Comparación entre la Digestión Artificial y la Triquinoscopia para la detección de Trichinella spiralis en carne porcina

Transcripción

1 Comparación entre la Digestión Artificial y la Triquinoscopia para la detección de Trichinella spiralis en carne porcina RIBICICH, M.'; ROSA. A.'; MOLINA, V. 2; BLANG1ARDI, G.~; BASSO, N.~; FRANCO, A. ~ RESUMEN La inspección de los cerdos destinados al consumo para descartar la presencia de Trichinella spiralis es una actividad imprescindible en los programas integrales de salud pública veterinaria. La misma puede realizarse visualizando las larvas del parásito por triquinoscopia o recuperándolas del tejido muscular por Digestión Artificial Rápida (DAR). En el presente trabajo se compararon ambas técnicas en muestras de carne porcina proveniente de animales experimentalmente parasitados. Se analizaron 196 muestras musculares obtenidas de los maseteros derecho e izquierdo, lengua, base de lengua, intercostales derecho e izquierdo y diafragma. En el presente ensayo se encontraron diferencias significativas (p<0.05) entre ambas técnicas al analizar músculos provenientes de los animales infectados con bajas dosis de Trichinella spiralis. En las muestras obtenidas de cerdos inoculados con 5000 y larvas de Trichinella spiralis no se encontraron diferencias significativas (p> 0.05). Considerando que el consumo de carne de cerdo con una densidad mayor a 1 larva por gramo puede dar lugar a la aparición de distintos síntomas de la enfermedad, es fundamental contar con técnicas diagnósticas probadamente confiables, las que permitirían asimismo evaluar los resultados de programas de prevención y control de la enfermedad. Palabras clave: (Trichinella spiralis), (cerdos), (inspección de carne), (Triquinoscopia), (Digestión artificial) SUMMARY Comparison by Artificial Digestion and Triehinoscopy for detection of Trichine!la spiralis in pig meat The inspection of swine carcasses in order to find Trichinella spiralis plays an important role in public health programs. The inspections encompass methods such as observation of the parasites (trichinoscopy) or isolation of larvae from muscle (Rapid Artificial Digestion). This work in focused on the comparison between Rapid Digestion and trichinoscopy for the diagnosis of Trichinella spiralis in pork, obtained from healthy and parasited animals. Samples of muscle (n=196) were analyzed, taken from masseters, tongue, basal portion of tongue, intercostal muscle and diaphragm. In this work, significant differences (p<0,05) were formed between these techniques, in samples extracted from animals with low parasite counts. No significant differences (p>0,05) were found in muscles isolated from swine inoculated with 5000 and Trichinella spiralis larvae. Considering that swine that carry more than I larva per gram are classified as hazardous from a public health approach is important to choose reliable diagnostic techniques. These techniques can be used for prevention programs and control of disease. KO' words: (Trichinella spiralis), (pigs), (meat inspection), (Trichinoscopy), (Artificial Digestion) ' Facultad de Ciencias Veterinarias. UBA. Chorroarin 280. Ciudad de Buenos Aires. (1427) afranco~fvet. uba.ar. : lnstituto Nacional de Parasitologia. ANLIS. Carlos G. Malbrim InVet. (2000). 2

