ESTUDIOS DE EVALUACIÓN DE LA TRANSMISIÓN DEL VIRUS DEL TOMATE DE ÁRBOL

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1 ESTUDIOS DE EVALUACIÓN DE LA TRANSMISIÓN DEL VIRUS DEL TOMATE DE ÁRBOL JUSTIFICACIÓN Jorge A. Bernal E. 1 Alegría Saldarriaga C. José Luis Zapata P. En Antioquía se cultivan alrededor de ha de tomate de árbol principalmente en los municipios de Santa Rosa de Osos y Entrerrios, con una producción estimada en kg/ha/año, cuyo valor aproximado es de unos $ De esta actividad dependen más 220 familias campesinas ubicadas en las veredas de estos municipios. A finales de 1991, se presento un disturbio en las plantaciones ubicadas en el área productora del departamento. Las plantas afectadas manifestaban una gran cantidad y diversidad de síntomas entre éstos; deformaciones foliares, acortamiento de entrenudos además, de moteados y anillos cloróticos en hojas y frutos, y ocasionalmente defoliación prematura en las plantas. Por causa de esta enfermedad se estimaron pérdidas alrededor de $ La tendencia a incrementar el área cultivada, el alto valor de la producción, el uso indiscriminado de pesticidas, los riesgos de contaminación ambiental, los costos de la inversión, la gran demanda del producto y la falta de conocimientos sobre la enfermedad, son motivos más que suficientes para emprender trabajos de investigación que conduzcan a la obtención de conocimientos sobre la etiología, las formas de transmisión, el rango de hospederos y los vectores de la enfermedad, entre otros; para lo cual se requiere plantear estrategias de manejo y prevención. OBJETIVO GENERAL Conocer las formas de transmisión del virus del tomate de árbol. OBJETIVOS ESPECÍFICOS Evaluar diferentes formas de transmisión de la enfermedad a plantas sanas. Evaluar la transmisión de la enfermedad por semilla sexual. Realizar estudios de rango de hospederos. Evaluar la transmisión por herramientas infestadas y la transmisión a plantas clonadas de tomate de árbol. 1 I.A. MSc. Fruticultura e I.A. MSc. Fitopatólogos, respectivamente. COPROICA, Centro de Investigación "La Selva". Km. 7 Vía Las Palmas. 100 Teléfono Fax Código Postal 100 Rionegro, Antioquía.

2 2 MATERIALES Y MÉTODOS LOCALIZACION Los estudios se realizaron en condiciones de invernadero en el municipio de Santa Rosa de Osos, localizado a una altura de m.s.n.m. con una temperatura media de 14 C, una humedad relativa pro medio del 70% y una precipitación promedio anual de 1600 mm; y en un invernadero del C.l. "La Selva" de CORPOICA, localizado, en el municipio de Rionegro (Ant.) a una altura de m.s.n.m., con una temperatura promedio anual de 17 C, y una precipitación de rnm al año. PRUEBA DE TRANSMISIÓN MECÁNICA CON USO DE ABRASIVO Para este experimento, se utilizaron 75 plántulas aparentemente sanas de 30 días de edad provenientes de semilla sexual. Las plántulas se cultivaron dentro de invernadero, protegidas en jaulas antiáfidos; como fuente de inoculo se usaron brotes tiernos de tomate de árbol afectados por la enfermedad (Figuras 1 y 2), los cuales se maceraron en frío e inmediatamente con la ayuda de un aplicador, se depositó el inóculo (Jugo) sobre las hojas de las plántulas sanas, las cuales previamente habían sido asperjadas con carborundum de 600 mesh (abrasivo). Como control se utilizaron plántulas del mismo lote, las cuales se trataron únicamente con el abrasivo y agua destilada estéril. Las plántulas en prueba se llevaron a jaulas antiáfidos, donde permanecieron por espacio de dos meses. Figura 1. Síntomas típicos de la enfermedad en campo

