ANTICUERPOS ANTICITOPLASMA DE NEUTRÓFILO (ANCA)



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Sociedad Española de Inmunología Taller de Autoinmunidad 2013 ANTICUERPOS ANTICITOPLASMA DE NEUTRÓFILO (ANCA)

ÍNDICE 1-Objetivos 2-Organizadores 3-Colaboradores 4-Apoyo Logístico y agradecimientos 5-Introducción 5.1-Patrones de inmunofluorescencia indirecta (IFI) de anticuerpos anticitoplasma de neutrófilo (ANCA) 5.1.1-Consenso Internacional 5.1.2-Otras propuestas de definición de patrones ANCA atípicos 5.2-Métodos para la determinación de anticuerpos antiproteinasa 3 (a-pr3) y antimieloperoxidasa (a-mpo) 5.2.1.-Recomendaciones internacionales y del Grupo Español de Autoinmunidad (GEAI) 5.2.2.-Métodos 6-Laboratorios participantes 7-Resúmenes de historia clínica de los pacientes 8-Métodos 8.1- Datos enviados por los participantes 8.2- Resumen de las técnicas utilizadas 9-Resultados 9.1-Resultados por sueros 9.2-Análisis de los sueros sin consenso 9.3-Resumen de resultados e imágenes de inmunofluorescencia indirecta 10-Conclusiones 10.1.-Patrones IFI 10.2.-Técnicas de determinación de anticuerpos anti-mpo y anti-pr3 11-Bibiografía 2

1-OBJETIVOS Los objetivos del presente taller se han centrado en el estudio de anticuerpos anticitoplasma de neutrófilo (ANCA) en dos aspectos: 1.1-El abordaje de los anticuerpos asociados a enfermedad inflamatoria intestinal, concretamente a la colitis ulcerosa. Por un lado se ha tratado el tema de los ANCA con patrón atípico, que constituyen un aspecto no muy bien definido por los consensos internacionales (1,2). Presentan además la dificultad de su distinción de los distintos anticuerpos antinucleares o anticitoplásmicos concomitantes y han sido objeto de distintas aproximaciones (3,4,5). Recientes publicaciones han caracterizado sus antígenos diana, especialmente en hepatopatías autoinmunes y colitis ulcerosa (3,6,7). Por otro lado, también recientemente, se ha descrito la asociación de colitis ulcerosa a anticuerpos específicos de vasculitis asociados a ANCA (8,9). Ello puede contribuir al diagnóstico diferencial entre colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn, en el que la determinación de ANCA juega un papel importante y por otro lado, puede afectar a la especificidad de los ANCA para el diagnóstico de vasculitis. 2.1-La comparación de distintas técnicas, en general cuantitativas, para la determinación de anticuerpos antimieloperoxidasa y antiproteinasa 3. La distinta sensibilidad y especificidad de dichas técnicas puede determinar su valor diagnóstico y su aplicación en el seguimiento de las vasculitis asociadas a ANCA. Se pretende con este taller, por un lado, conocer qué tipos de técnicas se utilizan en los laboratorios que determinan ANCA y por otro, comparar los resultados en una serie de casos concretos que pueden ser interesantes por sus características clínicas, de laboratorio o ambas. Una comparación estadística exhaustiva de los métodos no es el objeto de este taller, por el número reducido de pacientes estudiado para cada tipo de patología y por la falta de una técnica gold standard, que nos impide una comparación objetiva. No obstante, creemos que de este estudio descriptivo puede obtenerse una buena fotografía de lo que es actualmente la determinación de ANCA en España y pueden discutirse casos interesantes y el comportamiento de las distintas técnicas en cada uno de ellos. 3

2-ORGANIZADORES Dra. Mª Rosa Julià F.E.A. Inmunología Servicio de Inmunología Hospital Universitari Son Espases Palma de Mallorca Dr. Pedro Martínez F.E.A. Inmunología Servicio de Inmunología Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca Murcia 3-COLABORADORES Eduardo Villegas Martín. Residente Servicio Inmunología Hospital Universitari Son Espases. Dra Dora Pascual Salcedo (Hospital La Paz. Madrid) y Dra Margarita Rodríguez Mahou (Hospital Gregorio Marañón. Madrid), ambas han contribuido con sueros propios al Taller. 4

4-APOYO LOGÍSTICO Dra. Ángela Carrasco. Responsable de talleres de la junta del Grupo Español de Autoinmunidad (GEAI) Entidades colaboradoras: Bio-Rad Laboratories S.A. Análisi y Genética S.L. Grifols IZASA Distribuciones Técnicas S.A. Menarini Diagnósticos S.A. Palex Medical S.A. Phadia (Thermo Fisher Scientific) AGRADECIMIENTOS Sujetos voluntarios donantes del suero para el Taller Dra Ángela Carrasco, Dra Dora Pascual, Dra Margarita Rodríguez Mahou y Entidades colaboradoras 5

5-INTRODUCCIÓN 5.1-Patrones de inmunofluorescencia indirecta (IFI) de anticuerpos anticitoplasma de neutrófilo (ANCA) 5.1.1-Consenso Internacional El consenso internacional sobre ANCA acordado en 1999 (1) y su adenda de 2003 (2) establecen la siguiente nomenclatura para los patrones IFI de ANCA: C-ANCA: patrón clásico de fluorescencia granular con acentuación central o interlobular. C-ANCA atípico: patrón difuso flat, sin acentuación interlobular P-ANCA: patrón perinuclear, con o sin extensión nuclear, incluye ANA específicos de granulocito ANCA atípico: incluye todos los otros patrones IFI de reactividad específica para neutrófilos o monocitos. Con frecuencia se trata de una combinación de fluorescencia citoplásmica y perinuclear. -Se distingue entre patrones C y C atípico y no entre P y P atípico para evitar que un patrón C se atribuya, por el clínico, a vasculitis sistémica, si se emite el informe antes de la realización del ELISA para antiproteinasa 3 (a-pr3) o antimieloperoxidasa (a-mpo). -La extensión nuclear en los P-ANCA no es siempre útil para distinguir los que corresponden a a-mpo o no. -Se considera que la fluorescencia debe graduarse como negativa, positiva débil o positiva intensa, sólo sobre la base de la dilución de cribaje. -Para seguimiento se recomienda no utilizar los títulos de IFI sino las técnicas cuantitativas para a-mpo y a-pr3. -El informe debe indicar si el laboratorio no puede confirmar un P-ANCA, debido a un ANA concomitante y que serán realizadas técnicas cuantitativas para a-mpo y a-pr3. -Las muestras positivas deben ser estudiadas por técnicas cuantitativas para a-mpo y a-pr3. 6

Respecto a los patrones atípicos de ANCA: -Se considera que no existe aún una prueba satisfactoria para detectar ANCA en enfermedad inflamatoria intestinal o hepatopatías autoinmunes (colangitis esclerosante o hepatitis autoinmune). -En general, serán aquellos en los que se obtiene positividad para cualquiera de los 4 patrones descritos en el recuadro pero que no correspondan a a-mpo o a-pr3. La IFI obtenida en etanol desaparece, en la mayoría de casos, en los portas fijados con formalina, aunque pueden obtenerse resultados poco consistentes en muestras individuales. Por ello el uso de portas fijados con formalina se deja a la elección del laboratorio. -No se recomienda, por el momento, la utilización de técnicas ELISA para antígenos distintos de MPO y PR3. 5.1.2-Otras propuestas de definición de patrones ANCA atípicos Algunos autores han propuesto patrones distintivos para los patrones ANCA atípicos: -El patrón very p, sin extensión nuclear, aunque, como ya se ha dicho no es aceptado por el consenso internacional por su inconsistencia para distinguir entre sueros a-mpo positivos o negativos (1,2). -El patrón mixto, por combinación de C-ANCA y P-ANCA, denominado snow-drift like (5). -Por último, Terjung et al (3) propusieron en 2001 la siguiente clasificación de patrones ANCA, basada en la presencia o no de puntos intranucleares y en los patrones IFI obtenidos en portas fijados con etanol o formalina. Este mismo grupo y otros, en sucesivas publicaciones (6,7), han caracterizado a los antígenos que dan lugar a este patrón p atípico, asociado a colitis ulcerosa y hepatitis autoinmune, como constituyentes de la membrana nuclear. Patrón C-ANCA P-ANCA P-ANCA atípico tipo A P-ANCA atípico tipo B Tinción sobre portas Etanol Citoplásmica fina granular acentuada entre los lóbulos Fina, homogénea y en reborde, del citoplasma perinuclear Amplia, no homogénea y en reborde, del citoplasma perinuclear, con múltiples puntos intranucleares Amplia, no homogénea y en reborde del citoplasma perinuclear, con múltiples puntos intranucleares junto a patrón citoplásmico difuso Tinción sobre portas Formalina Citoplásmica fina granular raramente acentuada entre los lóbulos Citoplásmica fina granular raramente acentuada entre los lóbulos Fina, no homogénea y en reborde del citoplasma perinuclear, con múltiples puntos intranucleares Fina, no homogénea y en reborde del citoplasma perinuclear, con múltiples puntos intranucleares junto a patrón citoplásmico difuso 7