2 INTRODUCCION La prevención de la infección por Trichine11a en el hombre a través del control de la carne ha sido uno de los pilares que permitieron la organización de la inspección en los frigoríficos durante el último siglo. La posibilidad de examinar los productos alimenticios, previo al consumo humano depende de la disponibilidad de métodos para el diagnóstico preferentemente sencillos y rápidos En el caso de la triquinelosis, la DAR y la triquinoscopia son los métodos que en la actualidad posibilitan la visualización y/o aislamiento del parásito. Ningún método de diagnóstico utilizado para el examen de cerdos en los frigoríficos es totalmente satisfactorio si se consideran entre otros factores, la seguridad, el tiempo y el costo de los mismos 13 En los últimos años se produjeron importantes avances en el desarrollo de métodos indirectos tales como el test de ELISA, técnica de apreciable valor cuando se decida iniciar un programa de prevención y control de la enfermedad previo al sacrificio de los animales 9. Habida cuenta que los anticuerpos anti Trichinella spiralis se pueden encontrar, dependiendo de la carga parasitaria, a partir de los dias 15 a 39 del establecimiento de las larvas en el músculo, es necesario utilizar estas técnicas serológicas asociadas a!as parasitológicas directas 4,9,10,11 En Argentina, y específicamente en la provincia de Buenos Aires se observó a partir de 1994 un incremento significativo de aparición de focos de la enfermedad:, situación que justificaría ajustar!as actuales actividades de prevención y control, incorporando las nuevas herramientas de diagnóstico disponibles. La DAR ha sido incorporada como técnica de inspección obligatoria en 10s frigoríficos de cerdos por Res. 193/96 de SENASA'. Esta es una técnica cuantitativa con una sensibilidad de 3-5 larvas por gramo de músculo (Ipg) cuando la muestra tiene un peso de 1 gramo y de 1 Ipg cuando se utilizan 5 g de músculo para el análisis 4,5 El nivel de sensibilidad depende, como se desprende de lo expresado, de la cantidad de músculo utilizado para la digestión, en consecuencia podría haber resultados falsos negativos en muestras que contienen larvas suficientes para causar enfermedad en el hombre Diversos factores afectan la eficiencia de la DAR entre los que se incluyen el método de preparación de las muestras, la composición del fluido de digestión, incluyendo la concentración de pepsina y ácido clorhídrico y/o los métodos de filtración y recuperación de larvas 7. Por su lado, la triquinoscopía es una técnica cualitativa con una sensibilidad de 3-10 lpg que aun es utilizada para el diagnóstico parasitológico directo de la enfermedad, en algunos frigoríficos, mataderos y en las muestras recibidas por veterinarios luego de las faenas domiciliarias. El presente trabajo tuvo como objetivo comparar las técnicas parasito1ógicas directas, habitualmente utilizadas para el diagnóstico de Trichinella spiralis. MATERIALES Y METODOS Cerdos y muestras musculares Los cerdos utilizados para obtener las muestras fueron infectados experimentalmente con Trichinella spiralis (cepa mantenida en ratones CFI del ANLIS. "Dr. Carlos G. Malbrán"). Los mismos fueron inoculados por via oral con 100, 500, 5000 y larvas infectantes de T. spiralis, manteniendo 2 animales como grupo control. Se analizaron 196 muestras de músculos, provenientes de maseteros derecho e izquierdo, lengua, base de lengua, intercostales derecho e izquierdo y diafragma. El dia 100 post-inoculación se les practicó la eutanasia por corte de la vena cava, previa sedación con Azaperona e Hypnodil por vía endovenosa, ~-~'. Los experimentos fueron conducidos evitando el innecesario sufrimiento de los animales y empleando el tiempo mínimo necesario para el tipo de experimentación llevada a cabo. lnvet. ~2000). 2 82

3 triquinoscopía RESULTADOS Se utilizaron placas de compresión de vidrio, utilizando 500 mg de tejido muscular para el examen ~. Digestión Artificial Las muestras de 10g de tejido muscular fueron picadas en un procesador de carne comercial y mezcladas con 150 ml de liquido de digestión artificial (pepsina al 1%, w/v [National Standart Formulary 1:10000]) y fi. ácido clorhídrico al 1% v/v. La digestión fue realizada en un agitador magnético a C durante 1 hora y media. El liquido de digestión fue decantado durante 20 minutos y el sobrenadante fue desechado. El sedimento fue colado a través de un colador de 80-meshes y colectado en vaso de precipitados. Luego de otros 20 minutos el sedimento fue lavado repetidas veces con agua destilada. Las larvas recuperadas fueron contadas utilizando una lupa estereoscópica a 40XL Análisis estadístico Se realizó un Test para dos proporciones, con el estadístico z, utilizando el software STATISTIX for WINDOWS. Las muestras de músculos de los animales del grupo control fueron negativos a la digestión artificial rápida y a la triquinoscopía en el 100% de!as muestras analizadas. Los resultados obtenidos en los animales inoculados se observan en!as figuras 1, 2, 3 y 4. Es preciso destacar que para la interpretación de 1os gráficos debe tenerse en cuenta que las escalas de las ordenadas difieren en razón de la gran variabilidad de los datos. La proporción de muestras de músculos infectados detectados por DAR fue superior a la proporción de músculos detectados por triquinoscopía en la carne de cerdos inoculados con 100 y 500 larvas de Trichinella spiralis (p<0,05). No se detectaron diferencias significativas entre las técnicas de diagnóstico utilizadas DAR y triquinoscopía (p> 0,05) en la carne de cerdos inoculados con más de 500 larvas de T. spiralis. Con respecto a la localización de larvas en los músculos intercostales y maseteros izquierdo y derecho, no se observaron diferencias significativas (p> 0,05) cuando las muestras fueron analizadas en conjunto. Sin embargo, si se estudiaban los animales en forma individual se encontraron diferencias, en algunos casos, muy marcadas.