3 3 Figura 2. Deformaciones típicas causadas por virus en el campo PRUEBA DE TRANSMISIÓN MECÁNICA CON HERRAMIENTA (tijera) Se utilizaron 60 plántulas de origen sexual aparentemente sanas distribuidas en 4 grupos de 15 plántulas cada uno. Cada grupo se inoculó haciendo cortes sucesivos de una hoja a cada plántula, para lo cual se utilizó una tijera infestada con savia de plantas de tomate de árbol con síntomas, se consideró cada grupo de 15 plántulas como repetición. Para el grupo de las plántulas testigo, los cortes se realizaron con tijeras estériles. Todo el experimento se protegió en jaulas antiáfidos. TRANSMISIÓN A PLANTAS CLONADAS Plantas provenientes de estacas fueron obtenidas a partir de las ramas de un árbol de tomate de árbol adulto de 1.5 años de edad aparentemente libre de la enfermedad. Con la ayuda de una tijera de podar se procedió a cortar estacas de 75 cm de longitud, las cuales se enraizaron en condiciones de invernadero sobre un substrato compuesto de arena + suelo orgánico estéril (relación 3:1). Cuando las estacas enraizaron se transplantaron individualmente a macetas plásticas con suelo previamente solarizado, proveniente del C.l. "La Selva" (Rionegro- Antioquía), donde no se ha reportado la presencia de la enfermedad, y se llevaron al invernadero de la granja experimental del municipio de Santa Rosa de Osos. Sobre estas plantas, se realizaron pruebas de transmisión mecánica mediante el uso del abrasivo carborundum y extractos de cogollos de plantas de tomate de árbol con síntomas de la enfermedad macerados en frío; se inocularon 40

4 4 f "JF «plantas. Las plantas inoculadas se protegieron en jaulas antiáfidos y se mantuvieron en observación durante el primer semestre de 1997, como control se utilizaron 20 plantas clonadas, las cuales fueron tratadas con agua destilada estéril y carborundum. TRANSMISIÓN POR SEMILLA SEXUAL Plántulas provenientes de semilla sexual, obtenidas de frutos con o sin síntomas, procedentes de plantas afectadas por la enfermedad y plántulas procedentes de semilla sexual de árboles aparentemente sanos, provenientes de zonas donde no se ha reportado la presencia de la enfermedad, fueron evaluadas con el fin de observar la presencia o no de síntomas de la enfermedad. En ambos casos la semilla se fermentó por tres días, luego se enjuagó y se secó a la sombra por 3-4 días. Posteriormente se sembraron en bandejas utilizando suelo esterilizado a 100 C por 30 minutos. Se establecieron cuatro trat amientos: Tratamiento 1. Siembra de 1000 semillas procedentes de plantas con follaje y frutos con síntomas típicos de la enfermedad. Tratamiento 2. Siembra de 1000 semillas procedentes de frutos con síntomas típicos de la enfermedad, pero de plantas libres de síntomas foliares. Tratamiento 3. Siembra de 1000 semillas procedentes de frutos aparentemente sanos, pero obtenidos de plantas con síntomas foliares típicos de la enfermedad. Tratamiento 4. Siembra de 1000 semillas procedentes de plantas aparentemente sanas, provenientes de zonas donde no se ha reportado la enfermedad. Las bandejas semillero se colocaron dentro de jaulas antiáfidos. Dos meses después de la siembra, las plantas fueron transplantadas a macetas individuales, donde se continuaron las observaciones. Las observaciones sobre la presencia de síntomas de la enfermedad, se realizaron durante 10 meses. Para confirmar la sanidad de las plantas obtenidas a partir de semilla sexual se realizó una prueba serológica (ELISA) para dos virus purificados a partir de muestras tomadas de árboles afectados en su follaje y frutos provenientes de la zona de producción de Santa Rosa de Osos. RANGO DE HOSPEDEROS Los estudios se realizaron en el C.l. "La Selva", (Rionegro-Antioquia) en condiciones de invernadero. Se utilizó un juego de 22 plantas indicadoras, inoculando cinco plantas por indicadora y dejando tres como control.

5 5 La inoculación se hizo mecánicamente y en las horas de la tarde, asperjando carborundum de 600 mesh sobre las hojas terminales de cada indicadora; luego se procedió a impregnar savia proveniente de follaje con síntomas de la enfermedad, macerado en agua destilada estéril conservada en frío. Después de inoculadas las plantas se asperjaron con agua y se cubrieron con papel periódico húmedo durante 1 hora, con el fin de mantener la humedad relativa. MICROSCOPIA ELECTRÓNICA En el Laboratorio de Virología del CIAT, a partir de muestras de follaje con síntomas típicos de la enfermedad, se realizaron observaciones al microscopio electrónico, con el propósito de conocer aspectos relacionados con la morfología del agente causal y poder aproximar su identificación, encontrándose partículas vírales alargadas, algunas unidas polarmente (Figura 3). Figura 3. Microfotográfia de una de las partículas virales del Complejo. PRODUCCIÓN DE ANTISUERO En el laboratorio de virología del CIP y a partir de plantas con síntomas típicas de la enfermedad, se observó savia cruda al microscopio electrónico encontrando dos partículas virales de forma diferente, una isométrica (la cual se denominó col 7) y otra alargada (col 11). Estas partículas fueron separadas y posteriormente purificadas e inyectadas en conejos con el fin de producir dos antisueros, y utilizar la prueba de DAS ELISA para detectar plantas portadoras de alguno de los dos virus purificados.

