Estimación del costo de producción de dos técnicas de radioinmunoanálisis en fase líquida para medir progesterona en plasma sanguíneo.

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1 103 Rev Biomed 1998; 9: Estimación del costo de producción de dos técnicas de radioinmunoanálisis en fase líquida para medir progesterona en plasma sanguíneo. Comunicación Breve Rubén C. Montes-Pérez, Victor Pech-Martínez. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autónoma de Yucatán. Mérida, Yucatán, México. RESUMEN. Introducción. La medición de progesterona de origen ovárico, es un procedimiento que permite determinar la funcionalidad reproductiva de las hembras de todos los mamíferos domésticos, inclusive en la mujer. En México, la tecnología del radioinmunoanálisis (RIA) es la más utilizada para medir progesterona sanguínea. Sin embargo, no existe alguna industria mexicana que se dedique a producir estuches comerciales. En el presente trabajo se estimó el costo de producción de dos técnicas de RIA en fase líquida para medir progesterona sanguínea. Material y métodos. A partir de los insumos primarios (anticuerpo, calibrador o analito y trazador) se establecieron y validaron dos técnicas de RIA para medir progesterona sanguínea. La técnica A utilizó anticuerpos antiprogesterona inducidos en conejo y extraí- dos del suero sanguíneo. La técnica B utilizó anticuerpos antiprogesterona inducidos en gallina de postura y extraidos de la yema del huevo. Resultados. La sensibilidad de ambas técnicas de RIA permitió detectar valores relativamente bajos de la hormona, lo suficiente para poder detectar actividad luteal. El costo de producción por tubo (de USD 0.14 a 0.20) disminuyó conforme aumentó el rendimiento del anticuerpo. Discusión. En nuestro medio la producción de anticuerpos contra progesterona para establecer un RIA es una alternativa viable y disminuiría el costo de utilización de esta técnica. (Rev Biomed 1998; 9: ) Palabras clave: Progesterona, radioinmunoanálisis. Solicitud de sobretiros: Dr. Rubén C. Montes-Pérez. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autónoma de Yucatán. Carr. Mérida- Xmatkuil Km. 15.5, Apdo. Postal Itzimná, C.P Mérida, Yucatán, México. Recibido el 29/Julio/1997. Aceptado para publicación el 20/Oct./1997. Este artículo esta disponible en

