Leucemia Aguda Mieloblástica (LAM): Alteraciones moleculares con valor pronóstico.
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- Fernando Maidana Martínez
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1 Laboratorio de Biología Molecular Leucemia Aguda Mieloblástica (LAM): Alteraciones moleculares con valor pronóstico. Victoria Elizondo Laboratorio de Técnicas Especializadas, AEPSM.
2 Leucemia Aguda Mieloblástica (LAM): Desorden clonal de las células hematopoyéticas progenitoras que pierden la capacidad de diferenciarse en células sanguíneas maduras y que tienen una proliferación descontrolada que escapa a los mecanismos de regulación normales. Patología heterogénea que tiene una base multigénica, que ocurre debido a la adquisición de múltiples y diversos cambios genéticos. 16th Congress of the European Hematology Association. B. Lowenberg. 2011; 5(1)-36.
3 Alteraciones cromosómicas recurrentes ( 55%) Modificada de Gaidzik y Döhner, 2008 Cariotipo normal (45%)
4 Molecular tecnologías for distinction
5 Al menos dos alteraciones genéticas se requieren para que ocurra la manifestación clínica de la LAM. mutaciones activadoras de clase I (proliferación celular): genes de receptores de tirosin kinasas FLT3 (fms like tyrosine kinase 3), JAK2V617F y KIT, y miembros de la familia RAS. mutaciones de clase II (inducen la terminación de la diferenciación): genes AML1 y CEBPA (CCAAT/enhancer binding protein alfa). tercer clase de mutaciones (regulación del ciclo celular o en la apoptosis): p53 y NPM1 (nucleofosmina 1).
6 Numerosas anomalías genéticas que escapan a la detección citogenética han sido identificadas. Esto ha permitido una clasificación más fina en subtipos moleculares y predicción del pronóstico en la vasta mayoría de los pacientes con cariotipo normal (CN). Mutaciones con valor diagnóstico y pronóstico en LAM Mutaciones moleculares con impacto sobre el pronóstico de los portadores de LAM. Modificada de B. Lowenberg, (Hematology 2008:1-11). * En LAM CBF (core-binding factor); ** En LAM con cariotipo normal; mut=mutación; wt=wild type (gen sin mutación).
7 Detección de mutaciones en el exón 12 del gen Nucleofosmina, NPM 1 (5q35). 27%/60% Mutación A: 80% de los casos debut. inserción TCTG en codón 956. Técnica ASO PCR (debut). semi nested (EMR). Mutación B: (+ frecuente en niños) 10% de los casos debut. Inserción 4 bases (CATG) en codón 959. Técnica: ASO PCR.
8 Detección de mutaciones en el gen CCAAT/ enhancer binding protein alpha (CEBP α), mapea en 19q13.1 (8% 13%) RT PCR y secuenciación. Modificada. Rapid and sensitive screening for CEBPA mutations in acute myeloid leukaemia. British Journal of Haematology, 143, , 2008.
9 Mutaciones en el gen c kit (4q12). Amplificación y secuenciación del exón 17: codifica para A loop ( activation loop) en el dominio quinasa. Pacientes con t(8;21): 18% Pacientes con inv (16) t(16;16): 16% Digestión de Prod. PCR del exón 17 con Bsma I y Hinf I para detección de mutación puntual D816. (Resistencia a Imatinib) Amplificación y secuenciación del exón 8: codifica para región de dimerización (homo y hetero) Pacientes con t(8;21): 4% Pacientes con inv (16) t(16;16): 13%
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12 Multiplex para detección de mutaciones en el gen FLT3 (FMS like tyrosine kinase 3), (13q12.2). FLT3 ITD (internal tandem duplications) en el exón % en LAM pediátricas y 25% en LAM adultas. FLT3 D835 (exón 17). Digestión del prod. de PCR con EcoRV. MESHINCHI et al BLOOD, 15 MAY 2008 VOLUME 111, NUMBER 10
13 16th Congress of the European Hematology Association. K.L. Rice et al. 2011; 5(1) 27
14 En investigación: Anomalías Epigenéticas: mutaciones en: DNMT3A TET2 IDH 1/ IDH2 Perfil epigenético Perfil de expresión genica: (mrnas, micrornas, etc.).
