo de electroeyaculador. El cilindro del eletroeyaculador se lubrica y se introduce por el ano en la región rectal ocupando la cavidad pélvica. La emisión del semen se logra al estimular los nervios simpáticos lumbares (hipogástrico) en la parte más anterior de la cavidad pélvica. Los nervios sacros que causan erección y eyaculación están localizados en una zona posterior. Al aplicar el estimulo, este debe ser intermitente, rítmico y su intensidad deberá aumentarse paulatinamente hasta que se produzca la eyaculación. El semen se recoge colocando el embudo con el tubo colector en la punta del glande del pene (Galina et al., 2006). 37

48 TÉCNICA PARA LA RECOLECCIÓN DE SEMEN POR ELECTRO EYACULACIÓN: a. Inmovilizar al toro en una manga o prensa y colocar un poste/tubo detrás del animal. A B C Figura 22. Inmovilización del toro (A, B, C.) b. Rasurar y lavar con agua corriente y secar el prepucio, para evitar contaminación en el momento de recogida del semen. A B C F) Figura 23. Rasurado (A), lavado (B) y secado del prepucio (C) 38

49 c. Como parte del examen físico, medir el diámetro de los testículos a través de una cinta métrica. Figura 24. Medición de la circunferencia escrotal (CE). d. Usando un guante de palpación rectal, se vacía completamente la materia fecal del recto y aplicar durante 1 a 2 minutos un masaje longitudinal sobre las ampollas deferentes y el músculo uretral. Figura 25. Vaciamiento de la materia fecal en recto y palpación de las ampollas deferentes. 39

50 e. Lubricar e introducir la sonda dentro del recto con los electrodos dirigidos ventralmente. A B Figura 26. Lubricación (A) e introducción de sonda en recto (B). f. Introducida la sonda al recto, se le conecta el cable del eletroeyaculador e iniciar lentamente la estimulación eléctrica hasta que el toro muestre una mínima respuesta. Luego aplique estímulos eléctricos consecutivos, aumentando gradualmente la intensidad en cada uno. Cada estímulo debe durar 1-2 segundos, con un descanso de segundo, antes de iniciar el siguiente. Y cuidar que la sonda no se salga debido a los movimientos del toro. Figura 27. Estimulación del toro. 40

51 g. Después de realizar varios estímulos eléctricos, el pene alcanza el estado de erección extendiéndose por fuera del prepucio, y una secreción pre-seminal transparente es emitida. Esta fracción pre-seminal no debe colectarse. El cono colector debe de tener una cubierta aislante de la temperatura y protector contra los rayos solares. Figura 28. Sostener el prepucio e introducir el pene al cono colector. h. Apenas se observe la presencia y salida de la fracción seminal turbia, que es rica en espermatozoides, el cono con el envase de colección se coloca alrededor del glande del pene para recolectar la muestra seminal. Figura 29. Recolección de semen. 41

52 i. Después de colectar la muestra seminal deseada, se suspende la estimulación y se retira la sonda rectal. Figura 30. Retiro de la sonda. j. Se mide la muestra de semen del tubo colector y se lleva al laboratorio para su evaluación y procesamiento. A B C Figura 31. Medición (A, B) (C) y evaluación del semen. 42

53 COLECCIÓN DE SEMEN USANDO MASAJE PROSTÁTICO. Esta técnica requiere dos personas, una para efectuar el masaje rectal y otra para colectar el semen. El toro se ubica y mantiene en una manga o prensa. Después de remover completamente las heces del recto, se aplica un masaje longitudinal repetitivo hacia delante y atrás, principalmente sobre las ampollas deferentes, ocasionando que el semen fluya hacia la uretra pélvica. Al iniciarse la pulsación del músculo uretral, el masaje deberá continuar en sincronía con las pulsaciones. Al mismo tiempo el colector de semen deberá recoger todo fluido que gotee desde el pene o prepucio en un recipiente precalentado. Durante el masaje rectal, la persona que hace la colección puede sujetar el pene extendido por el glande, para facilitar la colección de una muestra seminal libre de contaminantes (Hafez., 2000). 43