5.2-Métodos para la determinación antimieloperoxidasa (a-mpo) de anticuerpos antiproteinasa 3 (a-pr3) y 5.2.1.-Recomendaciones internacionales y del Grupo Español de Autoinmunidad (GEAI) El consenso internacional sobre determinación de ANCA aconseja realizar, en aquellas muestras positivas por IFI, una confirmación por técnica ELISA para anticuerpos antiproteinasa 3 (a-pr3) y antimieloperoxidasa (a-mpo). Para el seguimiento de pacientes positivos se recomienda usar los niveles obtenidos por ELISA y no los títulos de IFI, ya que la correlación no es buena entre los resultados obtenidos por ambas técnicas (1,2). El protocolo del GEAI indica también la necesidad de realizar determinación de anticuerpos a-pr3 y a-mpo en muestras positivas por IFI y para el seguimiento se recomienda método cuantitativo (10). 5.2.2.-Métodos La sensibilidad y especificidad de las técnicas ELISA para a-mpo y a-pr3 ha ido aumentando desde los ELISA directos, técnicas de primera generación en las que los antígenos se fijan directamente a la placa, a los ELISA de captura, en los que se evitan cambios conformacionales, en PR3 o MPO, utilizando un anticuerpo fijado a la placa que une el antígeno por epítopos distintos a los de los autoanticuerpos (técnicas de segunda generación). Los ELISA de tercera generación o de alta sensibilidad (hselisa: highsensitivity ELISA), utilizan una proteína como anchor o puente entre el antígeno y la placa. Éstos últimos se postulan como un sistema que aún preserva mejor las características antigénicas de PR3 y MPO (11,12), aunque existen estudios que les atribuyen una sensibilidad similar a los ELISA de captura (13). Algunos trabajos han detectado incluso una mejor capacidad diagnóstica de las técnicas de primera generación para a-mpo, mientras que las de segunda o tercera generación siguen siendo consideradas las más adecuadas para a- PR3 (13). Recientemente han aparecido técnicas de quimioluminiscencia que, en algunos casos, combinan técnicas con antígenos unidos directamente a la placa con otras tipo anchor (14). Estas técnicas se han descrito equiparables a las técnicas ELISA de última generación y presentan, junto a los ELISA fluorescente de pocillo individual, la ventaja de la rapidez en la obtención de resultados y de permitir carga contínua de muestras. De todas formas, su implantación es muy reciente y se requieren más estudios para confirmar su utilidad. Existen también en el mercado distintos métodos cualitativos como dot-blot o inmunofluorescencia para el cribaje de a-mpo y a-pr3. 8

Técnicas cuantitativas más utilizadas para determinación de a-pr3 y a-mpo ELISA directo ELISA de captura ELISA de alta sensibilidad anchor Quimioluminiscencia 9

6-LABORATORIOS PARTICIPANTES Nombre del Hospital Responsable Clínica Universidad de Navarra Alfonso Sánchez Ibarrola Complejo Hospitalario de Jaén Esther Ocaña Pérez Consorcio Hospital General de Valencia Goitzane Marcaida Benito / Juana Rodríguez Delgado Fundación Jiménez Díaz María José Martínez Becerra Hospital Clínico Universitario de Valencia Paz Laporta Martín Hospital San Pedro de Alcántara Luis Fernández Pereira Hospital Universitario de Cruces María Aránzazu Pacho de Lucas Hospital Central de la Defensa "Gómez Ulla" Carmen Jiménez Garófano Hospital Clínic de Barcelona Odette Vinyas Gomis / Mila Garcia Hospital Clínico de San Carlos Romina Dieli Crimi Hospital Clínico Universitario Santiago de Compostela Pablo Eiras Martínez Hospital de Bellvitge Jordi Bas Hospital de la Princesa Cecilia Muñoz Calleja / Margarita García Marcos Hospital de León Dra. Sara Calleja Antolín Hospital Universitario Marqués de Valdecilla Marcos López Hoyos Hospital de Merida SES Manuel Espárrago Rodilla Hospital de Sant Pau Carmen Gelpí Sabater Hospital Donostia Álvaro Prada Iñurrategui / Raquel Sáez Hospital General de Albacete Jesús Ontañón Rodríguez Hospital Infanta Cristina María Inmaculada Alcalá Peña / Mª Luisa Vargas Pérez Hospital Infanta Margarita Aurora Jurado Roger Hospital Infanta Sofia Alexandru Vlagea Hospital Joan XXIII Rosa María Pastor Barellas Hospital Ramón y Cajal Angela Carrasco Sayalero / Garbiñe Roy Ariño Hospital Severo Ochoa Juana Jiménez Jiménez Hospital Torrecardenas Francisco Javier Muñoz Vico Hospital U. Germans Trias i Pujol Eva Mª. Martínez Cáceres Hospital Universitari Son Espases Mª Rosa Julià Benique / Eduardo Villegas Martín Hospital Universitario "La Paz" Dora Pascual-Salcedo Pascual / Rita Álvarez Doforno Hospital Universitario 12 de Octubre Antonio Serrano / Estela Paz Artal Hospital Universitario A Coruña "Teresa Herrera" Silvina Torio Gómez / Jose Javier Cid Fernández Hospital Universitario Central de Asturias Lourdes Mozo Avellaned Hospital Universitario de Canarias Yvelise Barrios del Pino Hospital Universitario de Gran Canaria Dr. Negrin Inmaculada Alarcón Torres Hospital Universitario Gregorio Marañon Margarita Rodríguez Mahou Complejo Hospitalario Universitario Insular Materno Infantil Olga Montes Ares / Alberto Torio Ruiz Hospital Universitario Nuestra Sra de la Candelaria Delia Almeida González Hospital Universitario Puerta de Hierro Aresio Plaza López Hospital Universitario Puerta del Mar Carmen Rodríguez Hernández Complejo Asistencial Universitario Salamanca María Belén Aparicio Hernández Hospital Universitario Vall d'hebron Ana Marín Sánchez Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca Pedro Martínez García / Jose Marcos García Pacheco Hospital Universitario Virgen del Rocío Marco Antonio Montes Cano Hospital Virgen de la Macarena Concepción González Rodríguez Hospital Virgen de las Nieves. Laura Jaimez Gámiz Hospital de Jerez Juan Francisco Rodríguez Gutiérrez Catlab. Parc Logistic de Salut Montserrat Alsina Donadeu / Francisco Pujalte Mora UDIAT-CD Corporacio Parc Tauli María José Amengual Guedan Total 48 laboratorios participantes 10

7-RESUMEN DE HISTORIA CLÍNICA DE LOS PACIENTES SUERO 1: RVM Varón de 71 años, afecto de hipertensión arterial, diabetes mellitus tipo II, hiperuricemia y cardiopatía isquémica. Tras ingreso en urgencias por ITU (06-11-2012) y empeoramiento general, ingresa de forma programada (07-11) y se diagnostica, por TAC abdominal y colonoscopia, de colitis ulcerosa. Durante el ingreso, 15 días antes de la toma de muestra para el taller, se produce cuadro de bacteriemia por Klebsiella pneumoniae, que se trata con antibiótico de amplio espectro. Recibe,además, tratamiento con Linagliptina, Micardis, Alopurinol, Sintrom, Pantoprazol y Dacortin. SUERO 2: AMZF Mujer de 33 años. Diagnosticada de Lupus eritematoso sistémico, nefritis lúpica y gromerulonefritis rápidamente progresiva por inmunocomplejos, demostrada por biopsia renal percutánea. Antecedente de toxemia gravídica y rinitis alérgica. Presenta el debut de LES en el post-parto (08/2012). Recibe bolus de corticoides y rituximab. En el momento actual se encuentra en tratamiento por hemodiálisis. SUERO 3: MSR Mujer de 68 años diagnosticada de enfermedad de Wegener con afectación pulmonar, con biopsia compatible. Además presenta hipertensión arterial, alergia a Trimetoprim- Sulfametoxazol, DM tipo II, dislipemia y síndrome ansioso-depresivo. En el momento de la toma de muestra se encuentra ingresada por ITU debida a Klebsiella pneumoniae, que se resuelve con tratamiento con amoxicilina-clavulámico. Su tratamiento habitual incluye Dacortin, esomeprazol, Novomix 30/70 Flexpen, Metformina, AAS, Candesartan, Simvastatina, Fenofibrato, Tramadol, Bromazepam, Duloxetina, calcio Vit D y bifosfonatos. SUERO 4: JAPH Mujer de 32 años, diagnosticada de colitis ulcerosa, con colonoscopia compatible. Presenta antecedente previo de infección por Dientaomeba fragilis (1 mes antes de la toma de muestra del taller), ya erradicada. Actualmente en tratamiento con Dacortín, Pentasa, Kilor y Omeprazol. SUERO 5: BJM Mujer de 33 años, diagnosticada de colitis ulcerosa, con colonoscopia compatible. En Marzo de 2012 sufre hepatitis aguda con serologías virales negativas. Actualmente en tratamiento con Mesalazina. 11

