ESTUDI DE LA INTERACCIÓ CEL.LULAR AMB LA MATRIU EXTRACEL.LULAR I LA SEVA REGULACIÓ EN LA FPI: POSSIBLES VIES PER A INHIBIR LA PROGRESSIÓ FIBROGÈNICA

Transcripción

1 ESTUDI DE LA INTERACCIÓ CEL.LULAR AMB LA MATRIU EXTRACEL.LULAR I LA SEVA REGULACIÓ EN LA FPI: POSSIBLES VIES PER A INHIBIR LA PROGRESSIÓ FIBROGÈNICA Vanesa Vicens Zygmunt 1 Maria Molina Molina 1 Jordi Alcaraz 2 Laboratori de Pneumologia Experimental. IDIBELL. Servei de Pneumologia Hosp. Universitari de Bellvitge 1 Unitat de Biofísica i Bioenginieria. Dpt Ciències Fisiològiques. UB 2

2 HIPÒTESI DE TREBALL El desenvolupament i progressió de la FPI depèn dels canvis biofísics de les cèl.lules i del microambient on creixen Els models d estudi in vitro per fibrosi pulmonar amb cultius cel.lulars actuals (2D) careixen d aquestes característiques físiques OBJECTIUS 1.- Desenvolupar un cultiu cel.lular 3D basat en components pro-fibròtics i factors solubles de la MEC de FPI. 2.- Determinar la duresa i retracció de teixit i cèl.lules. 3.- Estudiar les característiques fibroblàstiques de cèl.lules normals durant el seu creixement en la matriu 3D pro-fibròtica en funció de les condicions aplicades. 4.- Investigar l efecte de tractaments anti-fibròtics en la matriu 3D profibròtica amb cèl.lules fibròtiques fibroblàstiques i epitelials.

3 MATERIAL I MÈTODES Elaboració 3D de matriu de col.lagen I endurida amb glicació no enzimàtica: pre-glicació i post-glicació. Configuració del col.lagen: Microscopi Reflexió Confocal. Mesures duresa: Huang et al, Am J Physiol Cell PHysiol 24 MICROSCOPI DE FORÇA ATÒMICA Posta a punt de tècnica per a valorar la viabilitat dels fibroblastes inmersos dins dels gels. Determinació de la viabilitat cel.lular en els gels glicats: metabolisme cel.lular i tinció cel.lular

4 MRC 1ªSetm MATRIUS PRE-GLICADES 2ªSetm 3ªSetm 4ªSetm Control R mm

5 MRC 1ªSetm MATRIUS POST-GLICADES 2ªSetm 3ªSetm 4ªSetm Control R mm

6 MRC 1ªSetm MATRIUS POST-GLICADES 2ªSetm 3ªSetm 4ªSetm Control R mm

7 KPa DURESA MATRIUS PREGLICADES 1ª- 4ª SETMANA 2,5 2 *** p<.1 **.1<p<.5 *.5<p *** ** 1,5 1,5 1ª semana 2ª semana 3ª semana 4ª semana

8 KPa DURESA MATRIUS POSTGLICADES 1ª - 4ª SETMANA 3,5 3, *** p<.1 **.1<p<.5 *.5<p ** ** 2,5 2, *** 1,5 1,,5, 1ª semana 2ª semana 3ª semana 4ª semana

9 KPa DURESA MATRIUS POSTGLICADES 1ª - 4ª SETMANA 2,5 2, *** p<.1 **.1<p<.5 *.5<p ** ** ** *** *** 1,5 1,,5, 1ª semana 2ª semana 3ª semana 4ª semana

10 FBS 1% FLUORESCÈNCIA FBS 1% FLUORESCÈNCIA FBS 1% FLUORESCÈNCIA FBS 1% FLUORESCÈNCIA FBS % FLUORESCÈNCIA FBS % FLUORESCÈNCIA VIABILITAT CEL.LULAR EN GELS 3D POSTGLICATS FLUORESCÈNCIA EVOLUCIÓ SETMANAL 2on EXPERIMENT FLUORESCÈNCIA EVOLUCIÓ SETMANAL 1ER EXPERIMENT FBSR FBSR5 FBSR15 FBSR3 FBSR24 FBSR FBSR5 FBSR15 FBSR3 FBSR DIA 7 DIA 14 DIA DIA 7 DIA 14 DIA 21 FLUORESCÈNCIA EVOLUCIÓ SETMANAL 2on EXPERIMENT FLUORESCÈNCIA EVOLUCIÓ SETMANAL 1ER EXPERIMENT FBS1R FBS1R5 FBS1R15 FBS1R3 FBS1R24 FBS1R FBS1R5 FBS1R15 FBS1R3 FBS1R DIA 7 DIA 14 DIA DIA 7 DIA 14 DIA 21 FLUORESCÈNCIA EVOLUCIÓ SETMANAL 2on EXPERIMENT FBS1R FBS1R5 FBS1R15 FBS1R3 FBS1R FLUORESCÈNCIA EVOLUCIÓ SETMANAL 1ER EXPERIMENT FBS1R FBS1R5 FBS1R15 FBS1R3 FBS1R DIA 7 DIA 14 DIA 21 DIA 7 DIA 14 DIA 21

11 MATRIUS POSTGLICADES FBS % FBS 1% FBS 1% MATRIUS POSTGLICADES FBS % FBS 1% FBS 1% R mm MRC MRC

12 CONCLUSIONS - La ribosa permet desenvolupar una matriu tridimensional endurida on cultivar cèl.lules. - L enduriment de matriu, viabilitat cel.lular i disposició de les fibres de col.làgena varien en funció de les concentracions utilitzades. - La viabilitat cel.lular millora amb FBS i, amb el que la proliferació cel.lular es manté fins a les 3 setmanes. - La toxicitat cel.lular de la ribosa podria ser pel mateix sucre o per les unions que indueix en la matriu (pendent mateix disseny experiments en 2D).