UNIVERSIDAD NACIONAL DE CÓRDOBA FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS ESCUELA PARA GRADUADOS INSTITUTO DE REPRODUCCIÓN ANIMAL CÓRDOBA (IRAC)

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1 UNIVERSIDAD NACIONAL DE CÓRDOBA FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS ESCUELA PARA GRADUADOS INSTITUTO DE REPRODUCCIÓN ANIMAL CÓRDOBA (IRAC) EVALUACION DE DIFERENTES DOSIS DE CIPIONATO DE ESTRADIOL EN UN PROTOCOLO DE IATF SOBRE EL PORCENTAJE DE PREÑEZ EN VACAS CON CRIA EN EL SEMIARIDO DE SAN LUIS Miranda Salvagno Franco Manuel Trabajo Final Para optar al Título de Especialista en Reproducción Bovina Córdoba- Año 2016

2 INDICE 1. RESUMEN INTRODUCCIÓN... 4 HIPÓTESIS... 6 OBJETIVO GENERAL MATERIALES Y METODO RESULTADOS DISCUSIÓN CONCLUSIÓN AGRADECIMIENTOS BIBLIOGRAFÍA

3 1. RESUMEN Este trabajo se realizó para evaluar el efecto de la dosis de cipionato de estradiol aplicada al finalizar un tratamiento con un dispositivo intravaginal liberador de progesterona y dos intervalos para realizar la inseminación, sobre el porcentaje de preñez a la inseminación artificial a tiempo fijo (IATF). Se utilizaron 124 vacas Polled Hereford con cría, con una condición corporal de 3,5±0,5 (escala 1-5), a las que se les colocó un dispositivo intravaginal liberador de progesterona (DIB 0,5G Syntex) y se les aplicó 2mg de benzoato de estradiol (Benzoato de Estradiol Syntex). Se retiraron los DIB a los 8 días y a la mitad de los animales se le aplicó 0,5mg de cipionato de estradiol (Cipiocyn Syntex) y a la otra mitad 1mg. Simultáneamente se inyectó 523 ug de cloprostenol sódico (Ciclase DL Syntex) y 400 UI de ecg (novormon Syntex) a todos los animales. El día siguiente al retiro de los DIB se hizo detección de celos. La IATF se realizó a las 48 hs de extraídos los dispositivos en aquellos animales que habían presentado celo y a las 56 hs al resto. Se utilizó semen proveniente de 4 reproductores que fueron asignados a cada hembra según criterio del productor. El diagnóstico de gestación fue realizado por medio de ultrasonografía a los 30 días posteriores a la IATF. Los porcentajes de preñez fueron 72,58% y 67,74 % para 0,5 y 1 mg respectivamente. 3

4 2. INTRODUCCIÓN La Inseminación Artificial a tiempo fijo (IATF) es la biotecnología reproductiva que en los últimos años ha mostrado mayor incremento en la tasa de adopción por el sector productivo en los países de la región. En general la tasa de preñez en programas de IATF es cercana al 50% en promedio, resultado por demás aceptable considerando que esto se logra en un día de inseminación, sin detectar el estro y en vacas en anestro. (Menchaca et al., 2013).La detección de estros es relevante cuando se utiliza la IA, ya que la identificación de las hembras que inician el estro mejora substancialmente el porcentaje de gestación (Romero et al., 2009). Su desarrollo en el ganado de carne ha sido lento debido a problemas de detección del estro y de manejo de grandes rodeos. Para evitar los problemas de la detección de celos en rodeos de cría se han desarrollado protocolos de sincronización de la ovulación que permiten además inseminar un gran número de animales en un período de tiempo establecido. El control farmacológico del ciclo estral permite sincronizar el celo y la ovulación en animales cíclicos e inducir la actividad sexual en animales en anestro de manera que el servicio se realice en un período corto. De esta forma, se facilita la implementación y realización de la inseminación artificial (IA) con la mejora en el potencial productivo que esto significa. Además, algunos métodos permiten controlar eficientemente el momento en que se produce la ovulación de manera que posibilitan la implementación de la IATF (Callejas, 2005). Existen actualmente en el mercado dispositivos eficientes que liberan P4 y que son mantenidos en la vagina por un período de 7 u 8 días (Bó et al., 2001). El tratamiento más utilizado consiste en administrar 2 mg de benzoato de estradiol (EB) por vía intramuscular (im) al colocar el dispositivo, momento definido como el Día 0; en el Día 7 u 8, se retira el dispositivo y se aplica PGF im y 24 h después se administra 1 mg de EB im. Se realiza IATF entre las 52 y 56 h de la remoción del dispositivo (Cutaia et al., 2003). 4

