Biología molecular en el trasplante de médula ósea
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- María Pilar Ortega Arroyo
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1 Biología molecular en el trasplante de médula ósea
2
3 Linus Pauling, padre de la biología molecular
4
5 1990
6 Biología molecular en TMO: ü Selección de donador ü Seguimiento de quimerismo ü Identificación de infecciones
7
8 En México se trasplantan menos del 10% de los pacientes quienes necesitan un TMO
9 90%
10 1988
11 1996
12 BBMT 2009; 15:1628
13 2000
14 El Método Mexicano: n Fármacos accesibles (BU, Cy, FLU) n Conducción extrahospitalaria n Número ajustado de aferesis (1-6 x 10 6 /Kg células CD34) n Pocas transfusiones n No uso de ganciclovir n No uso de Ig IV n No uso de factores de crecimiento n ILD sólo en caso necesario (< 5%)
15 El Método Mexicano: n BSF: 4 mg/kg, días -6, -5 n Cy: 350 mg/m 2, días -4, -3, -2 n FLU: 30 mg/m 2, días -4, -3, -2 n CyA: 5 mg/kg, días 1 a +180 n MTX: 5 mg/m 2 días +1, +3, +5, +11
16 403 alotrasplantes: ü 13 días para > 500 granulocitos ü 12 días para > plaquetas ü EICH aguda: 21% ü EICH crónica: 17% ü Mortalidad a 100 días: 17% ü Supervivencia a 150 meses: 48% ü Mediana de SV: 1350 días
17 403 alotrasplantes (165) Hematology 2012; 17:195
18 1386 alotrasplantes BBMT 2006; 12:422
19 Supervivencia global CHMI + HUNL Months after BMT Princess Margaret, Toronto
20 TMO alogénico usando el método Mexicano USD ( USD en FHCC) ( USD en MDACC)
21
22
23 TMO con el método Mexicano ü Causa menos EICH ü Es menos nefrotóxico ü Se asocia menos a reactivación de CMV ü Se puede emplear en niños ü Se puede emplear en sujetos añosos ü Tiene menos morbimortalidad ü Requiere menos transfusiones
24 TMO con el método Mexicano ü Cura la misma proporción de pacientes ü No es una forma sencilla de trasplantar ü Necesita mucho apoyo de laboratorio ü No requiere de unidades especiales ü No requiere de un hospital ü Es mucho más barato
25 TMO en México: P Más pacientes trasplantados P Más pacientes curados P Más trabajos publicados ü Mejor educación de médicos ü Mejor atención médica
26
27 Biología molecular en TMO: ü Selección de donador ü Seguimiento de quimerismo ü Decisión de trasplantar ü Definición de remisión ü Identificación de infecciones
28 Selección del donador: ü Antígenos HLA A, B y DR ü Los antígenos se estudian por biología molecular ü Tres del padre, tres de la madre ü Compatibilidad para TMO: 6 / 6 o 5 / 6
29 Molécula HLA
30 Overall survival /6 6/ Time in months
31 2004
32
33 QUIMERISMO!!! D D CTSP D D ± LD R R R R L R L R L R R R R L D D D D D D D D Receptor Donador Quimera mixta Quimera completa
34 Quimerismo post-trasplante: P XX / XY P Microsatélites
35 Enumeracion de cromosomas sexuales
36 Y X
37
38 Microsatélites
39
40 Microsatélites MW O TPOX FGA vw AMEL D5S818 D16S539 S D R R O S O S O S O S 501 pb 404 pb 353 pb 242 pb 190 pb 147 pb 110 pb 89 pb
41 CITOMETRÍA DE FLUJO PARA GRUPOS SANGUÍNEOS Eritrocitos A+ (19.5%) ERITROCITOS A+ PMT2LO6
42
43
44 Respuestas en LGC: P Cariotipo P BCR / ABL, PCR P BCR / ABL, qpcr
45
46 2005
47 2008
48
49 Rev Invest Clin Méx 2004; 53:
50 M3
51 M2 M4Eo
52 Reacción en cadena de la polimerasa
53 Marcadores moleculares en LMA 1) PML / RARa 2) AML1 / ETO 3) inv16 4) ckit 5) CEBPA 6) NPM-1 7) FLT3 8) BCR / ABL
54
55 Marcador Riesgo Frecuencia en LAM PML / RARa Favorable 12-25% AML1 / ETO Favorable 7-8% INV16 Favorable 7-9% ckit Desfavorable 5% CEBPA Favorable 8% NPM1 Favorable 25-35% FLT3-ITD Desfavorable 18-20% BCR / ABL1 Desfavorable %
56 Riesgos en LMA a) Bajo b) Intermedio c) Alto
57 Riesgos en LMA a) Bajo: PML / RARa inv 16 AML1 / ETO Excepto si tiene FLT3 mutado
58 Riesgos en LMA b) Intermedio: Cariotipo normal Trisomía 8 NPM-1 FLT3 CEBPA
59 Riesgos en LMA b) Alto: Monosomía 5 Monosomía 7 Cariotipos complejos NPM-1 FLT3 CEBPA
60
61 Rev Invest Clin Méx 2005; 57:415
62
63 Rev Invest Clín Méx 2011; 63:25-30
64
65
66
67 Riesgo Hermano idéntico ó compatible MUD, haploidéntico ó cordón Bajo, excepto: No No c-kit Si Posible Intermedio, excepto: Si Posible NPM1 + /FLT3-ITD - Posible No CEBPA + /FLT3-ITD - Posible No FLT3-ITD + Si Si Alto Si Si
68 FLT3
69 NPM1
70 Leucemia mieloblástica Pronóstico FLT3 NPM1 Malo Positivo Negativo Intermedio Negativo Negativo Bueno Negativo Positivo
71 TMO en LMA Hermano HLA compatible Cordón umbilical Haploidéntico MUD
72 TMO en LMA Mieloablativo Intensidad reducida
73 2004; 45:
74 2007; 12:
75
76 2006
77
78 2006
79 Biología molecular (microsatélites) para demostrar que las células leucémicas son del donador
80 2006
81 CMV
82 CMV en TMO ü Antígeno pp 67 del CMV, definido por biología molecular, indica reactivación ü Anti-CMV (IgG, IgM) indican exposición al virus
83 2004 American Journal of Hematology, (2004) in press The Mexican Schedule to Conduct Allogeneic Stem Cell Transplantation Is Related to a Low Risk Of Cytomegalovirus Reactivation And Disease. 1,2 Ruiz-Argüelles GJ, 1,2 Gómez-Rangel JD, 3 Ponce-de-León S, 3 González- Déctor L, 2 Reyes-Núñez V and 2,4 Garcés-Eisele J. 1 Centro de Hematología y Medicina Interna de Puebla. Puebla, Mexico 2 Laboratorios Clínicos de Puebla, Puebla, Mexico 3 Instituto Nacional de Ciencias Médicas y de Nutrición "Salvador Zubirán, Mexico City 4 Departamento de Química y Biología, Universidad de las Américas-Puebla, Puebla Mexico
84 La biología molecular es crítica en el trasplante de médula ósea
85
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