54 EVALUACIÓN DEL SEMEN. CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS. VOLÚMEN Se mide directamente en la graduación en mililitro (ml) del tubo de centrifuga o recipiente colector. Figura 32. Medición del volumen del semen. DENSIDAD Y COLOR La Concentración espermática o densidad: es el numero de espermatozoides por mm³ o cc. La concentración normal del semen del bovino es de 800 a 1200 millones de espermatozoides por centímetros cúbicos (ml), o sea, 0.8 a 1.2 millones por mm³. 44

55 Cuadro 3. Clasificación densidad y color del semen. Muy buena (MB): Semen cremoso, granular con 750 a 1,000 millones de espermatozoides/ml o más. Buena (B): Semen lechoso con 400 a 750 millones de espermatozoides/ml Suficiente (S): Semen semejante a leche descremada con 250 a 400 millones de espermatozoides/ml Pobre (P): Semen translúcido con menos de 250 millones de espermatozoides/ml CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS MOTILIDAD O MOVIMIENTO EN MASA Se coloca una gota de semen de 5 mm de diámetro sobre un portaobjetos precalentado, y se observa el movimiento en masa de los espermatozoides usando microscopía de campo claro, el diafragma de campo cerrado y con magnificación de 40x. Los factores que influyen en el movimiento en masa de los espermatozoides son la concentración, el porcentaje de células con movimiento progresivo y la velocidad/vigor del movimiento de los 45

56 espermatozoides. Si uno o más de estos factores se encuentran comprometidos, el movimiento en masa se reducirá. (Baracaldo, Barth ) A B C Figura 33. Movimiento en masa de espermatozoides. (A, B, C.) Cuadro 4. Clasificación de motilidad en masa del semen Muy bueno Bueno Suficiente Movimientos masivo muy marcado y rápidos Movimientos en masa aparente, pero moderados Ondas en movimientos apenas apreciables % 50-69% 30-49% Pobre No hay ondas, semen sin movimiento Menos De 30% 46

57 Cuadro 5. Calificación descriptiva del movimiento en masa. Muy Bueno (MB) Remolinos oscuros y rápidos Bueno (B) Remolinos lentos Sin remolinos, pero movimiento visible Regular (R) de células individuales. Poco o nada de movimiento celular Pobre (P) individual. MOTILIDAD INDIVIDUAL PROGRESIVA Se coloca un volumen de 5 a 7 μl de semen sobre un portaobjetos nuevo y precalentado creando una gota de aproximadamente 3 a 5 mm de diámetro, que luego se cubre con una laminilla cubreobjetos. La muestra es observada con microscopía de contraste de fase y con aumento de x, determinando el porcentaje de células espermáticas con movimiento progresivo lineal. Si el semen está muy concentrado, la muestra puede diluirse con una solución amortiguadora o diluyente de semen antes de colocar el cubreobjetos. 47

58 Cuadro 6. Evaluación descriptiva de la motilidad individual. Muy Buena (MB) % con motilidad progresiva. Buena (B): 60-79% con motilidad progresiva. Regular (R) 40-59% con motilidad progresiva. Pobre (P) < 40% con motilidad progresiva. A B C Figura 34. Evaluación de la motilidad individual (A, B, C.) 48

59 MÉTODOS PARA CALCULAR LA CONCENTRACIÓN O DENSIDAD 1. Hemocitómetro de spencer. Este método es el mismo que se utiliza para el conteo de glóbulos rojos. La dilución se efectúa con la pipeta de glóbulos rojos (dilución 1:100 o 1:200) utilizando una solución salina al 3% con formalina para matar a los espermatozoides y poder contarlos sobre la cuadricula de cámara de Spencer (Hafez., 2000). 2. Espectrofotómetro y fotocolorímetro. Consiste en hacer una dilución del semen 1:40 y medir la transmisión de la muestra en el aparato. Previamente se construirá una curva de calibración con concentraciones conocidas para poder determinar la cantidad de espermatozoides presentes en el eyaculado. 3. Espermatocitómetro o espermatocrito. Figura 35. Equipo de espermatocitómetro. 49