5 La función fundamental de la aplicación de estrógenos en el inicio del tratamiento es provocar la atresia del folículo dominante y el recambio folicular (Bó et al., 1995a). Este tratamiento induce la emergencia de un nuevo folículo 4 días más tarde (Bó et al., 1995b) y entonces al momento de la remoción del dispositivo al día 7 u 8, estará presente un folículo relativamente nuevo y un ovocito fértil, lo que ocurre de manera sicrónica en prácticamente todas las vacas. Esta sincronía permite que las vacas alcancen el desarrollo folicular ovulatorio en un período muy similar en todo el rodeo, y el hecho de administrar una dosis de BE 24hs luego del retiro del dispositivo permite inducir y sincronizar aún más el pico de LH y la ovulación. De esta manera es posible realizar la inseminación sin necesidad de detectar estro. La segunda aplicación de EB es fundamental, induce una retroalimentación positiva sobre el hipotálamo produciendo a su vez la liberación de GnRH, la cual es capaz de aumentar los pulsos y la frecuencia de la hormona Luteinizante (LH), logrando con ello que se unifique y se reduzca el tiempo en que se presenta la ovulación. Como alternativa para evitar el encierre adicional para inyectar el BE y simplificar los tratamientos, es posible utilizar ECP como inductor de la ovulación (Menchaca et al., 2013). El ECP es una sal de estradiol con mayor vida media (7 días en circulación) que el EB, por lo que la duración de la acción depende de la absorción y no del metabolismo. El ECP podría ser una alternativa interesante en programas de IATF en vacas y vaquillonas tratadas con dispositivos con P4. Trabajos publicados indican que el uso de ECP al retirar el dispositivo intravaginal con progesterona, produce una mayor dispersión de las ovulaciones respecto de la aplicación de BE 24hs posteriores (Uslenghi et al., 2013). Se ha demostrado que con la aplicación de 0,5 mg de ECP al momento de retirar la fuente de progesterona, se logran porcentajes de preñez similares a los obtenidos con BE. Posteriormente, se realizaron trabajos con el objetivo de evaluar si aumentando la dosis de ECP a 1,0 ó 1,5 mg se podía mejorar la fertilidad, los resultados obtenidos no mostraron diferencias según dosis utilizadas (Butler, 2011). Además la implementación de estos protocolos requiere un gran número de encierres, que en algunos casos es causa de estrés severo si no se toman ciertos recaudos, con la consecuente disminución de la fertilidad y fracaso de la técnica (Uslenghi, 2010). Desde hace varios años se trabaja para reducir el número de encierres y facilitar el manejo de los animales; en este sentido el cipionato de 5

