Dr. Miguel Galián Jiménez

Transcripción

1 Laboratorio de diagnóstico veterinario Dr. Miguel Galián Jiménez Veterinario de LABOKLIN Bad Kissingen - Alemania

2 El laboratorio LABOKLIN en Bad Kissingen (Baviera, Alemania) empleados (25 veterinarios)

3 Situación geográfica x Bad Kissingen

4 Zona de influencia Inglaterra Escandinavia Holanda Polonia Benelux Francia EEUU, Canadá Sudáfrica Suiza Italia España x Bad Kissingen Austria

5 Recepción de muestras

6 Departamentos de LABOKLIN Hematología y química clínica, serología, virología Patología Bacteriología y micología Parasitología Biología molecular y genética (Labogen)

7 Biología molecular y genética Diagnóstico de agentes infecciosos (PCR) Genética (Tests genéticos, perfiles de ADN, informes de paternidad) Determinación del sexo en aves Estado inmunitario (perro, gato, caballo, conejo, vacuno)

8 Diagnóstico de enfermedades hereditarias Perro PCR Gato Real-Time PCR Caballo Secuenciación Vacuno Cerdo Análisis de longitud de fragmentos

9 Diagnóstico de enfermedades hereditarias Perro 38 tests genéticos distintos Gato 10 tests genéticos distintos Caballo 7 tests genéticos distintos

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14 Tests de ADN en las razas Spaniel

15 Tests de ADN - Spaniels Atrofia progresiva de retina (PRA) prcd-pra: Cocker Spaniel Americano, Cocker Spaniel Inglés cord1-pra: Springer Spaniel Inglés Deficiencia de fosfofructoquinasa - PKFD. Springer Spaniel Inglés y Cocker Spaniel Americano Deficiencia en la piruvato deshidrogenasa 1 Clumber y Sussex Spaniel Fucosidosis Springer Spaniel Inglés Familial Nephropathy (FN) - Cocker Spaniel Inglés

16 Tests de ADN - Spaniels Coloraciones del pelo B-Locus (color de pelo marrón) ACS, ECS, ESS E-Locus (color de pelo dorado, limón, rojo, crema, melocotón) ECS, ESS Perfiles de ADN: Huella digital genética Pruebas de descendencia - paternidad

17 PRA La enfermedad Alteración hereditaria de carácter autosomal recesivo que produce ceguera en la mayoría de perros de razas puras En la atrofia progresiva de retina se alteran las células de la retina causando ceguera. En primer lugar se afectan los bastones y más tarde los conos. Los perros afectados aparecen normales en su juventud, desarrollan PRA como adultos. La mayoría de los perros afectados terminarán siendo totalmente ciegos El diagnóstico de PRA se hace normalmente mediante examen oftalmológico. La confirmación del diagnóstico puede llevarse a cabo mediante electroretinografía Cuándo aparecen los problemas de visión? Ceguera nocturna: 1-5 años Ceguera total: 3-5 años

18 PRA - Fondo de ojo normal

19 PRA - Fondo de ojo afectado (grado medio)

20 PRA - Fondo de ojo afectado (grado avanzado)

21 PRA - La enfermedad No hay tratamiento para la PRA Olfato y oído pueden compensar muy bien las deficiencias en visión. Para que un cachorro se vea afectado tiene que recibir una copia defectuosa de cada uno de los padres. Ambos padres de un cachorro afectado tienen que ser ellos mismos o portadores o afectados De forma similar, ya que un perro afectado tiene dos copias del gen defectuoso, toda su descendencia será, al menos, portador El test de ADN determina si un perro está afectado, libre, o si es portador (de la mutación) Permite al criador eliminar el riesgo de producir perros ciegos

22 Estadísticas prcd-pra 2007 Total Libre Portador Afectado Labrador Cocker (72%) 144 (26%) 10 (2%) Pudel Entleb. Sennenh Finn. Lapphund Chino crestado Kuvasz Total: (53%) 1697 (31,5%) 285 (0,5%)

23 Recomendaciones en reproducción Cruzar libre N/N x libre N/N Cruze libre N/N x portador N/PRA Testaje de ADN en la descendencia! Cruzar portador con portador es peligroso: portador N/PRA x portador N/PRA 25% descendencia afectado Cruce de afectado con libre produce un 100% de portadores (N/PRA)

24 Fucosidosis-English Springer Spaniel Alteración en el almacenamiento en los lisosomas causado por la deficiencia del enzima α-l-fucosidasa α-l-fucosidasa parte las proteínas y lípidos complejos para que puedan ser metabolizados En los animales enfermos las proteínas y lípidos complejos se almacenan en diversos órganos (nódulos linfáticos, páncreas, hígado, riñones, y especialmente, en tejido cerebral y neuronal)

25 Fucosidosis-English Springer Spaniel Síndrome neurológico con un déficit mixto en la función motora y mental Síntomas: alteraciones en la coordinación de movimientos Alteraciones del comportamiento, ceguera, sordera. Problemas en tragar Primeros síntomas neurológicos a los meses. Curso progresivo y final letal Expresión genética: autosomal recesiva Test de ADN disponible en LABOKLIN