6 6 RESULTADOS Y DISCUSIÓN TRANSMISIÓN MECÁNICA CON USO DE ABRASIVO Las plantas comenzaron a mostrar síntomas de la enfermedad a los cinco días después de la inoculación. Los síntomas empezaron con aclareo de nervaduras, luego clorosis suave que se fue tornando en mosaicos, posteriormente moteado, por último se presentaron rosetas, vejigas o ampollas, deformación foliar y en algunos casos defoliación, necrosis y muerte de la planta (Figura 4). Figura 4. Síntomas posteriores a la inoculación mecánica La expresión de las sintomatologías, transcurridos dos meses de observaciones con sus porcentajes de ocurrencia se presentan en la Tabla 1. Tabla 1. Síntomas expresados por plántulas de tomate de árbol inoculadas mecánicamente. Santa Rosa de Osos (Antioquía) GRUPO SÍNTOMAS PORCENTAJE 0 Asintomático Clorosis, enanismo Clorosis, enanismo, deformación Clorosis, deformación de brotes, mosaico, enanismo Mosaicos, ampollas y deformaciones Defoliación 1.0 TOTAL 100.0

7 7 A los dos meses de la inoculación el 83.5% de plantas expresaron síntomas típicos de la enfermedad. Las plántulas inoculadas mecánicamente presentaron una sintomatología muy similar a la que presentan las plantaciones comerciales afectadas. De acuerdo con los resultados obtenidos, se encontró que la enfermedad que afecta el tomate de árbol se transmitía mecánicamente hasta en un 84.5% empleando como abrasivo carborundum de 600 mesh, (Tabla 1). El mayor porcentaje de plantas afectadas correspondió al grupo de afección 3, con un 23%. El 15.5% de las plantas inoculadas no mostraron ningún tipo de síntomas, sin embargo todas las plántulas inoculadas mostraron inicialmente algún síntoma, los cuales se modificaron o desaparecieron posteriormente, posiblemente debido a la presencia de síntomas fugaces como ocurre cuando la enfermedad pasa del estado agudo al crónico, fenómeno de común ocurrencia en enfermedades de origen viral; o también puede deberse a influencia de factores abióticos como temperatura, o a que se trate de un problema de índole nutricional. TRANSMISIÓN MECÁNICA CON HERRAMIENTA (TIJERA) Esta prueba permitió establecer que la enfermedad también se transmite mecánicamente por herramienta; en este caso con tijeras podaderas. Los síntomas se observaron a partir del día 12 después de la inoculación, y fueron similares a los que presentaron las plantas inoculadas mecánicamente con abrasivo, por lo cual se adoptó el mismo sistema de agrupación; sin embargo la expresión de los síntomas tardó un poco más, posiblemente debido a que con las tijeras se utiliza menos cantidad de inoculo al momento de la inoculación. Los porcentajes de ocurrencia de los diferentes grupos de síntomas se muestran en la (Tabla 2). Se observa que el mayor porcentaje de plantas afectadas está en el grupo 3, con 30.13%. El porcentaje de plantas aparentemente sanas (sin síntomas) fue de 23.44%, lo cual indica que el 76.56% de las plantas inoculadas fueron afectadas por la enfermedad, significando que el uso de herramientas contaminadas es una de las principales formas de diseminación de la enfermedad. La amplia variabilidad de los síntomas expresados por las plantas enfermas también ha sido reportada por varios investigadores, entre estos Martínez (1997). Esta variación puede ser debida a varios factores, como posibles mezclas de virus, variantes del virus, medio ambiente, respuesta genética de las plantas, estado nutricional y edad de la planta, entre otros.