2 104 Costos de radioinmunoanálisis para progesterona. SUMMARY. Estimation of production costs of two radioimmunoanalysis in liquid stage to measure progesterone in blood plasma. Introduction. Measurement of ovarian progesterone used to determine the functioning of the reproductive system in females of all the domesticated mammals, even in women. In Mexico, the radioimmunoanalysis technique is the most commonly used to measure progesterone in the blood. However, there is no mexican industry producing commercial sets. In this study the cost od two RIA in liquid stage techniques to measure progesterone in the blood was estimated. Material and methods. From the primary inputs (antibody, calibrator or analytics and tracer) two RIA techniques to measure progesterone in the blood were established and evaluated. Technique "A" used antiprogesterone antibodies induced in rabbits and extracted from the blood serum. Technique "B" used antiprogesterone antibodies induced in egg-laying hens and extracted form the egg yolk. Results. The sensibility of both RIA techniques detected relatively low values of the hormone, enough to detect luteal activity. The production cost per tube (0.14 to 0.20 U.S. dollars) diminshed as the yield of the antibody increased. Discussion. In Mexico, the production of antibodies against progesterone to establish a RIA is a viable alternative and would diminish the operating costs of this technique. Key words: Progesterone, radioimmunoanalysis. INTRODUCCIÓN. La medición de progesterona de origen ovárico, es un procedimiento que permite determinar la funcionalidad reproductiva de las hembras de todos los mamíferos domésticos, inclusive en la mujer. Elevados niveles de progesterona sanguínea de manera periódica, indican la presencia de ciclicidad ovárica y por lo tanto, se puede utilizar como indicador de actividad reproductiva (1). Este indicador es importante en zootecnia, porque contribuye a eficientar el manejo reproductivo del ganado doméstico, mediante la determinación de la actividad ovárica de hembras que presentan estacionalidad reproductiva, como sucede en cabras y ovejas. Es útil para confirmar el estro en programas de inseminación artificial o para evaluar el tratamiento hormonal cuando se induce o sincroniza el estro. También es un indicador biológico para diagnosticar la gestación (2). La progesterona se mide principalmente en el suero o plasma sanguíneo y leche, y con menos frecuencia en saliva (3,4), a través de radioinmunoanálisis (RIA) o enzimoinmunoanálisis (EIA). En México, la tecnología del RIA es la más utilizada para medir progesterona sanguínea. Sin embargo, no existe alguna industria mexicana que se dedique a producir estuches comerciales para surtirlo a diferentes tipos de usuarios, como lo serían por ejemplo las clínicas médicas, clínicas veterinarias, institutos de educación superior o institutos de investigación relacionados con el estudio de la reproducción animal. Cuando se utiliza el RIA para medir hormonas esteroides, se puede optar por dos alternativas: comprarla a algún distribuidor que surta los estuches comerciales (también llamados "kits") o establecer la tecnología a partir de los insumos primarios. Las principales industrias que producen los RIA o EIA para medir progesterona u otras hormonas esteroides, son de origen norteamericano o europeo. Esta situación restringe el uso del RIA en México, en parte por la baja capacidad de compra que tiene el usuario para adquirir la tecnología en moneda extranjera, principalmente si esta tecnología llega a ser de uso continuo. Bajo esta condición, la segunda alternativa plantea analizar el costo de producción del RIA a partir de los insumos primarios y determinar si se puede ser accesible a potenciales Vol. 9/No. 2/Abril-Junio, 1998

3 105 RC. Montes-Pérez, V Pech-Martínez. usuarios. El presente informe aborda esta segunda alternativa, en la cual se estimó el costo de producción de dos técnicas de RIA en fase líquida para medir progesterona en plasma o suero sanguíneo. MATERIAL Y MÉTODOS. A partir de los insumos primarios (anticuerpo, calibrador o analito y trazador) se establecieron y validaron dos técnicas de RIA para medir progesterona sanguínea (5). La técnica A utilizó anticuerpos antiprogesterona inducidos en conejo y extraídos del suero sanguíneo. La técnica B utilizó anticuerpos antiprogesterona inducidos en gallina de postura y extraidos de la yema del huevo. El cuadro 1 muestra los valores para cada uno de los criterios de validación según la Agencia Internacional de Energía Atómica (6) obtenidos en las dos técnicas de RIA. Los componentes utilizados para estimar el costo de producción fueron: material biológico y reactivos químicos para preparar los anticuerpos (conejo, gallina de postura, inmunógeno, adyuvantes, y otros materiales más), trazador (progesterona conjugada a I-125), calibradores, insumos secundarios (amortiguador de fosfato salino con gel, carbón activado, reactivos químicos para extraer esteroides del plasma sanguíneo, esteroides para medir especificidad del anticuerpo), equipos y erramientas para realizar la medición de progesterona (como tubos de ensaye, centrífuga, baño de Cuadro 1 Resultados de la validación de dos técnicas de radioinmunoanálisis para medir progesterona en sangre. Técnica Sensibilidad Precisión Especificidad Exactitud A 0.23 ng/ml CV intra 14.7% P4 100% R 2 = 0.93* CV inter 22.7% 170H-P4 1.74% R = 0.96* 200H-P4 0.14% Cortisol 0.02% 11 DesoxC 0.03% 11 DesoxCo 1.67% B 0.27 ng/ml CV intra 19.6% P4 100% R 2 = 0.86* CV inter 22.2% 170H-P4 0.83% R = 0.94* 200H-P4 0.65% Cortisol < 0.01% 11 DesoxC 7.0% 11 DesoxCo 6.0% CV intra es coeficiente de variación intraensayo. 11 DesoxC es 11 desoxicortisol. CV inter es coeficiente de variación interensayo. 11 DesoxCo es 11 desoxicorticosterona. P4 es progesterona. R 2 es coeficiente de determianción. 170H-P4 es 17 alfa hidroxiprogesterona. R es coeficiente de correlación. 200H-P4 es 20 alfa hidroxiprogesterona. * valores significativos (p < 0.05)

