Lo primero que cabe indicar es que la norma internacional ISO (y sus normas relacionadas) ofrecen amplia información sobre este tema.

Transcripción

1 3. TOMA DE MUESTRAS PARA ENSAYOS BIOLÓGICOS Lo primero que cabe indicar es que la norma internacional ISO (y sus normas relacionadas) ofrecen amplia información sobre este tema. Seguidamente se exponen los principales aspectos y consideraciones que se deben tener en cuenta para la toma de muestras, transporte, conservación en el laboratorio y preparación previa a su procesamiento GENERALIDADES La elección de puntos de muestreo representativos, la frecuencia del muestreo, el tipo de muestras tomadas, etc. dependerán del objetivo del estudio. Dependiendo del tipo de investigación y de la manera en que se procesen las muestras, será necesario dividirlas en distintas fracciones que se conservarán y/o almacenarán de diferente manera y se procesarán de distintas formas. Si se tomaran varias muestras (por ejemplo, en distintos puntos o en distintos momentos), éstas pueden combinarse para conseguir una mayor representatividad. Es conveniente que estas muestras se mezclen bien y, si es necesario, se dividan en submuestras. Para obtener submuestras de la misma calidad es conveniente asegurarse de que la muestra original conjunta mantiene su homogeneidad durante el proceso de obtención de las submuestras, por ejemplo, mediante agitación o movimiento constante. Esto es de particular aplicación en el caso de mezclas de dos fases, por ejemplo aguas que contengan partículas es suspensión o suspensiones de algas. Se recomienda usar un aparato de muestreo refrigerado cuando se vayan a combinar varias muestras tomadas en diferentes momentos RECIPIENTES PARA LA TOMA DE MUESTRAS El volumen, la forma y el material de los recipientes dependerán de la naturaleza de la muestra (por ejemplo degradabilidad/estabilidad), del número de replicas, del volumen necesario para la realización de los ensayos y de la necesidad de preservar y almacenar las muestras antes de su procesado. Es conveniente minimizar el tiempo requerido para la congelación y descongelación reduciendo el volumen de muestra, es decir, el tamaño del recipiente. En general, resulta apropiado utilizar recipientes de un litro para la congelación. Para aquellos ensayos que requieran volúmenes grandes, es conveniente que la muestra se reparta en recipientes de volúmenes no superiores a 10 litros.

2 Es conveniente que el volumen total de muestra tomado sea suficiente como para permitir ensayos adicionales o repeticiones. Las submuestras congeladas sobrantes, almacenadas separadamente, se guardarán hasta que se haya efectuado la evaluación final. Para la realización de los ensayos de toxicidad aguda en algas, rotíferos, Thamnocephalus, Artemia y Daphnia es preciso disponer de 2 l de muestra, proporcionando este volumen la oportunidad de realizar una repetición de cada ensayo (si fuera necesario). El material de los recipientes deberá ser químicamente inerte, fácil de limpiar y resistente al calentamiento y a la congelación. Se recomienda utilizar recipientes de vidrio, de polietileno o de politetrafluoretilenno (PTFE) ETIQUETADO, CADENA DE CUSTODIA Y REGISTRO DE PARÁMETROS IN SITU Cada una de las muestras y sus respectivas alícuotas deberán ser referenciadas mediante una etiqueta, de manera clara e indeleble. Para cada muestra se deberá rellenar la hoja de cadena de custodia correspondiente, en la que se recogerán todos los datos relevantes acerca del muestreo, el punto y los resultados de las medidas in situ (ph, Temperatura, oxígeno disuelto, conductividad). Se propone el siguiente modelo: Tabla 1. Cadena de custodia de las muestras DATOS DE LA MUESTRA (a rellenar por el personal de muestreo) Referencia de muestreo: Tipo de muestra: ph: Color Nombre del muestreador: Punto de muestreo: Fecha de muestreo Temperatura (ºC): Conductividad (µs/cm): Firma: O2 disuelto (mg/l): La muestra es una emulsión?:

3 3.4. TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS AL LABORATORIO Las muestras tomadas se protegerán frente al riesgo de ruptura, incrementos de temperatura y contaminación externa. Es conveniente evitar la posible confusión en la identificación de las muestras que se transportan en hielo semifundido, utilizando marcadores o etiquetas resistentes al agua. Se propone un modelo de etiqueta como el mostrado en la Tabla 2. Las muestras deberán llegar al laboratorio de destino en un plazo máximo de 24 h, tras el muestreo. Tabla 2. Datos del transporte de las muestras DATOS DEL TRANSPORTE (a rellenar por el personal de muestro y a la recepción) Servicio de mensajería: Fecha y hora de depósito: Persona que realiza el depósito: Fecha y hora de recepción en el laboratorio: Medios de refrigeración: 3.5. CONSERVACIÓN, ALMACENAMIENTO Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS EN EL LABORATORIO Cuando las muestras lleguen al laboratorio, la persona responsable de su recepción deberá consignar los siguientes datos: Tabla 3. Recepción de las muestras en el laboratorio RECEPCIÓN EN EL LABORATORIO Referencia entrada: Fecha y hora de entrada Persona responsable recepción: Fecha y hora de congelación: Nº de alícuotas:

4 Se recomienda que las muestras destinadas a ensayos biológicos se procesen, preferentemente, sin dilación después de su recogida, para evitar cambios en la composición original como resultados de reacciones físicas o químicas y/o procesos biológicos. La duración máxima de su conservación no debería ser superior a 12 h a temperatura ambiente (máximo 25 ºC). Es conveniente conservar las muestras en la oscuridad, para prevenir el crecimiento de algas. Si no fuera posible realizar el ensayo transcurrido un breve periodo de tiempo tras el muestreo (o tras preparar la muestra), por ejemplo cuando se preparan muestras compuestas, se recomienda enfriar o congelar. El método más común y el más recomendado para la conservación de las muestras de agua residual es enfriar a una temperatura comprendida entre 0 ºC y 5 ºC. Cuando se enfría a esta temperatura y se mantiene en la oscuridad, la mayoría de las muestras son estables durante 24 horas (Norma ISO ). El proceso de enfriamiento debe realizarse lo más pronto posible tras el muestreo, bien sea en el campo, por ejemplo, en cajas con hielo semihundido, o en un refrigerador en el vehículo de transporte. La congelación a temperatura inferior a -18 ºC permite, generalmente, un aumento en el tiempo de conservación (Norma ISO ). En términos generales, los periodos máximos de conservación están comprendidos entre unas cuantas semanas y 2 meses, dependiendo de la estabilidad de las muestras. La experiencia ha demostrado que la calidad del agua residual puede quedar afectada, tanto en su congelación como en su descongelación. Para ensayos biológicos ha de excluirse el empleo de conservantes de carácter biocida. Para estabilizar las muestras tampoco se recomienda la adición de ácidos o bases muy concentrados como, por ejemplo, HCl o NaOH. Hay que remarcar que, en caso de duda, el analista químico y el biológico deben estar en contacto antes de decidir cuál es el método a aplicar para la manipulación y conservación de las muestras. Si las técnicas de conservación para análisis químico y para ensayos biológicos no son compatibles, se debe disponer de submuestras separadas para los distintos propósitos. En cuanto a la preparación de las muestras en el laboratorio para su posterior procesamiento, las muestras de ensayo se deberán obtener a partir de las muestras originales,

5 tras varias etapas específicas para la muestra y el ensayo. Algunas de estas etapas son las siguientes: Descongelación: las muestras congeladas se deben descongelar inmediatamente antes de su utilización. Es recomendable utilizar para ello agua a una temperatura no superior a 25 ºC, aplicando una ligera agitación para evitar sobrecalentamientos locales. Homogeneización: se debe asegurar una distribución regular de todos los componentes solubles y en forma de partículas. Se tomarán las precauciones necesarias para recuperar el estado original de la muestra o, al menos, que ésta sufra la menor alteración posible. Separación de la materia soluble y en forma de partículas: en general, los ensayos biológicos se efectúan sobre la muestra original. Sin embargo, en algunos casos, cantidades elevadas de materia en forma particulada, lodos y sedimentos, interfieren con los requerimientos de comportamiento de los organismos de ensayo. Así, cuando la realización de los ensayos en presencia de partículas cause serios problemas, se recomienda dejar sedimentar la muestra durante un periodo comprendido entre 30 minutos y 2 horas, o efectuar una filtración grosera (> 50 µm), eliminando sólo las partículas gruesas. La interferencia debida a la actividad de las bacterias en la muestra puede estimarse, al menos parcialmente, realizando controles. Todos los métodos de esterilización disponibles, como el tratamiento térmico o con radiación UV o la filtración por membrana (> 2 µm), conlleva un elevado riesgo de efectos colaterales. Ajuste de ph: normalmente es necesario neutralizar las muestras con valores de ph que excedan los límites de tolerancia de los organismos de ensayo. En este sentido, resaltar que los agentes neutralizantes no deben reaccionar con los constituyentes de la muestra ni deben afectar al organismo de ensayo, ya sea por activación o por inhibición. Una vez que las muestras hayan sido preparadas, éstas estarán listas para realizar los ensayos biológicos para los que se ha llevado a cabo todo el proceso descrito.