6 estradiol aplicado al retirar los dispositivos es el tratamiento más utilizado, ya que sincroniza las ovulaciones de manera similar a la aplicación de BE (Medero et al., 2012). Teniendo en cuenta que los espermatozoides tardan entre 8 a 12 h en llegar al sitio de fertilización se aconseja IATF entre las 52 y 56 hs. Sin embargo, hay divergencias en la literatura en cuanto al momento que se recomienda realizar la IATF, que varía entre las 48 hs de la remoción del dispositivo hasta las 60 hs. HIPÓTESIS La utilización de una dosis de 0,5mg y 1mg de Cipionato de Estradiol el día 8, en un protocolo convencional no modifica el % de preñez. OBJETIVO GENERAL Evaluar el porcentaje de preñez en vacas con cría utilizando 0,5mg o 1mg de CE al momento de retiro de un dispositivo con p4 en un protocolo de IATF. 3. MATERIALES Y METODO El trabajo se realizó en un establecimiento ganadero ubicado en la provincia de San Luis (Argentina) en el departamento Chacabuco. Se trabajó sobre vacas Polled Hereford con cría (Imagen 1), del cual se extrajeron 124 animales que formaban parte de la cabeza (grupo 1), cuerpo (grupo 2) y cola (grupo 3) de parición, a medida que la totalidad de los vientres en cada grupo superaba 45 días de posparto eran sincronizados. A su vez cada uno fue dividido en dos subgrupos (a y b). Debido a que los grupos fueron dispuestos por separado en tres lotes diferentes, la alimentación también lo fue. El grupo 1 en un lote con pasto llorón, el grupo 2 en un diferido de maíz y el grupo 3 en una pastura de pasto llorón y agropiro. Todos estuvieron con la misma dieta hasta el momento del diagnóstico de gestación, excepto el grupo 2 que se lo cambió a una pastura de llorón. Previo tratamiento de cada rodeo se aplicaron dos dosis de vacunas para prevenir enfermedades reproductivas, con 15 días de diferencia entre ambas aplicaciones y la segunda 15 días antes del inicio del protocolo de IATF. En la figura 1 se esquematiza el tratamiento que fue aplicado. Todas las hembras recibieron un tratamiento para IATF utilizando un dispositivo intravaginal con 0,5g de progesterona (DIB 0,5g Syntex) durante 8 días asociado a una dosis de 2mg de benzoato de estradiol (Benzoato de Estradiol, Syntex) al momento de colocar el dispositivo intravaginal. Al retirar el dispositivo se administró una dosis de 523 ug de cloprostenol (Ciclase DL 6

7 Syntex), 400 UI de ecg (Novormon, Syntex) y a la mitad de los vientres (subgrupo a) se le administró 0,5mg de Cipionato de Estradiol (Cipiocyn, Syntex) y a la otra mitad 1 mg (subgrupo b). Los fármacos inyectables fueron aplicados por vía intramuscular. El día previo a la IA se detectó celo., aquellas que presentaron celo fueron inseminadas a las 48hs de retiro del dispositivo y el resto a las 56 hs. DIB 0,5g + BE2mg Retiro DIB + PG523ug + CE 0,5mg +ecg400ui DC IATF 48hs 56hs Subgrupo a DIB 0,5g + BE2mg Retiro DIB + PG523ug + CE 1mg + ecg 400UI IATF DC 48hs 56hs Subgrupo b Figura 1: Tratamiento aplicado, subgrupo a y subgrupo b. Los celos fueron observados visualmente durante la tarde del día 9 (Imagen 3). Se utilizó semen de 4 toros Polled Hereford adquiridos de dos importantes centros de extracción y venta. La asignación del servicio a cada hembra fue según el criterio del productor. Pasado 15 días de la IA se hizo el repaso por servicio natural con toros propios del establecimiento. A los 30 días de la IA se hizo el diagnóstico de gestación por ultrasonografía. 7

8 Imagen 1: Vaca Polled Hereford con cría al pie en Establecimiento San Jorge. Imagen 2: Trabajo en la manga. 8

9 Imagen 3: Detección de celos. 9

10 4. RESULTADOS Los resultados obtenidos se pueden ver en la Tabla N 1, demostrando que no se encontraron diferencias significativas entre los porcentajes de preñez en ambos tratamientos (P=0,7). Tabla 1: Porcentaje de preñez según dosis de Cipionato de Estradiol utilizada al retiro del dispositivo con p4 intravaginal. Tratamiento Preñadas Porcentaje de preñez Subgrupo a ECP 0,5 mg (n62) 45 72,58 Subgrupo b ECP 1 mg (n62) 42 67, ECP 0,5 mg 72,58 67,74 ECP 1 mg Gráfico 1: Preñeces obtenidas con diferentes dosis de ECP Como modo de entender un poco más en lo que consistió el trabajo a campo, la Tabla y Gráfico 2 muestran los resultados de los diferentes tratamientos. 10