SUERO 6: APSO Mujer de 39 años que acude a urgencias (24/04/12) por cuadro de pielonefritis aguda tratada con clavulámico. Tras la suspensión del mismo comienza con tos no productiva y dolor torácico de características pleuríticas, disnea de esfuerzo y fiebre. En Rx de tórax se aprecia infiltrado en base izquierda con derrame pleural e imágenes nodulares en hemitórax derecho. En la analítica se constata VSG 120, Hb: 10.8, leucocitosis (15300) con eosinofilia (10.5%), PCR 18 mg/dl y sedimento de orina patológico con hematuria y leucocituria, sin síntomas miccionales. IgE:318, IgA:944, IgE frente a Aspergillus negativa. Estudio de parásitos en heces: negativo. Serología HIV y estudio microbiológico en orina: negativo. El TAC torácico indica afectación parenquimatosa con nódulos y masas bilaterales. Presenta también derrame pleural, y adenopatías mediastínicas y parahiliares inferiores a 10 mm. Se realiza fibrobroncoscopia, lavado broncoalveolar (BAL) y biopsia transtorácica y pleural, obteniéndose resultados negativos para PCR y cultivos de micobacterias, bacterias y hongos. En BAL se obtiene cociente CD4/CD8 > 3.5 y eosinofilia de 1%. El estudio de Anatomía Patológica objetiva fibrosis pulmonar, granulomatosis necrotizante con granulomas en empalizada y en uno de los informes se objetiva granuloma de aspecto necrótico claramente caseoso. En todos los casos las tinciones para bacterias y hongos son negativas y no hay signos de vasculitis. SUERO 7 : JCP Varón de 79 años. Diagnosticado de Enfermedad de Wegener en 2003, tras estudio de cuadro tóxico en el que se evidenció patrón radiológico compatible con nódulos pulmonares bilaterales y bronquiectasias. Presenta además: enfermedad renal crónica, estenosis bilateral de carótidas, dislipemia, calcificación de aorta abdominal, tiroidopatía y bradicardia sinusal. En tratamiento con Doxazosina, Dacortin, Omeprazol, Esertia, Adiro, Plusvent, Atorvastatina, Kilor, Duphalac. SUERO 8: CCB Mujer de 57 años. Diagnosticada de L.E.S. en 1993, con sintomatología cutánea, articular y renal. La biopsia renal indicó nefritis lúpica proliferativa focal tipo III. En 2010 se evidencian, por RMN, lesiones en sustancia blanca y presencia de anticuerpos antifosfolípido a título moderado, por lo que se diagnostica de SAP secundario a LES. Actualmente en tratamiento con Omeprazol, calcio, AAS, amlodipinio, aliskiren, ezetimiba, micofenolato, ácido risedrónico, lormetazepam, citalopram, prednisona. SUERO 9: FBS Mujer de 65 años. Diagnosticada de colitis crónica. En el momento actual, por clínica y biopsia de muestra endoscópica, se diagnostica de colitis ulcerosa severa con marcada actividad. Presenta además: varices, obesidad, necrosis avascular de cabeza de fémur e insuficiencia mitral. Recibe tratamiento con: ramipril, bisoprolol, torasemida, sintrom, sinvastatina. SUERO 10: MMM Paciente con esclerosis sistémica difusa y vasculitis necrotizante, con afectación del sistema nerviosos periférico y vascular confirmada por biopsia del nervio sural y muscular. 12

8-MÉTODOS En primer lugar se mostrarán todos los datos sobre las técnicas utilizadas por cada laboratorio participante. El número de laboratorios participantes es de 48, no todos participan en todas las determinaciones y algunos presentan más de una determinación por parámetro y suero, con distintos fabricantes, de aquí que el número de informes emitidos por parámetro y suero sea diferente del número de participantes. Se mostrarán de manera resumida, las técnicas con las que se han informados resultados en este taller, con las siguientes excepciones: IFI-METANOL: El escaso número (4) y la diversidad de resultados hace que no se considere esta técnica en el análisis de resultados. ANTI-MEMBRANA BASAL GLOMERULAR: Todos los sueros son negativos para los 11 laboratorios que informan esta técnica. ASCA: Sólo hay un resultado por suero, excepto para el nº 5 que hay dos (uno positivo y otro negativo). No se considera esta técnica en el análisis de resultados. ANA: Se ha alcanzado consenso en todos los sueros analizados. Se mostrarán los resultados de cada participante así como en las tabas de resumen por técnicas y por sueros, pero dado que los anticuerpos antinucleares no son el objeto de este taller, sino una herramienta para resolver las posibles interferencias con los ANCAs, no se considerará esta técnica en el análisis de resultados. PANEL ANCA: Se mostrarán los resultados de cada participante así como en las tablas de resumen por técnicas y por sueros. A pesar de que se ha alcanzado consenso en todos los sueros analizados no se considerará esta técnica en el análisis de resultados dado el bajo número de laboratorios que informan y la falta de concreción de los antígenos que incluye cada fabricante en este panel. 13

8.1.- Datos enviados por los participantes. Nº IFI ETANOL IFI FORMALINA IFI METANOL Laboratorio Fabricante Dil. screening Título final Fabricante Dil. screening Título final Fabricante Dil. screening Tít. final 1 INOVA 20 20 INOVA 20 20 2 Euroimmun 10 10 Euroimmun 10 10 INOVA 20 20 INOVA 20 20 3 INOVA 20 100 INOVA 20 100 4 INOVA 20 20 INOVA 20 20 INOVA 20 20 5 INOVA 20 20 INOVA 20 20 6 Menarini 20 320 Menarini 20 320 7 Movaco. Grifols 20 20 Movaco. Grifols 20 20 8 INOVA 10 20 INOVA 10 20 9 10 Zenit.Menarini 40 40 11 Zenit.Menarini 20 20 12 INOVA 20 20 INOVA 20 2560 13 Euroimmun 20 2560 Euroimmun 20 20 14 15 Menarini 20 640 Menarini 20 20 16 INOVA 20 20 INOVA 20 20 MBL.Menarini 20 20 17 Menarini 20 400 Menarini 20 20 18 INOVA 10 1280 INOVA 10 10 19 Zenit.Menarini 20 20 Zenit.Menarini 20 20 21 Euroimmun 10 640 Euroimmun 10 640 Biosystems 10 640 Biosystems 10 640 Biosystems 10 640 22 Zenit.Menarini 40 160 Zenit.Menarini 40 160 23 INOVA 20 20 INOVA 20 20 No especifica 24 Zenit.Menarini 20 1280 Zenit.Menarini 20 1280 Biosystems 20 1280 Biosystems 20 1280 25 Euroimmun 10 10 Euroimmun 10 10 26 Zenit.Menarini 20 320 27 Casero 25 25 28 INOVA 20 20 INOVA 20 20 29 Euroimmun 40 40 Euroimmun 40 40 30 Zenit.Menarini 20 40 Zenit.Menarini 20 40 31 Euroimmun 20 320 Euroimmun 20 320 32 INOVA 20 20 INOVA 20 20 33 Euroimmun 20 1280 Euroimmun 20 1280 34 Euroimmun 20 640 Euroimmun 20 640 Biosystems 20 640 35 INOVA 20 160 Menarini 20 80 36 Kallestad 10 1280 Kallestad 10 10 Biosystems 10 10 Biosystems 10 10 37 Euroimmun 10 40 Euroimmun 10 40 Biosystems 10 40 38 INOVA 20 20 INOVA 20 20 39 INOVA 20 320 INOVA 20 20 40 Menarini 40 40 Menarini 40 40 Palex 40 40 Palex 40 40 Palex 40 40 41 INOVA 20 20 INOVA 20 20 42 MBL.Menarini 20 640 MBL.Menarini 20 640 43 INOVA 20 2560 INOVA 20 2560 44 45 Casero 20 20 Immco. Grifols 20 20 Immco. Grifols 20 20 47 Immco. Movaco 20 20 Immco. Movaco 20 20 Biosystems 20 20 Biosystems 20 20 48 Euroimmun 20 20 Euroimmun 20 20 Biosystems 49 Euroimmun 20 20 Euroimmun 20 20 50 Casero 10 80 INOVA 10 80 Biosystems 20 20 Biosystems 20 20 Biosystems 20 20 14

