Diagnós.co Molecular 1
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- Gloria Lagos Soriano
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1 Diagnós.co Molecular 1 Relevancia, Áreas de Aplicación y Tendencias Actuales
2 PCR hizo crecer al Diagnós.co Molecular Técnicas derivadas de PCR: Basadas en Métodos Enzimá.cos Basadas en Métodos Electroforé.cos Basadas en Métodos de Fase Sólida Secuenciación? Molecular Diagnos.cs Fundamentals Methods and Clinical Applica.ons Patrnos Ansorge Elsevier
3 PCR hizo crecer al Diagnós.co Molecular Técnicas derivadas de PCR: Basadas en Métodos Enzimá.cos RFLP (Enzimas de Restricción) Estructura Secundaría / Heterodúplex (Resolvasas y endonucleasas) Oligo Ligated Assay (Ligasas) Basadas en Métodos Electroforé.cos SSCP (Single strand conforma.on polymorphism) HAD (heteroduplex analyses) Two dimensional gene scanning (1D tamaño y 2D secuencia) Basadas en Métodos de Fase Sólida (la más usada actualmente) Tirillas : Reverse dot blot (oligos en membranas hibridados con productos de PCR) Hibridación Alelo Específica en filtros (PCR ASO) Microarreglos SNP s Secuenciación? Molecular Diagnos.cs Fundamentals Methods and Clinical Applica.ons Patrnos Ansorge Elsevier
4 Consideraciones de uso de PCR Taq Polimerasa Regiones GC Error ~ 10 4 a 10 5 Condiciones de amplificación Magnesio ph Temperatura Concentraciones (dntp, ) ESTÁNDAR DE ORO PARA DETECCIÓN DE MUTACIONES SECUENCIACIÓN Considerar Polimerasas de Alta Fidelidad
5 Criterios para la Selección de Técnicas Espectro de Mutaciones Infraestructura disponible Costos Número de pruebas a realizar Propiedad Intelectual Molecular Diagnos.cs Fundamentals Methods and Clinical Applica.ons Patrnos Ansorge Elsevier
6 Relevancia y Aplicaciones del Diagnós.co Molecular Clínica Ecología Alimentos Ciencia Forénse y Legal Colaboración Hacer equipos de 5 o 6 alumnos. El profesor asigna un tema a cada equipo. Cada equipo discute su tema en 10 minutos. Cada equipo da un breve resumen de lo discu.do
7 Aplicaciones Clínicas Diagnós.co de Enfermedades Prenatales Diagnós.co de Enfermedades Cél. falciformes, fenilcetonuria, firbrosis quís.ca, tuberculosis, HIV Propensión y Riésgo Cáncer Leucemias, próstata, mama Indicadores de progresión (enfermedad y recuperación) Detección de Agentes Infecciosos Detección de Exposición Previa a Agentes o Infecciones Detección de Flora Intes.nal Medicina Personalizada (farmacogené.ca) Respuesta a terapia
8 Aplicaciones Ecológicas Detección de Flora y Fauna Detección de exposición a agentes tóxicos Comparación de cepas
9 Aplicaciones en Alimentos Detección de agentes infecciosos Detección de cruzas/invasión en plantas (por ejemplo maíz) Detección de Transgénicos Alimentos Funcionales (foods and beverages with claimed health benefits based on scien.fic evidence)
10 Aplicaciones en Ciencia Forénse y Legal Determinación de Parentesco Determinación de Iden.dad Implicaciones É.cas y Legales Matrimonios Seguros Tratamiento Trabajo
11 Tendencias Actuales Derivadas del conocimiento de la secuencia completa del Genoma Humano DHPLC denaturing high performance liquid chromatography (Xiao and Oefner, 2001) Retención diferencial de homo hetero dúplex en fase reversa (no polar) y condiciones parcielmente desnaturalizante Detección de SNP, deleciones e inserciones en minutos usando amplicones ES EL MAS PODEROSO Piro secuenciación (pyrosequencing) ciclos de extensión y detección de nucleó.dos Molecular Diagnos.cs Fundamentals Methods and Clinical Applica.ons Patrnos Ansorge Elsevier
12 Tendencias Actuales PCR Tiempo Real (Real Time PCR) Rapidez, Sensibilidad y reproducibilidad Detección en fase exponencial Acopla Detección y Amplificación en 1 sola fase Reducción de Ciclos, eliminación de proc. Post PCR, uso de fluorogenos Volumnes pequeños Microarreglos Polimorfismos y alteraciones en secuencias Proteómica Geles de 2D Espectrómetros de Masas Microarreglos Molecular Diagnos.cs Fundamentals Methods and Clinical Applica.ons Patrnos Ansorge Elsevier
13 Perspec.vas Futuras Tecnologías con miles de reacciones diagnós.cas al mismo.empo Uso de secuencias genómicas Incremento en el diseño de nuevas pruebas diagnós.cas Lab. de Diag. Molecular serán indispensables en medicina Predispoción familiar (matrimonios) Teranos.cs (Diagnós.co + Terapia) Medicina Personalizada Lab on a chip Molecular Diagnos.cs Fundamentals Methods and Clinical Applica.ons Patrnos Ansorge Elsevier
14 Tendencias y Problemas en Comercialización Selección de la plataforma de detección de mutaciones Protocolos no standard (tabla 1.1) Entrenamiento del personal Automa.zación de procesos manuales Consideraciones É.cas y Legales Propiedad Intelectual Reconocimiento de Gené.ca Médica
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