11 Tabla 2: Porcentajes de preñez según tratamiento. Tratamiento %de preñez ECP 0,5mg - IATF 48hs 78,57% ECP 0,5mg - IATF 56hs 71,42% ECP 1mg - IATF 48hs 60% ECP 1mg - IATF 56hs 71,87% ,57 71,428 71, hs 56hs 0 ECP 0,5mg ECP 1mg Gráfico 2: Porcentajes de preñez con diferentes dosis de ECP y momentos de inseminación. 5. DISCUSIÓN A pesar que el ECP (sal de estradiol con mayor vida media que el BE) no es efectivo para sincronizar la emergencia de una nueva onda folicular puede ser utilizado para reducir el número de veces que los animales pasan por la manga, siendo una alternativa posible como inductor de la ovulación. A pesar de que el tratamiento con ECP resulta en muy bajos niveles de estradiol circulante comparado con otros estradioles, 11

12 incrementaría la concentración de estradiol por adición a aquella producida por el folículo preovulatorio en forma suficiente como para estimular la liberación de LH. En este experimental no se comparan las diferentes sales, si no, diferentes dosis de cipionato de estradiol. Se sometieron al tratamiento vacas Polled Hereford con cría al pié, el porcentaje de preñez a la IATF no fue afectado significativamente por la utilización de dos dosis de ECP (0,5mg o 1mg) al momento del retiro del dispositivo con progesterona, obteniendo porcentajes de preñez adecuados. Si bien los ensayos realizados por otros autores están hechos sobre vaquillonas, los resultados son coincidentes, como Butler et al.,(2011), donde utilizaron 100 vaquillonas Angus de 24 meses de edad, con una condición corporal de 3,5 (escala 1-5), a las que se les colocó un dispositivo intravaginal liberador de progesterona (DIB 0,5 g Syntex) y se les aplicó 2 mg de benzoato de estradiol (Benzoato de Estradiol Syntex). A los 8 días se retiraron los DIB y se asignaron al azar a dos grupos de 50 vaquillonas, a los que se aplicó respectivamente 0,5 ó 1,0 mg de cipionato de estradiol (Cipiosyn Syntex). Simultáneamente se inyectó 500 µg de cloprostenol sódico (Ciclase DL Syntex) en ambos grupos. La IATF se realizó entre las hs después de retirados los DIB. La tasa de preñez fue de 54 y 56 % para 0,5 y 1,0 mg respectivamente (P > 0,05). Concluyeron que no es necesario un enrrasado perfecto de la dosis a administrar, existiendo una flexibilidad de la misma en la que no se verá afectado el resultado de la fertilidad. Por otro lado, Uslenghi et al., (2010) evaluaron el efecto del uso de 0,5mg de ECP, 1 mg de ECP en el momento de retiro de dispositivos o BE a las 24 hs, en el porcentaje de preñez en 79 vaquillonas de 15 meses de edad y concluyeron que las dosis de ECP son igualmente efectivas que la de BE. Chesta et al. (2009a) trabajando con vaquillonas cruza índicas obtuvieron un 55,5% y 57,4% de preñez cuando utilizaron 0,5 mg y 1 mg de CPE respectivamente. En vaquillonas Holando Argentino de 19 meses de edad, Chesta et al. (2009b) obtuvieron 54,4%, 58,8% y 66,3 % de preñez utilizando BE 24 h, 0,5 mg de CPE y 1 mg de CPE al retiro del dispositivo, respectivamente, sin diferencias significativas entre tratamiento. 12

13 6. CONCLUSIÓN Se concluye que la administración de 0,5 mg o 1 mg de cipionato de estradiol en el momento de retiro del dispositivo intravaginal con P4 no modifica el porcentaje de preñez en vacas Polled Hereford con cría al pie. 7. AGRADECIMIENTOS A Jorge Sanmartino, propietario del establecimiento San Jorge y a su esposa Lidia Kaufman, por la colaboración con el trabajo a campo. A Etchevers Emiliano, Médico Veterinario, por su ayuda en este trabajo. A mis compañeros de la especialidad. A mi familia y a mi novia por estar siempre presentes. A todos aquellos que de alguna u otra manera colaboraron en este trabajo. 13