Nº IFI ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 Lab. Fabricante Dil. screening T. final Fabricante Tipo técnica V. Ref Fabricante Tipo técnica V. Ref 1 Kallestad 80 640 Phadia Captura <10 Phadia Captura <10 2 Euroimmun 10 10 INOVA Quimioluminis. <6,66 INOVA Quimioluminis. <5 Euroimmun IFI sobre Ag purificado P/N Euroimmun IFI sobre Ag purificado P/N 3 Euroimmun 80 1280 AESKULISA Directo <18 AESKULISA Directo <18 Phadia Anchor <3 4 Euroimmun 160 160 Wieslab.EuroDiag Directo <7 Wieslab.EuroD. Captura <8 5 Biosistems 80 320 Phadia Anchor <5 Phadia Anchor <3 6 Phadia ANA-CTD F-EIA Phadia F-EIA <7 Phadia F-EIA <7 7 Immunoconceps 40 5120 Phadia Anchor <5 Phadia Anchor <3 8 INOVA 40 320 Phadia Anchor <5 Phadia Anchor <3 9 Wieslab.EuroDiag Captura <7 Wieslab.EuroD. Captura <7 10 Immunoconceps 80 160 Phadia Anchor <7 Phadia Anchor <7 11 Wieslab.EuroDiag Directo <8 Wieslab.EuroD. Captura <6 12 Kallestad 80 1280 Phadia Captura <5 Phadia Captura <3 13 Euroimmun 20 10240 Phadia Anchor <5 Phadia Anchor <3 Euroimmun Dot-blot Euroimmun Dot-blot 14 Phadia F-EIA <3.5 Phadia F-EIA <2 15 Phadia F-EIA <5 Phadia F-EIA <3 16 Immunoconceps 80 640 Phadia Anchor <3.5 Phadia Anchor <2 17 Immunoconceps 80 1600 Zenit Quimioluminis (directo) <20 Zenit Quimioluminis (directo) <20 18 Euroimmun 80 640 INOVA Directo <21 INOVA Directo <21 19 Delta biolo. A.G 100 1280 Wieslab.EuroDiag Captura <10 Wieslab.EuroD. Captura <7 21 INOVA 40 640 Phadia <3.5 Phadia Captura <3 22 Orgentec.Alegria Directo <5 Orgentec. Directo <5 23 INOVA 80 320 Phadia Captura <3.5 Phadia Captura <2 24 Biosystems 160 2560 Phadia Captura <3.5 Phadia <3.5 INOVA 160 2560 25 Immunoconceps 80 1280 Orgentec.Palex Anchor <5 Euroimmun Anchor <20 26 Immunoconceps 160 640 Phadia F-EIA <5 Phadia F-EIA <3 27 INOVA 40 640 INOVA Directo <6 INOVA Directo <3,5 28 Euroimmun 100 100 Biorad Luminex <1 Biorad Luminex <1 29 Euroimmun 160 160 Phadia Anchor <5 Phadia Anchor <3 30 Immunoconceps Wieslab.EuroDiag Directo P/N Wieslab.EuroD. Directo P/N 31 Medica 160 1280 Phadia F-EIA <3 Phadia F-EIA <2 32 INOVA 160 160 Wieslab.EuroDiag Captura <5 Wieslab.EuroD. Captura <5 33 Euroimmun 80 1280 Dot-blot Dot-blot 34 Euroimmun 80 2560 D-tek. Palex Dot-blot D-tek. Palex Dot-blot 35 INOVA 80 160 Biorad Luminex 1A1 Biorad Luminex 1A1 36 Kallestad 40 1280 Wieslab.EuroDiag Directo Wieslab.EuroD. Directo 37 Euroimmun 10 40 Euroimmun IFI sobre Ag purificado P/N Euroimmun IFI sobre Ag purificado P/N Orgentec.Palex Monotest <5 Orgentec. Monotest <5 38 INOVA 160 1280 Phadia Anchor <5 Phadia Anchor <3 39 Immunoconceps 80 640 Zenit RA.Menarini Quimioluminis (directo) 10 Zenit RA Quimioluminis (directo) 10 40 Menarini Directo <7 Menarini Captura <5 41 INOVA 80 320 Phadia Captura <3.5 Phadia Captura <2 42 Kallestad 40 1280 D-tek. Palex Dot-blot D-tek. Palex Dot-blot 43 Immunoconceps 40 2560 Wieslab.EuroDiag Directo <6 Wieslab.EuroD. Directo <6 44 Orgentec.Palex Directo <5 Orgentec. Directo <5 45 Euroimmun 20 320 Orgentec.Palex Directo <5 Orgentec. Directo <5 47 48 Immco. Movaco 80 5260 AESKULISA Directo <18 AESKULISA Directo <18 Phadia <5 Phadia <3 Euroimmun 20 640 Orgentec.Palex Directo <5 Orgentec. Directo <5 49 Euroimmun 80 1280 50 INOVA 160 320 Wieslab.EuroDiag Captura <5 Wieslab.EuroD. Captura <5 Zenit RA.Menarini Quimioluminiscencia 10 Zenit RA. Quimioluminiscencia 10 IZASA Quimioluminiscencia 20 IZASA Quimioluminiscencia 20 Orgentec.Palex Directo <1 Orgentec. Directo <1 15

Nº ANTI-MBG Tipo Lab. Fabricante técnica 1 2 PANEL ANCA (Azurocidina,BPI,CatepsinaG,Elastasa,Lactoferrina,Lisozima...) V. Referencia Fabricante Tipo técnica V. Referencia 3 4 Wieslab.EuroDiag si/no 5 Wieslab.EuroDiag Directo 20 6 7 Phadia F-EIA <10 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Phadia Anchor <7 17 18 Wieslab.EuroDiag si/no 19 21 22 23 24 Phadia <10 25 Euroimmun Captura <5 26 Phadia F-EIA <10 27 INOVA Directo <20 28 29 Phadia F-EIA <10 Orgentec Directo <10 30 Wieslab.EuroDiag Directo P/N 31 32 33 34 D-tek. Palex Dot-blot 35 AESKULAB. Grifols Directo >0.5 D.O. 36 37 38 39 40 Menarini <10 41 42 Orgentec.Palex Directo 43 Wieslab.EuroDiag Directo >4 DO ratio 44 Orgentec.Palex Directo 20 45 Euroimmun Dot-blot 47 48 49 50 Orgentec.Palex Directo <1 16

8.2.- Resumen de las técnicas utilizadas IFI ETANOL Informes totales para esta técnica: 57 IFI-ETANOL. Dil. screening 2% 8% 7% 18% Dilución de screening 1/10 = 11 1/20 = 40 1/25 = 1 1/40 = 5 65% IFI-ETANOL 46% No titulan = 31 54% Si titulan = 26 IFI-ETANOL. Fabricante/distribuidor 2% 4% 19% 2% 29% 16% 5% 19% 4% Biosystems = 9 Casero = 3 Euroimmun = 11 Immco = 2 INOVA = 17 Kallestad = 1 Menarini/Zenit = 11 MBL.Menarini = 2 Movaco = 1 17

IFI FORMALINA Informes totales para esta técnica: 48 IFI-FORMALINA. Dil. screening 8% 21% 1/10 = 10 1/20 = 34 1/40 = 4 71% IFI FORMALINA 38% 62% No titulan = 30 Si titulan = 18 IFI-FORMALINA.Fabricante/distrib. 19% 2% 13% Biosystems = 6 Euroimmun = 11 2% 2% 23% Immco = 2 INOVA = 17 Kallestad = 1 MBL.Menarini = 1 35% 4% Menarini/Zenit = 9 Movaco = 1 18

IFI ANA Informes totales para esta técnica: 42 IFI-ANA. Dilución de screening 21% 2% 5% 7% 1/10 = 2 1/20 = 3 17% 1/40 = 7 5% 1/80 = 18 1/100 = 2 1/160 = 9 43% ELISA = 1 IFI-ANA 7% No titulan = 3 Si titulan = 39 93% IFI-ANA. Fabricante/distribuidor 24% 2% 5% Biosystems = 2 Euroimmun = 14 33% Immco = 1 INOVA = 10 10% 24% 2% Kallestad = 4 Menarini = 10 Phadia = 1 19

ANTI-MPO 8.2.4. ANTI-MPO Informes totales para esta técnica: 53 ANTI-MPO. Tipo de Técnica 4% 4% 8% 9% 8% 30% 37% Anchor = 20 Directo = 16 Captura = 4 Quimioluminis = 5 Dot-blot = 4 Luminex = 2 IFI Ag purificado = 2 4% ANTI-MPO.Fabricante/distribuidor 4% 4% 6% 6% 8% 13% 18% 37% Phadia = 20 Wieslab.EuroDiag = 10 Orgentec = 7 INOVA = 4 Euroimmun = 3 Zenit RA.Menarini = 3 AESKULISA = 2 Biorad = 2 D-tek. Palex = 2 20

ANTI-PR3 Informes totales para esta técnica: 54 ANTI-PR3. Tipo de Técnica 4% 4% 7% 9% 15% 22% 39% Anchor = 21 Directo = 12 Captura = 8 Quimioluminis = 5 Dot-blot = 4 Luminex = 2 IFI Ag purificado = 2 4% ANTI-PR3.Fabricante/distribuidor 4% 4% 6% 7% 7% 11% 19% 38% Phadia = 21 Wieslab.EuroDiag = 10 Orgentec = 6 INOVA = 4 Euroimmun = 4 Zenit RA.Menarini = 3 AESKULISA = 2 Biorad = 2 D-tek. Palex = 2 21

PANEL ANCA (Azurocidina, BPI, Catepsina G, Elastasa, Lactoferrina, Lisozima) Informes totales para esta técnica: 9 PANEL ANCA. TIPO DE TÉCNICA 11% 11% Directo = 7 Captura = 1 Dot-blot = 1 78% PANEL ANCA.Fabricante/distribuidor 11% 22% 34% Orgentec = 3 Wieslab.EuroDiag = 3 AESKULISA = 1 Euroimmun = 2 33% 22