8 8 Tabla 2. Síntomas expresados por plántulas de tomate de árbol inoculadas mecánicamente (tijera). Santa Rosa de Osos (Antioquía) B. GRUPO SÍNTOMAS PORCENTAJE 0 Asintomático Clorosis, enanismo Clorosis, enanismo, deformación Clorosis, deformación de brotes, mosaico, enanismo 4 Mosaicos, ampollas y deformaciones Defoliación 1.33 TOTAL TRANSMISIÓN A PLANTAS CLONADAS Los síntomas de la enfermedad se presentaron a partir de los 60 días después de la inoculación en las hojas nuevas y brotes tiernos de las estacas. Igualmente, los síntomas fueron variables en las plantas inoculadas; y su expresión, muy similar a la observada en las plántulas inoculadas mecánicamente con carborundum y con tijeras infestadas. Los síntomas expresados por las plantas clonadas consistieron en variegados, deformaciones foliares, presencia de ampollas, clorosis intervenal, redes amarillas, engrosamiento de venas y manchas anulares de color morado en las hojas. No todas las plantas exhibieron todos los síntomas, y también se presentaron plantas que no manifestaron síntomas a pesar de haber sido inoculadas (Tabla 3). De las plantas inoculadas en este experimento, el 65.0% expresó los síntomas; y se comportaron de manera similar a las plantas de origen sexual inoculadas mecánicamente. Después de seis meses de observación, los grupos de síntomas predominantes fueron los siguientes: Tabla 3. Síntomas predominantes en plantas clonadas, después de seis meses de la inoculación. Santa Rosa de Osos(Antioquía) GRUPO SÍNTOMAS % 0 Plantas asintomáticas Plantas cloróticas con deformación foliar Plantas con clorosis intervenal y engrosamiento de venas Plantas con hojas deformes, moteados y vejigas Plantas con deformaciones foliares, anillos morados TOTAL 100.0

9 9 Igual que en el experimento anterior, también se observó recuperación o enmascaramiento de síntomas, evolución de síntomas de leves a severos, de severos a leves, lo cual dificultó la agrupación de plantas por el síntoma expresado. Algunas de las plantas clonadas se conservaron en condiciones de invernadero hasta la fructificación, lográndose obtener frutos con síntomas típicos de la enfermedad (Figura 9). TRANSMISIÓN POR SEMILLA SEXUAL Figura 9. Síntomas característicos de la enfermedad Las semillas provenientes de frutos enfermos germinaron 39 después días de la siembra, la germinación fue uniforme y no se presentó diferencia con relación al control de frutos aparentemente sanos. Al comienzo las plántulas obtenidas de semillas de frutos aparentemente sanos fueron más vigorosas y de un verde más intenso, que las de semillas de frutos de plantas con síntomas; sin embargo con el transcurso del tiempo todas las plantas adquirieron igual tamaño y el color del follaje fue uniforme, no expresando síntomas asociados a la enfermedad. Después de 10 meses de observación, ninguna de las plantas mostró síntomas de la enfermedad. Posteriormente, cada planta se sometió a una prueba serológica (ELISA) para dos virus purificados a partir de muestras tomadas de árboles afectados procedentes de la zona productora de Santa Rosa de Osos. Ninguna plántula de origen sexual fue positiva a los virus probados. Fue diferente cuando

10 10 plantas con síntomas de la enfermedad se sometieron al chequeo serológico, en donde el 100% de las plantas evaluadas mostraron reacción positiva a uno o los dos antisueros probados. EVALUACIÓN CON PLANTAS INDICADORAS De las 20 especies de plantas indicadoras inoculadas con savia extraída de brotes de tomate de árbol con síntomas típicos de la enfermedad, solamente 5 reaccionaron positivamente 30 días después de la inoculación (Tabla 4). Nicotiana bentamiana y N. rustica expresaron inicialmente aclareo de nervaduras y posteriormente mosaico suave, pero no reaccionaron en forma positiva al realizar la serología con los antisueros probados. Chenopodium murale y Solanum nigrum expresaron clorosis al cabo de los 30 días, y además fueron positivas serológicamente para el antisuero col 7 (partícula isométrica), pero negativamente con col 11 (partícula alargada), lo cual indica que estas indicadoras podrían ser inmunes a col 1 1. Datura metel aunque no reaccionó positivamente con los antisueros probados, si expresó un moteado intenso después de la inoculación. Además de las plantas indicadoras, se inocularon plántulas de origen sexual de tomate de árbol, encontrándose los siguientes resultados: el cultivar tipo rojo, expresó mosaico y reaccionó positivamente a la serología con los antisueros, mientras que el tipo amarillo común expresó mosaico, y reaccionó positivamente con col 7, pero negativamente con col 1 1. Para el caso de la presente investigación se considera que el tomate de árbol tipo rojo se comporta de manera susceptible a la mezcla de los virus, mientras que el amarillo común solamente lo infecta col 7. ACTIVIDADES REALIZADAS Para iniciar el trabajo fue necesario recopilar la mayor información nacional y extranjera, debido a que no se contaba con una tecnología apropiada para el manejo del problema. En esta actividad se ordenaron y revisaron 200 trabajos sobre virus; algunos referentes a problemas ocasionados por estos patógenos en tomate de árbol y en otros cultivos; además de textos y documentos con procedimientos metodológicos para investigación y manejo de enfermedades virales. Dada la complejidad del problema fue necesario establecer contactos con entidades de amplia experiencia y trayectoria como el CIAT, CIP, ICA y el mismo CORPOICA, en investigaciones fitosanitarias en diferentes cultivos. Fue así como los estudios de microscopía electrónica y producción de antisueros recibieron el apoyo del CIAT y el CIP.