60 Se basa en el principio del hematocrito. Al centrifugar al semen en una micropipeta se separa el paquete celular y el plasma seminal. La relación entre los dos permite calcular el número de espermatozoides en un volumen fijo. 4. Casa computer assisted semen analysis. Caro, eficiente, poco práctico. Figura 36. Computer assisted semen analysis. 5. Método manual (hemocitómetro o cámara de newbauer) Barato, lento, preciso. Figura 37. Cámara de Newbauer. 50

61 Figura 38. Conteo de espermatozoides con cámara de Newbauer. Ejemplo para calcular la concentración El área que se cuenta es de 1 mm. El cubreobjetos está 0.1 mm arriba del piso de la cámara. Por lo tanto el volumen que se está contando es de 0.1 mm3 o 0.1 microlítro. Entonces se multiplica el promedio de las dos cámaras por 10,000 para obtener la concentración por ml de la muestra diluída. O sea que para calcular la concentración del eyaculado original: Se saca el promedio de las dos cámaras. Multiplicarlo por 10,000 Multiplicar eso por el factor de dilución. 51

62 Ejemplo: Si se diluye una muestra con 0.1 ml de semen y 9.9 ml de agua es una dilución 1:100. Supongamos que en las cámaras se contaron 128 y 132 espermatozoides El promedio es 130 x 5 or 650 espermatozoides en el área de conteo (650 células por 0.1 microlitro). Multiplica 650 por 10,000 para obtener la concentración en la muestra diluída (respuesta = 6,500,000) Multiplica 6,500,000 por 100 (el factor de dilución) = 650,000,000 por ml de la muestra original. ph. Se mide con el papel tornasol o con potenciómetro, el Ph normal del semen de bovino es de 6.9 ( ). Morfología. Para observar la cantidad de espermatozoides vivos y las anormalidades, generalmente se mezcla el semen con colorantes y se realiza un frotis. 1. Existen gran cantidad de tinciones, como: eosina-nigrosina, rojo de Bengala, Azul de Victoria, Wells, Williams, Giemsa, tinta china, Fuchina Fenicada, violeta de metilo, anilina y coloración de Karras, preparaciones liquidas (solución de Hancock mezcladas con el semen y observarlas al microscopio de contraste de fase. Por lo común, se cuenta 300 espermatozoides en varios campos y se anotan los alterados y el tipo de alteración. 52

63 Figura 39. Algunas anormalidades frecuentes en los espermatozoides. a). espermatozoide normal; b) Cola enrollada próxima; c) gota citoplasma distal; d)gota citoplásmica proximal; e) cola doblada; f) cabeza anormal pequeña; g) cabeza ó cola suelta; h) cabeza normal pequeña; i) cola enrollada; j) cola quebrada; k) membrana acrosomal perdida; l) contorno cefálico anormal; m) cuello ancho. Cuadro 7. Morfología espermática Morfología mínima recomendada es: 70% de células normales Anormalidades espermáticas Anormalidades espermáticas primarias secundarias Subdesarrollados Cabezas pequeñas normales Formas dobles Cabezas anchas pequeñas y 53

64 Defectos acrosomales (e.g. gigantes Acrosoma en botón) Cabezas normales libres Cabezas angostas Membranas Acrosomales sueltas, Defecto cráter/diadema plegadas, desprendidas Defecto forma de pera Implantación abaxial Contorno anormal Gotas distales Cabezas pequeñas anormales Flagelo doblado simple Cabezas sueltas anormales Terminación del Flagelo plegado Piezas medias anormales Gotas proximales Otras células Flagelo fuertemente plegados o Células epiteliales enrollados Eritrocitos Flagelo accesorios Formaciones de medusa Células precursoras de esperma Células redondas Glóbulos blancos 54