14 8. BIBLIOGRAFÍA Bó, G.A., Adams, G.P., Caccia, M., Martinez, M., Pierson, R.A., Mapletoft, R.J., 1995ª. Ovarian folicular wave emergence after treatmen with progestagen and estradiol in cattle. AnimReprodSci 39: BO GA, ADAMS GP, PIERSON RA, MAPLETOFT RJ. Exogenous control of follicular wave emergence in cattle. Theriogenology 1995b. Bó, G.A., Cutaia, L., Brogliatti., G.H., Medina, M., Tríbulo, R., Tríbulo, H Programas de Inseminación Artificial a tiempo fijo en ganado bovino utilizando progestágenos y estradiol. Resúmenes Cuarto Simposio Internacional de Reproducción Animal, Huerta Grande, Córdoba., Butler H.M(1), Butler A(1), Echeverry E.(1), Cesaroni, G.C(1) Efecto de la dosis de Cipionato de estradiol al finalizar un tratamiento con progesterona sobre el porcentaje de preñez a la IATF en vaquillonas. Rev. Taurus, Bs As., 13(52): Callejas, S Control farmacológico del ciclo estral bovino. 2 edición Actualización de temas en reproducción animal, pp247. Chesta, P., Brandan, A., Cuestas, G., Quiñones, G., Lozano, P., Tríbulo, H a. Evaluación de diferentes dosis de Cipionato de Estradiol sobre la tasa de preñez en Inseminación Artificial a Tiempo Fijo en vaquillonas de 15 meses de edad. Chesta, P., Filippi, L., Ramos, M., Racca,D., Bó, G. 2009b. Evaluación de las tasa de preñez en protocolos de Inseminación Artificial a Tiempo Fijo (IATF) utilizando diferentes dosis de Cipionato de Estradiol en vaquillonas Holando. 14

15 Cutaia, L. Veneranda, G., Tríbulo, R., Baruselli, P.S., Bó, G.A Programas de Inseminación Artificial a Tiempo Fijo en Rodeos Cría: Factores que lo Afectan y Resultados Productivos. V Simposio Internacional de Reproducción Animal. Pp Madero, S., De Dominicis, O.; Cantallops, F.; Uslenghi, G., Callejas, S Efecto de dos dosis de Cipionato de Estradiol y del rango horario para la IATF sobre la tasa de preñez en vaquillonas. Proyecto. Facultad Cs. Vet UNCPBA. Menchaca, A., Nuñez, R., Wijma, R., Pintos García, C., Fabini, F., De Castro, T Como mejorar la fertilidad de los tratamientos de IATF en vacas Bos Taurus. 10 Simposio Internacional de Reproducción Animal. Pag 110. Menchaca, A., Richard Nuñez., Robert Wijma., Camila García Pintos., Fernando Fabini., Teresa de Castro Como mejorar la fertilidad de los tratamientos de IATF en vacas Bos Taurus. 10 Simposio Internacional de Reproducción Animal. pag 103. Romero-Santamaría, M.,Flores-Mariñelarena, A., García Macías, J., Alfredo Anchondo-Gar.,Rodríguez-Muela, C., Duránmeléndez, L., Jiménez-Castro, J. Sincronización de estros en bovinos con dos fuentes de prostaglandinas Tecnociencia. pp 20. Uslenghi, G.; Chayer, R.; y Callejas, S Efectividad del Cipionato de Estradiol inyectado al final de un tratamiento con progesterona sobre la eficiencia reproductiva. Trabajo presentado en el VIII Simposio Internacional de Reproducción Animal, Córdoba (Argentina). 15

16 Uslenghi G.; González Chaves S.; Cabodevila J,; y Callejas S,. Efecto del CE y de la cantidad de P4 en dispositivo sobre la respuesta ovárica en vacas secas. 10 Simposio Internacional de Reproducción Animal Pág