11 11 Tabla 4. Virosis del Tomate de árbol. Evaluación de la compatibilidad con plantas indicadoras y serología. C.l. "La Selva" Indicadora Tipo de Síntoma Reacción Antisuero Col 7 Col 11 N. occidentalis - N. bentamiana Mosaico N. bigelovii N. clevelandii - N. bigelovii N. tabacum (Samsum) N. glutinosa N. tabacum (W. Burley) N. rustica Mosaico N. clevalandii - N. debneyi - Physalis floridana - Chenopodium murale Clorosis + - Ch. Quinoa - Ch. Amaranticolor - Nicandra physaloides - Gomphrena globosa Datura metel Moteado - - Datura stramonium - Cucúrbita máxima - Solanum nigrum Clorosis + - Solanum betaceum (rojo) Mosaico + + Solanum betaceum (amarillo) Mosaico + - La metodología para evaluar la transmisión de la enfermedad recibió la cooperación del ICA y CORPOICA principalmente. El diseño de la campaña sanitaria se logró gracias a la participación del ICA, CORPOICA, la Universidad Nacional, la Asociación de Productores de Tomate de Árbol de Santa Rosa de Osos (APTA), la Secretaria de Agricultura de Antioquia, asistentes técnicos de la región y agricultores líderes independientes. Con estas mismas instituciones y organizaciones se pudo conformar varios equipos de trabajo que participaron en la planificación y ejecución del trabajo de investigación y en la campaña que se adelantó para el reconocimiento, distribución y magnitud de la enfermedad. En las Tablas 5 y 6, se presenta un resumen sobre la distribución e incidencia que tuvo la enfermedad en las zonas de mayor concentración del cultivo. Estos mismos grupos contribuyeron a la difusión de los resultados de la investigación y a la implementación de las medidas preventivas y cuarentenarias, con el fin de detener el avance de la

12 12 enfermedad; objetivo que se consiguió gracias a la cooperación y participación de las instituciones y la comunidad. Se impartió capacitación sobre reconocimiento de síntomas de la enfermedad y pautas para el manejo a 40 profesionales, 53 técnicos, 150 estudiantes del sector agropecuario y 300 agricultores de Antioquía. Se atendió en Santa Rosa de Osos una gira de 40 agricultores y técnicos del Valle del Cauca interesados en el tema. Se participó en eventos de transferencia relacionados con el cultivo y la enfermedad en Popayán, Cúcuta y Manizales, en los cuales se contó con la participación de 280 personas. Tabla 5. Distribución e incidencia de la enfermedad en Santa Rosa de Osos y Entrerrios MUNICIPIO Veredas No. de fincas No. de Tincas afectadas No. de árboles No. de árboles afectados Incidencia (%) de la enfermedad SANTA ROSA La Muñoz Los Salados El Plan Río Grande Orobajo Verbenas Tuberías San Juan Campo Alegre Sub-urbana San José ENTRERRIOS Potrero Pió XII El Filo Río Grande Tesorero TOTAL *con respecto al numero total de árboles observados Tabla 6. Otros reportes departamentales. MUNICIPIO No. de No. de árboles Incidencia (%) de la árboles afectados enfermedad Don Matías Barbosa Sabaneta El Carmen de Viboral Alta Sonsón Alta La Ceja