9-RESULTADOS 9.1.- Resultados por sueros SUERO 1. RESULTADOS POR LABORATORIO LAB. IFI-ETANOL IFI-FORM. IFI-METANOL IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 OTROS OTROS 1 C-ANCA POSITIVO N N 2 A-ANCA NEGATIVO <1 2,2 2B P-ANCA NEGATIVO 3 A-ANCA NEGATIVO 2,4 15 (indeterminado) 3B 0,3 4 P-ANCA NEGATIVO X-ANCA NEG NEG PANEL ANCA NEGATIVO 5 C-ANCA NEGATIVO 0,1 0,4 MBG 6 NEGATIVO 0,3 0 0,2 7 NEGATIVO 0,1 0,4 MBG 8 A-ANCA NEGATIVO 0 0,1 9 0,3 1,4 10 0,1 0,3 11 A-ANCA NEGATIVO NEGATIVO 12 P-ANCA POSITIVO N N 13 P-ANCA NEGATIVO 0 0,4 13B 14 0,1 0,6 15 A-ANCA NEGATIVO <0,01 0,4 16 P-ANCA NEGATIVO 0.0 0.4 MBG 16B P-ANCA 17 NEGATIVO 18 A-ANCA NEGATIVO <20 <20 PANEL ANCA NEGATIVO 19 P-ANCA NEGATIVO NEG (0,6) NEG (1,4) 21 P-ANCA POSITIVO Cit. Ref. periférico 0,2 <0,1 21B C-ANCA POSITIVO 22 NEGATIVO No muestra 1,2 4,8 23 P-ANCA POSITIVO 0,1 UI/ml (N) 0,3 UI/ml (N) 24 A-ANCA NEGATIVO 0,8 0,8 MBG 0,8 24B A-ANCA 25 A-ANCA NEGATIVO 1,27 1,96 PANEL ANCA 26 P-ANCA 0 1 MBG 1 27 3,04 U/ml 2,03 U/ml MBG 3,16 U/ml 28 C-ANCA POSITIVO 29 A-ANCA NEGATIVO 0,01 0,01 PANEL ANCA 29B MBG 0,01 30 N N MBG N 31 canca 1/40 POSITIVO 32 P-ANCA NEGATIVO 0,39 1,68 33 NEGATIVO N N 34 NEGATIVO MBG N 34B 35 C-ANCA N N PANEL ANCA PR3 36 NEGATIVO NEG NEG 36B NEGATIVO 37 NEGATIVO negativo negativo ASCA negativo 37B 1,1 2,3 38 A-ANCA NEGATIVO 0 0,1 39 P-ANCA POSITIVO 0 39 40 A-ANCA NEGATIVO NEGATIVO 1,4 4,6 MBG 2,7 40B NEGATIVO 41 P-ANCA POSITIVO 0,1 UI/ml (N) 0,3 UI/ml (N) 42 A-ANCA POSITIVO NEGATIVO NEGATIVO PANEL ANCA NEGATIVO 43 P-ANCA POSITIVO PANEL ANCA 44 1,17 6,99 MBG 6,53 45 A-ANCA NEGATIVO 7; 13; Inespecifico PANEL ANCA Negatiu 45B A-ANCA 47 A-ANCA POSITIVO Neg (1,61 U/ml) Positivo (21,1 U/ml) 47B A-ANCA POSITIVO NEG NEG 48 NEGATIVO 1,2 2,5 48B 49 A-ANCA NEGATIVO 50 A-ANCA NEGATIVO Positivo negativo negativo PANEL ANCAS BPI: 1.08, resto neg 50B A-ANCA CIT. "FLAT" 50C 14.7 0 50D 23

SUERO 1. RESUMEN IFI-ETANOL IFI-FORMALINA IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 PANEL ANCA TOTAL 57 TOTAL 45 TOTAL42 TOTAL53 TOTAL54 TOTAL9 A-ANCA = 20 = 31 s: 42 Dudoso = 1 Dudoso = 3 BPI: 1 P-ANCA = 14 Positivo = 14 = 52 Positivo (bajos) = 2 PR3: 1 C-ANCA = 6 = 49 s: 7; 77,8% = 17 SUERO 1. ETANOL 30% 11% 34% A-ANCA = 20 P-ANCA = 14 C-ANCA = 6 = 17 25% SUERO 1. FORMALINA 31% NEGATIVO = 31 POSITIVO = 14 69% SUERO 1. ANTI-MPO SUERO 1. ANTI-PR3 2% 6% 4% Dudoso = 1 = 52 Dudoso = 3 Positivo = 2 (bajos) = 49 98% 90% 24

SUERO 2. RESULTADOS POR LABORATORIO LAB. IFI-ETANOL IFI-FORM. IFI-METANOL IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 OTROS OTROS 1 C-ANCA POSITIVO Positivo 80 134 N 2 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado >246 <0,6 2B P-ANCA POSITIVO Positivo 3 P-ANCA C-ANCA Nuclear moteado 300 2 3B 4 P-ANCA POSITIVO P-ANCA Nuclear moteado >200 NEG PANEL ANCA NEGATIVO 5 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado >600 0,5 MBG 6 P-ANCA POSITIVO 20 134 0,9 7 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado >134 0,7 MBG 8 C-ANCA POSITIVO Nuclear moteado >134 0,5 9 >200 0,7 10 P-ANCA Nuclear moteado matriz >600 0,5 11 P-ANCA 235,4 NEGATIVO 12 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado >134 N 13 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado >134 0,4 13B Positivo 14 4600 1 15 P-ANCA POSITIVO >600 0,5 16 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado >600 0.5 MBG 16B P-ANCA 17 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado 148,7 <7,3 18 P-ANCA POSITIVO Positivo >123 <20 PANEL ANCA NEGATIVO 19 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado POS ALTO (337) NEG (1,1) 21 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado >240 <0,1 21B C-ANCA 22 C-ANCA POSITIVO No muestra >100 2,2 23 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado >134 UI/ml (P) 0,4 UI/ml (N) 24 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado 135 0,8 MBG 0,8 24B Nuclear moteado 25 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado 862 2,6 PANEL ANCA 26 P-ANCA Nuclear moteado >134 1 MBG 3 27 P-ANCA Nuclear moteado Positivo >100 U/ml <1,23 U/ml MBG 4 U/ml 28 P-ANCA POSITIVO Moteado Positivo (>8) 29 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado >134 0,2 PANEL ANCA 29B MBG 0,01 30 P-ANCA POSITIVO MPO N MBG N 31 Nuclear moteado 32 P-ANCA POSITIVO moteado grueso 452,36 0,88 33 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado PFU N 34 P-ANCA POSITIVO Moteado Positivo MBG N 34B P-ANCA 35 P-ANCA C-ANCA Nuclear moteado >8 N PANEL ANCA MPO 36 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado POS NEG 36B P-ANCA POSITIVO 37 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado positivo negativo ASCA negativo 37B P-ANCA 100 1,9 38 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado >100 0,2 39 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado 200 0 40 MBG 40B 41 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado >134 UI/ml (P) 0,4 UI/ml (N) 42 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado POSITIVO NEGATIVO PANEL ANCA NEGATIVO 43 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado > 200 PANEL ANCA 44 204,83 1,82 MBG 5,09 45 P-ANCA POSITIVO >100 PANEL ANCA 45B P-ANCA 47 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado Positivo (>300 U/ml) Neg (1,74 U/ml) 47B P-ANCA POSITIVO Positivo (>134 Ui/ml) NEG 48 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado >100 2 48B P-ANCA 49 P-ANCA POSITIVO Moteado 50 P-ANCA POSITIVO ND Nuclear moteado 6000 negativo PANEL ANCAS 50B P-ANCA POSITIVO 4,51 50C > 50D >739 CU 25

SUERO 2. RESUMEN IFI-ETANOL IFI-FORMALINA IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 PANEL ANCA TOTAL: 54 TOTAL: 43 TOTAL: 41 TOTAL: 52 TOTAL: 52 TOTAL 6 C-ANCA: 4 POSITIVO: 43 Moteado: 37 POSITIVO: 52 : 52 MPO: 1 : 1 Positivo: 3 : 5 (83,3%) P-ANCA: 49 : 1 SUERO 2. IFI-ETANOL 7% 2% C-ANCA = 4 = 1 P-ANCA = 49 91% SUERO 2. IFI-FORMALINA 0% Positivo = 43 = 0 100% SUERO 2. MPO 0% Positivo = 52 = 0 100% SUERO 2. PR3 0% Positivo = 0 : 52 100% 26

SUERO 3. RESULTADOS POR LABORATORIO LAB. IFI-ETANOL IFI-FORM. IFI-METANOL IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 OTROS OTROS 1 C-ANCA NEGATIVO N 22 2 P+C POSITIVO Nuc. Mot. y citop. <1 62,02 2B P-ANCA NEGATIVO 3 C-ANCA debil 0,8 15 (indeterminado) 3B 11 4 C-ANCA Débil NEG 56 PANEL ANCA LACTOFERRINA + 5 C-ANCA POSITIVO 0,2 17 MBG 6 C-ANCA NEGATIVO 0,3 0,1 18 7 NEGATIVO 0,1 16 MBG 8 C-ANCA POSITIVO 0 12 9 0,1 75 10 C-ANCA 0 13 11 NEGATIVO NEGATIVO 76,5 12 C-ANCA POSITIVO N 16 13 C-ANCA POSITIVO 0 24 13B 14 0,1 13 15 NEGATIVO <0,01 15 16 C-ANCA NEGATIVO 0 15 MBG 16B C-Dudoso 17 NEGATIVO Nuclear moteado 18 NEGATIVO <20 <20 PANEL ANCA LACTOFERRINA + 19 C-ANCA POSITIVO NEG (0,3) POS ALTO (125) 21 C-ANCA POSITIVO Nuclear moteado <0,1 18 21B C-ANCA 22 NEGATIVO No muestra 1,4 1,7 23 C-ANCA POSITIVO 0,1 UI/ml (N) 14 UI/ml (P) 24 NEGATIVO 0,8 21,6 MBG 0,8 24B C-ANCA 25 C-ANCA POSITIVO Nuclear moteado 1,37 5,26 PANEL ANCA Anti-Lactoferrina 26 P-ANCA 0 20 MBG 1 27 <1,23 U/ml <1,23 U/m MBG 3,65 U/ml 28 C-ANCA POSITIVO 29 C-ANCA POSITIVO 0,01 21 PANEL ANCA 29B MBG 0,01 30 NEGATIVO N N MBG N 31 canca 1/40 POSITIVO 14 IU/ml 32 C-ANCA 0,1 52,21 33 A-ANCA POSITIVO N Pos.DEB 34 NEGATIVO MBG N 34B 35 C-ANCA N N PANEL ANCA N 36 C-ANCA POSITIVO NEG NEG 36B NEGATIVO 37 NEGATIVO negativo negativo ASCA negativo 37B 1,1 1,1 38 C-ANCA POSITIVO 0 15 39 NEGATIVO Nuclear moteado 0 0 40 C-ANCA POSITIVO NEGATIVO 1,4 >200 MBG 2,3 40B C-ANCA POSITIVO 41 C-ANCA POSITIVO 0,1 UI/ml (N) 14 UI/ml (P) 42 C-ANCA POSITIVO NEGATIVO POSITIVO DÉBIL PANEL ANCA LACTOFERRINA 43 NEGATIVO PANEL ANCA Positivo lactoferrina 44 0 0,96 MBG 2,04 45 C-ANCA POSITIVO PANEL ANCA PR-3 45B C-ANCA 47 A-ANCA POSITIVO Neg (0,8 U/ml) Neg (9,37 U/ml) 47B A-ANCA POSITIVO NEG Positivo (22 Ui/ml). 48 C-ANCA POSITIVO Nuclear moteado 1,3 1,2 48B 49 C-ANCA POSITIVO 50 C-ANCA POSITIVO ND negativo 40 PANEL ANCAS Lactoferrina: 1.02 50B P-ANCA POSITIVO 50C 50D 238 CU 27

