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María Victoria Medina Benítez
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DESARROLLO DE UN PANEL DE CEPAS DE VIH-1 DE DIFERENTES FORMAS GENÉTICAS PARA LA EVALUACIÓN DE POSIBLES CANDIDATOS VACUNALES Y DE MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO MOLECULAR.

1 DESARROLLO DE UN PANEL DE CEPAS DE VIH-1 DE DIFERENTES FORMAS GENÉTICAS PARA LA EVALUACIÓN DE POSIBLES CANDIDATOS VACUNALES Y DE MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO MOLECULAR. Mª Teresa Cuevas, Elena Delgado, Mónica Sánchez-Martínez, Aurora Fernández-García, Milagros Pinilla, Valentina García, Cristina Carrera, Ana María Sánchez, Miguel Thomson, Lucía Pérez-Álvarez. Unidad de Biología y Variabilidad de VIH. Centro Nacional de Microbiología. Instituto de salud Carlos III. Grupo de estudio de resistencias y tropismo de Galicia, País Vasco, Madrid, Castilla-León

2 Objetivo: Nuestro laboratorio, la Unidad de Biología y Variabilidad del VIH, participa en dos proyectos, uno nacional: RIS (Red de Investigación en Sida) y otro europeo EURIPRED (European Research Infrastructures for Poverty Related Diseases). Uno de los principales objetivos de estos proyectos es la obtención de aislados primarios de VIH-1: De diferentes formas genéticas: Subtipos, formas recombinantes circulantes (CRFs) y formas recombinantes únicas (URF). Procedentes de infecciones agudas y recientes. De virus que forman parte de clusters de transmisión.

3 Metodología I: Convenios de colaboración con Galicia y País Vasco. Madrid y Castilla-León Extracción de sangre PLASMA LINFOCITOS Buffy coat LINFOCITOS Seguimiento durante 28 días Co-cultivo Aislado primario Obtención de Linfocitos y Sobrenadante - Día 7 - Día 14 p24 - Día 21 - Día 28

4 Metodología II: AISLAMIENTOS POSITIVOS N=110 Caracterización biológica Caracterización genética SECUENCIACION DEL GENOMA COMPLETO - Estudio fenotípico de correceptores - Cálculo de la dosis infectiva TCID50 - Estudio de formación de sincitios - Determinación de la forma genética del virus - Estudio de clusters de transmisión - Determinación genotípica de correceptores - Estudio de mutaciones de resistencia Depósito de los aislados - Biobanco de VIH del Hospital Gregorio Marañón. Proyecto RIS - NIBSC (National Institute for Biological Standars and Control). Proyecto EURIPRED

5 Resultados: Características de los pacientes I Origen: Procedencia: - Galicia 75 (68,3) - País Vasco 27 (24,5) - Madrid 5 (4,5) - Valladolid 3 (2,7) Sexo: - Hombre 94 (85,4) - Mujer 15 (13,6) - ND 1 Vía de transmisión: - HT 43 (39,1) - HSH 41 (37,3) - BISEX 7 ( 6,4) - SEX 4 - UDI 14 (12,7) - Transfusión 1 95 (86,4) - España 89 (80,9) - Francia 1 - Portugal 1 - Guinea 3 - Nigeria 3 - Angola 2 - Argelia 1 - Camerún 1 - Tanzania 1 - Cuba 2 - Venezuela 2 - Argentina 1 - Bolivia 1 - Brasil 1 - Uruguay 1 11 África 8 América

6 Resultados: Características de los pacientes II Estadío Clínico: - Infección aguda 23 (21) - Infección reciente 18 (16,3) - Nuevo Diagnóstico 48 (43,6) - Infección crónica 21 (19,1) Edad (19-81): (27,3) (38,2) (20,9) ( 6,4) ( 2,7) ( 1,8) año de muestreo

7 Resultados: Características de los aislados Forma genética: SUBTIPOS (66,4) A1: 3 B: 40 C: 6 F1: 17 G: Subtipos CRFs URFs 19 CRF (16,4) CRF02_AG: 6 CRF05_DF: 1 CRF_12BF: 1 CRF14_BG: 3 CRF20_BG: 2 CRF24_BG: 1 CRF43_02G: 2 CRF47_BF: 2 URF (17,3) URF_BF 8 CRF02_A3: 2 URF_BC: 1 URF_BG: 1 CRF02/CRF06: 1 CRF02/B: 1 CRF12/B: 1 URFDF1G 1 URF ADG: 1 URF A1B 1

Resultados: Características de los aislados II Forma genética y clusters de transmisión: - 53 muestras agrupan en clusters (48,2%) 16 CRF02_AG: 6/1 CRF05_DF: 1 CRF_12BF: 1 CRF14_BG: 3 CRF20_BG: 2

8 Resultados: Características de los aislados II Forma genética y clusters de transmisión: - 53 muestras agrupan en clusters (48,2%) 16 CRF02_AG: 6/1 CRF05_DF: 1 CRF_12BF: 1 CRF14_BG: 3 CRF20_BG: 2 CRF24_BG: 1 CRF43_02G: 2/2 CRF47_BF: 2 A1: 3/2 B: 40/24 C: 6/4 F1: 17/15 G: 7 75 Subtipos CRFs URFs 19 URF_BF: 8/2 CRF02_A3: 2 URF_BC: 1/1 URF_BG: 1/1 CRF02/CRF06: 1 CRF02/B: 1 CRF12/B: 1/1 URFDF1G 1 URF ADG: 1 URF A1B 1

9 Resultados: Características de los aislados III Tropismo viral: - R5 78 (70,9) - R5/X4 31 (28,2) - ND 1 Mutaciones de resistencia (14): - ITI 8 - IP 3 - ITI+IP 3 Estudio de SI/NSI: (*79) TCID 50 : 10 4,8-10 6,8 - Sincitial 13 - No sincitial 66 - ND 31

CONCLUSIONES: - La disponibilidad de un panel de cepas de VIH-1, bien caracterizado a nivel genético y biológico, es una herramienta de gran valor para la evaluación de candidatos a vacuna frente al

10 CONCLUSIONES: - La disponibilidad de un panel de cepas de VIH-1, bien caracterizado a nivel genético y biológico, es una herramienta de gran valor para la evaluación de candidatos a vacuna frente al VIH. - Este panel también es útil para comprobar si determinados kit o pruebas son validas para las diferentes formas genéticas del VIH (carga viral, test rápidos.) - Los aislados están a disposición de quien los solicite a través de la RIS en el Biobanco del Gregorio Marañón o en el NIBSC. FINANCIACIÓN: Este trabajo se ha desarrollado gracias a la financiación del proyecto de la red de investigación en SIDA, RIS (RD12/0017/0026), EURIPRED (GRANT AGREEMENT ) y los convenios de colaboración con Galicia (MVI-1048/13 )y País Vasco (MVI 1255/08).

11 GRACIAS!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!

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