26 Deficiencia en fosfofructoquinasa (PFK) - English Springer Spaniels Enfermedad hereditaria del almacenamiento de glucógeno Deficiencia de subunidades o actividad de la fosfofructoquinasa Sin un enzima PFK activo, las células musculares y sanguíneas no son capaces de producir suficiente energía para sus necesidades Hemólisis crónica Síntomas: debilidad, letargia, intolerancia al ejercicio, bajo rendimiento, calambres, anemia y orina de color oscuro

27 Deficiencia en fosfofructoquinasa (PFK) - English Springer Spaniels Orina oscura tras el ejercicio, o tras ladrar, jadear o estar expuestos al calor excesivamente Causado por la destrucción de los eritrocitos Expresión genética: Autosomal recesiva Test de ADN disponible en LABOKLIN

28 Deficiencia en piruvato deshidrogenasa 1 (PDP1) Clumber y Sussex Spaniel Provoca un síndrome de intolerancia al ejercicio por un defecto genético hereditario de carácter autosomal recesivo Este defecto provoca alteraciones del metabolismo, afectando la glicolisis; ya que esta enzima es fundamental en el metabolismo de los hidratos de carbono Ocasiona intolerancia al ejercicio pudiendo provocar colapso 20% de portadores en estas razas (Cameron et al., 2006)

29 Ventajas de los análisis de ADN Extremadamente precisos Máxima fiabilidad: se realizan dos análisis independientes de forma paralela No existe otro método más fiable Los tests de ADN son independientes de la edad Se puede conocer el estado genético de un animal antes de que aparezcan los síntomas de la enfermedad

30 Ventajas de los análisis de ADN El resultado será el mismo a cualquier edad Permite tomar decisiones tempranas relativas a la cría Los criadores pueden eliminar una enfermedad totalmente de sus líneas Bajos requerimientos en la muestra (transporte, tiempo)

31 Limitaciones del test genético PRA El test de ADN no reemplaza las exploraciones clínicas, los exámenes oculares son aún necesarios Todavía permanecen mutaciones desconocidas que pueden originar problemas similares Es difícil conocer exactamente cuantas mutaciones existen para una determinada enfermedad en una raza seleccionada

32 Limitaciones del test genético No todas las enfermedades de retina producen PRA, y no todas las PRA son prcd-pra Los perros testados libres pueden verse afectados por otras formas diferentes de PRA Estas limitaciones afectan a todos los análisis de ADN disponibles

33 Diagnóstico de enfermedades hereditarias Material necesario: Sangre (EDTA) Frotis bucales

34 Envío de muestras Correo Mensajería LABOKLIN GmbH & CO.KG Steubenstrasse Bad Kissingen Alemania - Germany A partir de marzo 2009

35 Control de calidad Acreditados según la norma DIN ISO Sometidos a controles de calidad (internos y externos) Tests de control entre laboratorios

36 Tiempo!!! PCR entorno 2 días tras la recepción de la muestra real-time PCR el mismo día Tests genéticos 3-5 días (dos análisis independientes para una máxima seguridad del test > 99%) Tests de paternidad 2 semanas

37 Tests ADN - Spaniels?

38 Tests ADN - Spaniels Atrofia progresiva de retina (PRA) 143 / 74 * 50,05 prcd-pra: Cocker Spaniel Americano, Cocker Spaniel Inglés cord1-pra: Springer Spaniel Inglés Deficiencia de fosfofructoquinasa - PKFD. Springer Spaniel Inglés y Cocker Spaniel Americano 50,05 Deficiencia en la piruvato deshidrogenasa 1 50,05 50,05 Clumber y Sussex Spaniel Fucosidosis * con/sin certificado Optigen Springer Spaniel Inglés

39 Tests ADN - Spaniels Atrofia progresiva de retina (PRA) 143 / 74 * 67,20 50,05 prcd-pra: Cocker Spaniel Americano, Cocker Spaniel Inglés cord1-pra: Springer Spaniel Inglés Deficiencia de fosfofructoquinasa - PKFD. Springer Spaniel Inglés y Cocker Spaniel Americano 50,05 Deficiencia en la piruvato deshidrogenasa 1 50,05 50,05 Clumber y Sussex Spaniel Fucosidosis Springer Spaniel Inglés * con/sin certificado Optigen Spaniel Club -10%

40 Tests ADN - Spaniels Coloraciones del pelo B-Locus (color de pelo marrón) ACS, ECS, ESS 50,05 E-Locus (color de pelo dorado, limón, rojo, crema, melocotón) ECS, ESS 50,05 1 color cuesta 50,05, dos cuestan 69,55 Perfiles de ADN: Huella digital genética Pruebas de descendencia - paternidad 38,50 66,00

41 Tests ADN - Spaniels Coloraciones del pelo B-Locus (color de pelo marrón) ACS, ECS, ESS 50,05 45 E-Locus (color de pelo dorado, limón, rojo, crema, melocotón) ECS, ESS 50,05 45 Spaniel Club -10% Perfiles de ADN: Huella digital genética Pruebas de descendencia - paternidad 38,50 66,

42 Preguntas??? Dr. Miguel Galián Jiménez

43 Estrategias en reproducción: N/N x N/N

44 Estrategias en reproducción: N/N x N/PRA

45 Estrategias en reproducción: N/N x PRA/PRA

46 Estrategias en reproducción: N/PRA x N/PRA

47 Estrategias en reproducción: N/PRA x PRA/PRA

48 Estrategias en reproducción: PRA/PRA x PRA/PRA