4 DISCUSION Y CONCLUSIONES La técnica de digestión demostró mayor sensibilidad que la triquinoscopía en la detección de larvas cuando los animales presentaban un bajo nivel de parasitosis (hasta 500 larvas), por encima de este limite tanto la DAR como la triquinoscopía demostraron la misma eficacia en la detección de animales positivos a Trichinella spiralis. Estos resultados coinciden con los de otros autores ~.n-~2. Con respecto a la cantidad de larvas detectadas por ambos métodos, en la carne de los cerdos inoculados con 100 larvas, la DAR demostró una aceptable sensibilidad en!as muestras analizadas y una clara diferencia con la triquinoscopía, ya que todos los músculos analizados por ésta resultaron negativos. De acuerdo al presente trabajo, cuando se realiza el diagnóstico de un escaso número de animales (es el caso de la faena domiciliaria) es recomendable tomar muestras de ambos lados, debido alas significativas variaciones en el número de larvas encontradas en los músculos derechos e izquierdos. Con la triquinoscopía, en cerdos con igual número de larvas inoculadas, se halló un número mayor de larvas en las muestras obtenidas en la lengua y base de lengua que en el diafragma. Estos resultados podían deberse a una mejor visualización de las larvas en la muestra, en razón de que la disposición de!as fibras musculares de la lengua permitirían una mayor compresión de la muestra en las placas del triquinoscopio. La utilización de 5g del músculo diafragmáticos para la DAR permite identificar las canales porcinas infectadas y son por ello seguras para el consumo humano lnvet. (2000), 2

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6 La inspección de carnes porcinas utilizando 1 g de un pool de muestras en zonas no endémicas. es considerado un test poco seguro 5. En nuestro país la investigación en carnes porcinas en faena de rutina, se realiza tomando muestras de un peso de 5 g provenientes del diafragma de acuerdo alas normas establecidas por SENASA I. Considerando que en nuestro país la triquinelosis es endémica, y teniendo en cuenta que los cerdos que presentan una densidad de larvas mayor a 1 lpg son considerados un riesgo para el consumo humano, seria de interés complementar la DAR con medidas de control y prevención de la enfermedad. Agradecimientos Los autores agradecen a la Profesora M.L Cattaneo y a Teresa Argibay por su valiosa colaboración en el análisis estadístico de los resultados. BIBLIOGRAFÍA 1. ANUARIO SENASA BOLETINES EPIDEMIOLOGICOS DE LA PROVINCIA DE BUENOS AIRES. 3. CAMPBELL,W. C. (ed.) Trichinella and trichinosis. Plenum Press. New York and London. 4. GAMBLE, H.R Detection oftrichinellosis in pigs by artificial digestion and enzyme immunoassay. J. Food Protect., 59: GAMBLE, H.R Sensitivity of Artificial Digestion and Enzime Immunoassay Methods of Inspection for Trichinae in Pigs. Journal of Food Protection. Vol. 61. N: GAMBLE, H.R Factors affecting tire efficiency of pooled sample digestion for the recovery of Trichinella spiralis from muscle tissue. Journal of Food Microbiology INTERNATIONAL COMMISSION ON TRICHINELLOSIS Recommendations on Methods for the Control of Trichinella in Domestic and Wild Animals Intended for Human Consumption. 8. KOHLER, G. & RUITEMBERG, E.& Comparation of three methods for the detection of Trichinella spiralis infection in pigs by five European Laboratories. Bull. Org. Mond. Sant~. 50, RIBICICH, M Trichinelosis porcina. Estudio de la infección experimental en cerdos. Importancia económica y sanitaria del diagnóstico temprano. Tesis de Maestria en Salud Animal. FCV. UBA. 10. VAN DER LEEK, M.L., DAME, J.B., GILLIS, K., ADAMS, C.L. AND LITTELL, R.C Evaluation of an enzyme-linked im-munosorbent assay for diagnosis of swine trichineilosis. Am. J. Vet. Res., 53: VAN KNAPEN, E; FRANCHIMONT, J.H.; RUITENBERG, E.J.; ANDRE, P.; BAL-DELLI, B.; GIBSON, T.E.; GOTTAL, C.; HENRIKSEN, S.A.; KOHLER, G.; RO-NEUS, 0.; SKOVGAARD, N.; SOULE, C.; STRICKLAND, K.L. AND TAYLOR, S.M Comparison of four methods for the early detection of experimental Trichinella spiralis infections in pigs. Vet. Parasitol., 9: VAN KNAPEN, E; FRANCHIMONT, J.H.; RUITENBERG, E.J.; ANDRE, P.; BAL-DELLI, B.; GIBSON, T.E.; HENRIKSEN, S.A.; KOHLER, G,; RONEUS, 0.; SKOV-GAARD, N.; SOULE, C.; STRICKLAND, K.L.; TAYLOR, S.M.; THOMSEN, D.U. AND WOLFF, E Comparison of three methods for detection of experimental trichinellosis in pigs. Vet. Parasitol., 16: VAN KNAPEN, E Control systems of sylvatic and domestic animals trichinelosis, Wiadomosei Paraszytologiczne. T. XXXV, N.5. InVet.(2000). 2