SUERO 3. RESUMEN IFI-ETANOL IFI-FORMALINA IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 PANEL ANCA TOTAL: 57 TOTAL: 44 TOTAL: 41 TOTAL: 52 TOTAL: 51 TOTAL: 8 Lactoferrina: 6 C-ANCA: 32 Positivo: 28 (63,6%) Moteado: 6 (14,6%) : 52 Positivo: 32 62,3% (75%) A-ANCA: 4 : 16 (36,4%) : 35 (85,4%) : 19 37,7% PR-3: 1 P-ANCA: 3 : 1 : 18 Técnica. Fabricante Positivo Neg Anchor. Euroimm 0 1 Anchor. Phadia 21 0 Captura. Wieslab 6 1 Directo. Aeskulisa 0 2 Directo. INOVA 0 2 Directo. Orgentec 0 6 Directo. Zenit 1 0 Dot-blot 1 0 Dot-blot. D-tek 1 1 Dot-blot. Euroimm 0 1 IFI. Euroimmun 0 2 Luminex. Biorad 0 1 Quimiolum. INOVA 2 0 Quimiolumi. Zenit 0 2 SUERO 3. ETANOL SUERO 3. FORMALINA 32% 5% 56% C-ANCA = 32 A-ANCA = 4 P-ANCA = 3 = 18 36% 64% Positivo = 28 = 16 7% SUERO3. ANTI-MPO SUERO 3. ANTI-PR3 0% Positivo = 0 = 52 51% 49% Positivo: 32 : 19 100% 28

SUERO 4. RESULTADOS POR LABORATORIO LAB. IFI-ETANOL IFI-FORM. IFI-METANOL IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 OTROS OTROS 1 P-ANCA POSITIVO N N 2 A-ANCA POSITIVO Nucleolar <1 2,35 2B A-ANCA NEGATIVO 3 A-ANCA NEGATIVO 5,6 2,1 3B 4 P-ANCA POSITIVO X-ANCA NEG NEG PANEL ANCA NEGATIVO 5 C-ANCA NEGATIVO 0,5 0,3 MBG 6 A-ANCA NEGATIVO 0,1 0,4 0,2 7 A-ANCA NEGATIVO 0,3 0,2 MBG 8 A-ANCA NEGATIVO 0,3 0,2 9 5,3 0,4 10 0,4 0,1 11 A-ANCA NEGATIVO NEGATIVO 12 P-ANCA POSITIVO N N 13 P-ANCA NEGATIVO 0,6 0,3 13B 14 0,6 0,5 15 A-ANCA NEGATIVO 0,5 0,3 16 P-ANCA NEGATIVO 0.4 0.3 MBG 16B P-ANCA 17 NEGATIVO Nuclear moteado 18 A-ANCA NEGATIVO <20 <20 PANEL ANCA NEGATIVO 19 P-ANCA NEGATIVO NEG (0,2) NEG (0,3) 21 A-ANCA POSITIVO P-ANCA 0,4 <0,1 21B P-ANCA POSITIVO 22 NEGATIVO No muestra 1,2 1,8 23 P-ANCA NEGATIVO 0,3 UI/ml (N) 0,2 UI/ml (N) 24 A-ANCA NEGATIVO 0,8 0,8 MBG 0,8 24B A-ANCA 25 A-ANCA NEGATIVO 1,99 1,82 PANEL ANCA 26 0 0 MBG 0 27 Fibrilar <1,23 <1,23 MBG 3,41 28 P-ANCA POSITIVO 29 P-ANCA POSITIVO 0,01 0,01 PANEL ANCA 29B MBG 30 C-ANCA POSITIVO N PR3 MBG N 31 panca 1/320 POSITIVO 32 P-ANCA NEGATIVO 0,51 0,26 33 P-ANCA POSITIVO N N 34 A-ANCA NEGATIVO MBG N 34B A-ANCA 35 C-ANCA NEGATIVO Nuc. homogéneo N N PANEL ANCA N 36 A-ANCA NEGATIVO NEG NEG 36B A-ANCA NEGATIVO 37 P-ANCA NEGATIVO negativo negativo ASCA negativo 37B 1,2 1,3 38 A-ANCA NEGATIVO 0,4 0 39 P-ANCA POSITIVO 1,5 12,8 (dudoso) 40 A-ANCA NEGATIVO POSITIVO 1,8 1,8 MBG 2,3 40B A-ANCA NEGATIVO 41 P-ANCA NEGATIVO 0,3 UI/ml (N) 0,2 UI/ml (N) 42 A-ANCA NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO PANEL ANCA NEGATIVO 43 A-ANCA NEGATIVO PANEL ANCA 44 2,66 3,47 MBG 3,43 45 A-ANCA NEGATIVO Nuclear moteado PANEL ANCA 45B A-ANCA 47 P-ANCA POSITIVO M. insuficiente Neg (8,01 U/ml) Neg (2,2 U/ml) 47B M. insuficiente M. insuficiente 48 A-ANCA NEGATIVO 1,3 2,2 48B 49 A-ANCA NEGATIVO 50 C-ANCA POSITIVO ND negativo negativo PANEL ANCAS 50B A-ANCA Otro.Describir 50C 50D 29

SUERO 4. RESUMEN IFI-ETANOL IFI-FORMALINA IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 PANEL ANCA TOTAL: 56 TOTAL: 46 TOTAL: 39 TOTAL: 52 TOTAL: 52 TOTAL: 7 A-ANCA: 27 POSITIVO: 15 Moteado: 2 : 52 Positivo: 1 : 7 C-ANCA: 4 : 31 Fibrilar: 1 : 51 P-ANCA: 18 Nucleolar: 1 : 7 Homogéneo: 1 : 34 (87,2%) SUERO 4. IFI-ETANOL 13% 32% 48% A-ANCA: 27 C-ANCA: 4 P-ANCA: 18 : 7 7% SUERO 4. IFI-FORMALINA 33% POSITIVO: 15 : 31 67% SUERO 4. ANTI-MPO SUERO 4. ANTI-PR3 0% 2% Positivo: 0 s: 52 Positivo: 1 s: 51 100% 98% 30