4 106 Costos de radioinmunoanálisis para progesterona. Cuadro 2 Rendimiento y costo de producción de dos técnicas de radioinmunoanálisis para medir progesterona en sangre. Técnica Rendimiento de Cantidad de tubos Costo por anticuerpo diluido para trabajar tubo A litros USD 0.14 B litros USD 0.20 maría, refrigerador, termómetro). El procedimiento utilizado para determinar el costo de producción fue a través de control por procesos, mediante el cual se obtiene el costo de producción unitario, es decir, el costo por tubo (7). RESULTADOS Y DISCUSIÓN. En el cuadro 2 se registran los redimientos de anticuerpo de cada una de las fuentes y el costo de producción para cada una de las técnicas de RIA. Los precios están registrados en dólares estadounidenses (USD). La sensibilidad de ambas técnicas de RIA permite detectar valores relativamente bajos de la hormona, lo suficiente para poder reconocer actividad luteal. En animales domésticos, durante la fase folicular, los valores de progesterona sanguínea varían entre 0.1 a 0.5 ng/ml, mientras que en la fase luteal, los valores se extienden de 1.0 a 10 ng/ml (8). La precisión medida como coeficientes de variación intra o interensayo son relativamente altas; sin embargo esto no afecta la exactitud, dado que los valores de progesterona en muestras sanguíneas de ganado bovino obtenidos mediante las técnicas A y B son similares a los encontrados cuando se miden estas mismas muestras con un estuche comercial de origen norteamericano (p < 0.05). Se aprecia en el cuadro 2 que el costo de producción por tubo disminuye conforme aumenta el rendimiento del anticuerpo, que en este caso, es el componente limitante de la tecnología. Si se considera que el costo por tubo de un estuche comercial a precio de 1996 fluctuó entre USD 1.00 y USD 2.00, entonces se puede concluir que producir anticuerpos contra progesterona para establecer el RIA para medir esta hormona en suero o plasma sanguíneo es una alternativa viable y disminuiría el costo de utilización de esta técnica. REFERENCIAS. 1.- Greenspan FS, Forsham PH. Endocrinología básica y clínica. México: El manual Moderno, S.A. de C.V.; p Montes-Pérez RC. Las técnicas de unión para medir hormonas. Rev Biomed 1995; 6: Booth JM. Milk progesterone pregnancy testing in cattle and other species. En: IX Congreso Internacional de Reproducción Animal e I.A. Vol. II. Madrid: Garsi Editorial; p Bourque J, Sulon J, Demey-Ponsart E, Sodoyez JC, Gaspard U. A simple, direct Radioimmunoassay for salivary progesterone determination during the menstrual cycle. Clin Chem 1986; 32: Montes-Pérez RC, Murcia-Mejía C, Zarco-Quintero L. Producción de anticuerpos antiprogesterona a partir de la yema de huevo de gallinas y del suero sanguíneo de cone- Vol. 9/No. 2/Abril-Junio, 1998

5 107 RC. Montes-Pérez, V Pech-Martínez. jos, para ser utilizados en radioinmunoanálisis. Vet Mex 1994; 25: IAEA. Laboratory training manual of radioimmunoassay in animal reproduction. Viena, Austria: International Atomic Energy Agency; p Technical Reports Series No Del Río GC. Introducción al estudio de la contabilidad y control de los costos industriales. 1ª ed. México: Escuela de Comercio y Administración, Universidad Nacional Autónoma de México; p Dobson H. A radioimmunoassay laboratory handbook. Liverpool: Liverpool University Press; 1983.