15 Como definir una terapia dirigida? Elegir una estrategia terapéutica de acuerdo al riesgo del perfil genético del paciente. Seleccionar drogas especificas que tengan como blanco las anomalías genéticas. Ajustar el tratamiento de acuerdo a la Enfermedad Mínima residual (MDR). Modificada. Torsten Haferlach en Congreso de ASH (American Society of Hematology) Artículo completo en Hematology 2008:
16 Torsten Haferlach en Congreso de ASH (American Society of Hematology) Artículo completo en Hematology 2008:
17 Proyecto LAM: Objetivo Caracterización genético-molecular de pacientes portadores de LAM de acuerdo a los criterios de la OMS (2008). Establecer la incidencia de los marcadores pronósticos en nuestra población. Realizar un banco de muestras de ADN y ARN
18 Proyecto LAM Se seguirá un algoritmo de trabajo que incluye técnicas citomoleculares (FISH) y moleculares para el estudio de: los reordenamientos con valor diagnóstico y pronóstico: - RUNX1-RUNX1T1 / (t(8;21) - CBFB-MYH11/ inv (16) - 11q23 * las mutaciones en los genes: - FLT3(ITD y D835) - NPM1 (A y B) - ckit (exones 8 y 17) -CEBPA
19 LA Citología + CF M3 LAM pellet para ADN ARN células plasma FLT3 y CG a todas Si Grupo adverso no más estudios si GF o GI FLT3 (+) AD no otros estudios (-) otros CG si t(8;21)(+) si CG Normal ckit NPM1 si (-) CEBPA o s/metafases M4-M5 FISH inv ( 16)+ c-kit (-) 11q23(+) PCR t(9;11) Otras alteraciones genéticas
20 Proyecto LAM Duración del proyecto: 2 años aprox Financiación : ANII incluye materiales fungibles y reactivos de laboratorio, realización de jornadas académicas, formación de recursos humanos en centros de referencia internacional, presentación a congresos de los resultados del grupo Estudio sin costo de las primeras 30 muestras provenientes de centros Hospitalarios Estatales. Mutuales sin limite con costo Criterios de inclusión: Mayores de 15 años - Datos a adjuntar: hematimétricos, citomorfológicos, citogenéticos y de citometría de flujo en planilla que se adjuntara. Requiere envio de datos clínicos (ficha).
21 M F Sexo 11 9 Edad 48 años promedio 52 años promedio CF M0 4 0 M0 M1 1 1 M1 0 2 M1 M2 0 1 M2 0 1 M4 2 1 M4 M5 1 1 M5 1 0 LAM (NOS) 1 1 CGC 6 CA 4 CA 2 CN 3 CN BM FLT3 2 pts ITD+ / 1 pte D835+ NPM1 (CN) CEBPa (CN) C kit (CBF) 1 pte + mut A 1pte s/mut, 4 pts en estudio 2 pts: 1 s/mut, otro pend
22 Biología Molecular Susana Boschi Victoria Elizondo Mariana Fernandez Gonzalo Manrique Silvana Pereyra GRACIAS!!! Verónica Pérez Ma. Noel Zubillaga Ma. del Rosario Uriarte
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26 Pronóstico según grupos citogenéticos: Torsten Haferlach en Congreso de ASH (American Society of Hematology) Artículo completo en Hematology 2008:
27 Asociación entre citogenética y marcadores moleculares - presentación oral de Torsten Haferlach en Congreso de ASH (American Society of Hematology) Artículo completo en Hematology 2008:
28 Desorden clonal de las células hematopoyéticas progenitoras que pierden la capacidad de diferenciarse en células sanguíneas maduras y que tienen una proliferación descontrolada que escapa a los mecanismos de regulación normales. Es una patología heterogénea en cuanto a las manifestaciones clínicas y las alteraciones genéticas
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