SUERO 5. RESULTADOS POR LABORATORIO LAB. IFI-ETANOL IFI-FORM. IFI-METANOL IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 OTROS OTROS 1 NEGATIVO homogéneo 640 N N 2 P-ANCA POSITIVO Nuclear 5,328 25,35 2B P-ANCA C. débil R.perif. Positivo 3 A-ANCA NEGATIVO Nuclear homogéneo 10 5 3B 4 Nuclear Citoplasma fibroso Nuclear homogé. N. homog. + Actina? NEG NEG PANEL ANCA NEGATIVO 5 A-ANCA X-ANCA 2,1 0,8 MBG 6 ANA Atípico "pocos. 0,4 2 0,9 7 ANA NEGATIVO Nuclear homogéneo 1,3 1 MBG 8 NEGATIVO Nuclear homogéneo 2,1 0,8 9 0,6 0,7 10 P-ANCA Nuclear homogéneo 2 0,6 11 NEGATIVO NEGATIVO 12 P-ANCA NEGATIVO Nuclear homogéneo N N 13 P-ANCA POSITIVO Nuclear homogéneo 2,6 1,2 13B 14 3,2 1,3 15 A-ANCA NEGATIVO 2,6 1,1 16 P-ANCA NEGATIVO Nuclear homogéneo 1.7 0.8 MBG 16B P-ANCA 17 P-ANCA POSITIVO Nuclear homogéneo <3,8 <7,3 18 P-ANCA POSITIVO Positivo <20 34 PANEL ANCA NEGATIVO 19 ANA POSITIVO Nuclear homogéneo NEG (0,9) NEG (0,8) 21 P+C/ negativo POSITIVO Nuclear Homo. Nuclear homogéneo 2,3 1,2 21B P-ANCA POSITIVO 22 No muestra No muestra No muestra 1,6 8,6 23 P-ANCA NEGATIVO Nuclear homogéneo 2,3 UI/ml (N) 0,9 UI/ml (N) 24 NEGATIVO Nuclear homogéneo 0,8 0,8 MBG 0,8 24B P-ANCA POSITIVO Nuclear homogéneo 25 C-ANCA POSITIVO Nuclear homogéneo 3,43 38,7 PANEL ANCA 26 P-ANCA Nuclear homogéneo 2 1 MBG 3 27 ANA Nuclear homogéneo 2,54 Positivo 8,95 MBG 4,26 28 P-ANCA NEGATIVO Homogéneo+fibras cit. Positivo (1,1) Positivo (1,1) 29 P-ANCA POSITIVO Nuclear homogéneo 1,7 0,6 PANEL ANCA 29B MBG 30 C-ANCA POSITIVO N PR3 MBG N 31 panca 1/320 POSITIVO Nuclear homogéneo ASCA+ 32 P-ANCA NEGATIVO Nuclear homogéneo 1,19 0,51 33 P-ANCA POSITIVO Nuclear homogéneo N N 34 P-ANCA POSITIVO Homogéneo MBG N 34B P-ANCA 35 A-ANCA 1,1 1,2 PANEL ANCA Lactoferrina + 36 NEGATIVO Nuclear homogéneo NEG NEG 36B 37 NEGATIVO negativo negativo ASCA negativo 37B 1,5 4,5 38 A-ANCA POSITIVO Nuclear homogéneo 2,7 0,7 39 ANA ANA Nuclear homogéneo 61,3 101 40 P-ANCA POSITIVO POSITIVO 3,4 4,5 MBG 3,5 40B P-ANCA POSITIVO 41 P-ANCA NEGATIVO Nuclear homogéneo 2,3 UI/ml (N) 0,9 UI/ml (N) 42 POSITIVO Nuclear homogéneo NEGATIVO POSITIVO DÉBIL PANEL ANCA NEGATIVO 43 NEGATIVO Nuclear homogéneo PANEL ANCA 44 10,2 21,52 MBG 10,99 45 A-ANCA Nuclear homogéneo 23, 30 inesp. PANEL ANCA Inespecifico 45B A-ANCA 47 P-ANCA POSITIVO Nuclear homogéneo Neg (10,9 U/ml) Neg (3,64 U/ml) 47B P-ANCA POSITIVO NEG NEG 48 P-ANCA POSITIVO Nuclear homogéneo 1,5 8,1 48B P-ANCA 49 POSITIVO Homogeneo 50 A-ANCA NEGATIVO POSITIVO Nuclear homogéneo negativo negativo PANEL ANCAS 50B A-ANCA POSITIVO 1.03 50C 29 61 50D 114 CU 31

SUERO 5. RESUMEN IFI-ETANOL IFI-FORMALINA IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 PANEL ANCA TOTAL: 53 TOTAL: 44 TOTAL: 41 TOTAL: 53 TOTAL: 53 % TOTAL: 9 P-ANCA: 27 POSITIVO: 25 Positivo: 37 (90,2%) POSITIVO: 5 POSITIVO: 16 30,2 A-ANCA: 15 X-ANCA: 3 s: 4 s: 48 s: 37 69,8 C-ANCA: 2 : 16 Técnica. Fabricante POSITIVO : 9 ANTI-MPO POSITIVOS Anchor. Euroimm 1 0 Luminex 2 de 2 (1,1 ambos) Anchor. Phadia 0 20 Directo: 1 Orgentec de 5 Captura. Wieslab 1 6 Quimiolum: Zenit 2 positivos de 3. Directo. Aeskulisa 0 2 Directo. INOVA 2 0 Directo. Orgentec 4 2 Directo. Wieslab 0 1 Directo. Zenit 0 1 Dot-blot 0 1 Dot-blot. D-tek 1 1 Dot-blot. Euroimm 0 1 IFI. Euroimmun 1 1 Luminex. Biorad 2 0 Quimiolum. INOVA 2 0 Quimiolumi. Zenit 2 1 Lactoferrina: 1 AESKULAB. SUERO 5. ETALNOL SUERO 5. FORMALINA 17% 4% 28% 51% P-ANCA = 27 A-ANCA = 15 C-ANCA = 2 = 9 36% POSITIVO = 25 X-ANCA = 3 57% = 16 7% SUERO 5. ANTI-MPO SUERO 5. ANTI-PR3 9% 30% Positivo = 5 = 48 POSITIVO: 16 s: 37 70% 91% 32

SUERO 6. RESULTADOS POR LABORATORIO LAB. IFI-ETANOL IFI-FORM. IFI-METANOL IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 OTROS OTROS 1 C-ANCA POSITIVO N N 2 A-ANCA NEGATIVO <1 <0,6 2B A-ANCA NEGATIVO 3 A-ANCA NEGATIVO 1,6 2,7 3B 4 P-ANCA POSITIVO X-ANCA NEG NEG PANEL ANCA NEGATIVO 5 C-ANCA POSITIVO 0,2 0,3 MBG 6 NEGATIVO 0,2 0,1 0,1 7 A-ANCA NEGATIVO N. moteado 0,2 0,3 MBG 8 A-ANCA NEGATIVO <0,01 0 9 0,8 0,2 10 P-ANCA 0 0,1 11 A-ANCA NEGATIVO NEGATIVO 12 A-ANCA POSITIVO N. homogéneo N N 13 P-ANCA NEGATIVO 0 0,2 13B 14 0,1 0,4 15 P-ANCA NEGATIVO <0,01 0,2 16 P-ANCA NEGATIVO 0 0 MBG 16B P-ANCA 17 NEGATIVO N. homogéneo 18 A-ANCA NEGATIVO <20 <20 PANEL ANCA NEGATIVO 19 P-ANCA NEGATIVO NEG (0,5) NEG (0,4) 21 A-ANCA NEGATIVO <0,1 0,3 21B A-ANCA 22 NEGATIVO No muestra 1,2 2 23 P-ANCA NEGATIVO 0,1 UI/ml (N) 0,1 UI/ml (N) 24 A-ANCA NEGATIVO 0,8 0,8 MBG 0,8 24B A-ANCA 25 A-ANCA NEGATIVO 5,46 6,95 PANEL ANCA 26 M. INSUF. 0 0 MBG 1 27 <1,23 <1,23 MBG 7,42 28 C-ANCA POSITIVO 29 A-ANCA NEGATIVO 0,01 0,01 PANEL ANCA 29B MBG 0,01 30 P-ANCA NEGATIVO N N MBG N 31 panca 1/320 POSITIVO 32 P-ANCA NEGATIVO 0,32 0,28 33 A-ANCA NEGATIVO N N 34 A-ANCA NEGATIVO MBG N 34B A-ANCA 35 P-ANCA N N PANEL ANCA N 36 A-ANCA NEGATIVO NEG NEG 36B A-ANCA NEGATIVO 37 A-ANCA NEGATIVO negativo negativo ASCA negativo 37B 1,5 1,5 38 A-ANCA NEGATIVO 0 0 39 P-ANCA POSITIVO 0 0 40 MBG 40B 41 P-ANCA NEGATIVO 0,1 UI/ml (N) 0,1 UI/ml (N) 42 A-ANCA NEGATIVO N. moteado NEGATIVO NEGATIVO PANEL ANCA NEGATIVO 43 A-ANCA NEGATIVO PANEL ANCA 44 0 0,45 MBG 8,69 45 A-ANCA NEGATIVO Mot. y nucleolar PANEL ANCA 45B A-ANCA 47 NEGATIVO Nuclear moteado Neg (1,36 U/ml) Neg (2,19U/ml) 47B P-ANCA POSITIVO NEG NEG 48 A-ANCA NEGATIVO 1,5 1,4 48B 49 A-ANCA NEGATIVO Homogeneo 50 A-ANCA NEGATIVO POSITIVO negativo negativo PANEL ANCAS 50B A-ANCA NEGATIVO 50C 50D 33

SUERO 6. RESUMEN IFI-ETANOL IFI-FORMALINA IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 PANEL ANCA TOTAL: 55 TOTAL: 43 TOTAL: 40 TOTAL: 52 TOTAL: 52 TOTAL: 8 A-ANCA: 29 Positivo: 8 Homogéneo: 3 : 52 : 52 : 8 P-ANCA: 15 : 35 Moteado: 4 C-ANCA: 3 : 33 (82,5%) : 8 SUERO 6. ETANOL 15% 5% 27% 53% A-ANCA: 29 P-ANCA: 15 C-ANCA: 3 : 8 SUERO 6. IFI-FORMALINA 81% 19% Positivo: 8 : 35 SUERO 6. ANTI-MPO 0% 100% Positivo: 0 : 52 SUERO 6. ANTI-PR3 0% 100% Positivo: 0 : 52 34