13 13 PRINCIPALES PRODUCTOS OBTENIDOS Los productos tecnológicos más relevantes obtenidos en esta investigación son: Aproximación a la Identificación del agente causal de la enfermedad. El conocimiento de algunas de las formas de transmisión de la enfermedad. El desarrollo de un paquete tecnológico para la prevención y manejo de la enfermedad. El logro de la organización de una campaña sanitaria con la participación de las instituciones y la comunidad. La capacitación de aproximadamente 863 personas entre las que se encuentra agricultores, profesionales, técnicos y estudiantes del área agropecuaria, en aspectos relacionados con la etiología del agente causal, el comportamiento de la enfermedad, sus formas de transmisión y las pautas para el manejo de la misma. RESULTADOS ESPERADOS DE ACUERDO CON LOS OBJETIVOS DEL PROYECTO. Se cumplieron los objetivos planteados en el proyecto, referentes al estudio de las formas de transmisión de la enfermedad; tales como: transmisión mecánica, transmisión por herramientas, transmisión por semillas, estudios en plantas clonadas de tomate de árbol, plantas indicadoras y rango de hospederos. RESULTADOS OBTENIDOS QUE NO ESTABAN PLANTEADOS EN LOS OBJETIVOS. En los objetivos no se consideró la realización de la campaña sanitaria, como tampoco los estudios de microscopía electrónica y serologías, sin embargo gracias a las alianzas realizadas con las instituciones y la comunidad se lograron los siguientes resultados: La conformación de equipos de trabajo en los cuales participaron activamente las instituciones ya mencionadas y la comunidad afectada, en el diseño de la campaña sanitaria que incluyó actividades como rastreo de la enfermedad, capacitación en reconocimiento de síntomas, erradicación temprana de plantas enfermas, difusión de resultados y pautas para prevención y manejo de la enfermedad. Se logró observar mediante microscopía electrónica la existencia de dos partículas vírales de forma diferente (una isométrica y otra alargada), las cuales se separaron y purificaron para la producción de los respectivos antisueros que se constituyeron en herramientas valiosas para la rápida detección de plantas portadoras de alguno de los dos virus.

14 14 IMPACTO La organización de la comunidad, el apoyo de las instituciones, el conocimiento de la causa de la enfermedad y sus formas de transmisión contribuyeron al establecimiento de prácticas de manejo, evitaron continuar la aplicación indiscriminada de pesticidas; y lo más importante se logró detener el avance de la enfermedad, conservar el área sembrada y los niveles de producción RECOMENDACIONES Es importante conservar la organización comunitaria, mantener el programa de educación y capacitación a técnicos particulares, funcionarios de UMATAS y productores en lo relacionado con la enfermedad. Se recomienda continuar realizando actividades de transferencia de tecnología sobre el manejo fitosanitario, especialmente las relacionadas con el uso de herramientas en la poda, erradicación temprana de plantas con síntomas y el control de malezas, para evitar la diseminación del complejo viral. Es conveniente no trasladar material vegetal desde las zonas afectadas hacia las zonas libres de la enfermedad, hasta que se disponga de un método rápido y seguro de detección de todos los virus presentes en la zona. Es necesario importar antisueros de Tamarillo Mosaic Virus, Arabis Mosaic Virus y Cucumer Mosaic Virus, con el fin de determinar si estos virus hacen parte del complejo viral que se encuentra afectando al cultivo del tomate de árbol en Antioquía. Se deben continuar trabajos de investigación en aspectos relacionados con otras formas de transmisión y otros posibles hospedantes del complejo viral encontrado. Una vez separados los virus ( del complejo viral), se debe hacer un estudio de fuentes de resistencia, que permita implementar un programa de mejoramiento genético. ALGUNAS REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS BRUNT, A.; CRABTRE, K; DALLWITZ, M. J.; GIBBS, A. J.; WATSON, L. and ZURCHER, E. J. (eds) (1996 Onwards) Plant virus online: Descriptions and lits trom the VIDE Databa se. Versión 16 January. URL CASTAÑO, J. y DEL RIO, L Manual para el diagnóstico de hongos, bacterias, virus y nemátodos fitopatógenos. Zamorano (Honduras): Zamorano Academic Press. P FLETCHER, W.A Tree Tomato Culture. Bolletin N 306. Departament of Agriculture, Auckland. P 8-12.

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