SUERO 7. RESULTADOS POR LABORATORIO LAB. IFI-ETANOL IFI-FORM. IFI-METANOL IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 OTROS OTROS 1 C-ANCA POSITIVO Positivo 80 N N 2 P-ANCA NEGATIVO Nuclear homogéneo 2B A-ANCA NEGATIVO 3 C-ANCA NEGATIVO Nuclear moteado 1,3 1,8 3B 4 Citoplasma citoplasma debil m. insuficiente NEG NEG PANEL ANCA NEGATIVO 5 NEGATIVO NEGATIVO 0,1 0,2 MBG 6 C-ANCA NEGATIVO 0,1 0,1 7 NEGATIVO 0,1 0,3 MBG 8 NEGATIVO <0,01 0,1 9 0,4 0,2 10 C-ANCA 0 0 11 NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO 12 NEGATIVO N N 13 C-ANCA NEGATIVO 0 0 13B 14 0,2 0,3 15 <0,01 3,9 16 NEGATIVO 0 0.2 MBG 16B 17 NEGATIVO Citoplás. mot. fino 18 NEGATIVO <20 <20 PANEL ANCA NEGATIVO 19 NEGATIVO NEG (0,4) NEG (0,4) 21 C-ANCA POSITIVO P-ANCA Mitocondrial <0,1 0,3 21B POSITIVO 22 NEGATIVO No muestra 1,1 1,5 23 C-ANCA POSITIVO 0,1 UI/ml (N) 0,2 UI/ml (N) 24 NEGATIVO 0,8 0,8 MBG 0,8 24B C-ANCA POSITIVO 25 NEGATIVO 1,87 4,52 PANEL ANCA 26 0 0 MBG 1 27 Mot./homogéneo <1,23 <1,23 MBG 4,87 28 C-ANCA Perinuclear 29 NEGATIVO 0,01 0,01 PANEL ANCA 29B MBG 0,01 30 NEGATIVO N N N MBG N 31 NEGATIVO 32 C-ANCA 0,39 0 33 NEGATIVO N N 34 NEGATIVO MBG N 34B 35 C-ANCA N N PANEL ANCA N 36 NEGATIVO Citoplás. Mot. difuso NEG NEG 36B 37 NEGATIVO negativo negativo ASCA negativo 37B 1,1 1,4 38 NEGATIVO 0,1 0,1 39 NEGATIVO 0 0 40 MBG 40B 41 C-ANCA POSITIVO 0,1 UI/ml (N) 0,2 UI/ml (N) 42 NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO PANEL ANCA NEGATIVO 43 NEGATIVO PANEL ANCA 44 0 0,74 MBG 3,7 45 POSITIVO Nucleolar PANEL ANCA Negatiu 45B C-ANCA 47 NEGATIVO m. insuficiente Neg (1,53 U/ml) Neg (2,28U/ml) 47B NEGATIVO m. insuficiente m. insuficiente 48 NEGATIVO 1,1 1,3 48B 49 NEGATIVO 50 A-ANCA NEGATIVO POSITIVO Citoplás. mot. fino negativo negativo PANEL ANCAS 50B A-ANCA NEGATIVO 50C 50D 35

SUERO 7. RESUMEN IFI-ETANOL IFI-FORMALINA IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 PANEL ANCA TOTAL: 54 TOTAL: 42 TOTAL: 39 TOTAL: 49 TOTAL: 49 TOTAL: 7 C-ANCA: 14 Positivo: 8 POSITIVO: 9 dispar : 49 : 49 : 7 A-ANCA: 3 : 34 (81%) : 30 (76,9%) P-ANCA: 1 : 36 SUERO 7. ETANOL 66% 26% 6% 2% C-ANCA: 14 A-ANCA: 3 P-ANCA: 1 : 36 SUERO 7. IFI-FORMALINA 81% 19% Positivo: 8 : 34 SUERO 7. ANTI-MPO 0% 100% Positivo: 0 : 49 SUERO 7. ANTI-PR3 0% 100% Positivo: 0 : 49 36

SUERO 8. RESULTADOS POR LABORATORIO LAB. IFI-ETANOL IFI-FORM. IFI-METANOL IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 OTROS OTROS 1 C-ANCA POSITIVO Positivo 80 N N 2 C-ATIPICO C-ATIPICO Citop.mot.difuso <1 <0,6 2B C-ATIPICO POSITIVO 3 C-ANCA C-ANCA Citop.mot.difuso 0,9 1,6 3B 4 Citoplasma citoplasma fuerte citop. granular Nucleolar + Anti-citoes. NEG NEG PANEL ANCA NEGATIVO 5 C-ANCA NEGATIVO Citop.mot.difuso 0 0,3 MBG 6 C-ANCA Patrón atípico. 4,5 0,1 0,2 7 C-ANCA POSITIVO 0,1 0,2 MBG 8 C-ANCA POSITIVO Citop.mot.difuso <0,01 0 9 0,2 0,2 10 C-ANCA Cit moteado. ANA mot 0 0,1 11 C-ANCA NEGATIVO NEGATIVO 12 C-ANCA POSITIVO Nucleolar N N 13 C-ANCA POSITIVO Citop.mot.difuso 0 0 13B 14 0,1 0,2 15 C-ANCA <0,01 <0,01 16 C-ANCA POSITIVO Citop.mot.fino 0 0.2 MBG 16B C-ANCA 17 NEGATIVO Nucleolar 18 C-ANCA POSITIVO Nucleolar <20 <20 PANEL ANCA NEGATIVO 19 C-ANCA POSITIVO Nucleolar NEG (0,6) NEG (0,4) 21 C-ANCA POSITIVO Citop. refuerzo... Citop.mot.difuso <0,1 <0,1 21B P-ANCA POSITIVO 22 C-ANCA POSITIVO No muestra 1,2 1,3 23 C-ANCA POSITIVO Citop.mot.difuso 0,0 UI/ml (N) 0,2 UI/ml (N) 24 C-ANCA POSITIVO 0,8 0,8 MBG 0,8 24B C-ANCA POSITIVO Citop.mot.difuso 25 C-ANCA POSITIVO Nucleolar 1,1 6,71 PANEL ANCA 26 0 0 MBG 1 27 Citoplasmatico <1,23 <1,23 MBG 4,26 28 C-ANCA POSITIVO 29 C-ANCA POSITIVO Nucleolar 0,01 0,01 PANEL ANCA 29B MBG 30 C-ANCA NEGATIVO N N MBG N 31 32 P-ANCA POSITIVO Citop.mot.fino 0,49 0,48 33 C-ANCA POSITIVO Nucleolar N N 34 C atípico NEGATIVO Nucleolar MBG N 34B C atípico 35 P-ANCA C-ANCA Moteado/homogéneo N N PANEL ANCA N 36 C-ANCA POSITIVO SIN MUESTRA NEG NEG 36B C-ANCA POSITIVO 37 A-ANCA POSITIVO Patrón ribosomal negativo negativo ASCA negativo 37B A-ANCA 1,1 1,4 38 C-ANCA POSITIVO Citop.mot.difuso 0 0 39 C-ANCA POSITIVO Citop.mot.difuso 0 0 40 C-ANCA POSITIVO POSITIVO 1,5 4,1 MBG 2,4 40B C-ANCA POSITIVO 41 C-ANCA POSITIVO Citop.mot.difuso 0,0 UI/ml (N) 0,2 UI/ml (N) 42 C-ANCA POSITIVO Nucleolar NEGATIVO NEGATIVO PANEL ANCA NEGATIVO 43 C-ANCA POSITIVO Citop.mot.difuso PANEL ANCA Positivo lisozima 44 0 0,67 MBG 3,76 45 NEGATIVO comp.ribosomal PANEL ANCA Negatiu 45B 47 C-ANCA POSITIVO Nucleolar Neg (1,34 U/ml) Neg (1,89U/ml) 47B C-ANCA POSITIVO NEG NEG 48 C-ANCA POSITIVO Nuclear moteado 1,1 1,2 48B C-ANCA 49 C-ANCA POSITIVO Citoplasmático 50 C-ANCA >1/80 POSITIVO C comp.ribosomal negativo negativo PANEL ANCAS 50B C-ANCA POSITIVO 50C 50D 37

SUERO 8. RESUMEN IFI-ETANOL IFI-FORMALINA IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 PANEL ANCA TOTAL: 56 TOTAL: 46 TOTAL: 40 TOTAL: 52 TOTAL: 52 TOTAL: 9 C-ANCA: 42 (75%) Positivo: 39, 84,8% Citopl/Ribos/Nucleolar: 31 (77.5%) : 52 : 52 : 8 Atípico: 6 Atípico: 2 Moteado: 2 Lisozima: 1 P-ANCA: 3 : 5 Positivo no especifica: 2 Eurodiagnostic) : 5 : 5 9% SUERO 8. IFI ETANOL 5% 11% 75% C-ANCA: 42 Atípico: 6 P-ANCA: 3 : 5 SUERO 8. IFI-FORMALINA 4% 11% 85% Positivo: 39 Atípico: 2 : 5 SUERO 8. ANTI-MPO 0% Positivo: 0 : 52 100% SUERO 8. ANTI-PR3 0% Positivo: 0 : 52 100% 38

SUERO 9. RESULTADOS POR LABORATORIO LAB. IFI-ETANOL IFI-FORM. IFI-METANOL IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 OTROS OTROS 1 C-ANCA POSITIVO Positivo 80 2 C-ANCA POSITIVO Nucleolar <1 21,25 2B P-ANCA POSITIVO 3 C-ANCA C-ANCA 1 139 3B 49 4 C-ANCA POSITIVO C-ANCA NEG 144 PANEL ANCA NEGATIVO 5 C-ANCA POSITIVO 0,2 48 MBG 6 C-ANCA POSITIVO 0,2 0,2 59 7 C-ANCA POSITIVO 0,2 42 MBG 8 C-ANCA POSITIVO 0,1 45 9 0,2 172 10 C-ANCA 0,2 28 11 C-ANCA NEGATIVO 200,1 12 C-ANCA POSITIVO N 45 13 C-ANCA POSITIVO 0 69 13B 14 0,2 44 15 C-ANCA 0,2 47 16 POSITIVO 0 44 MBG 16B 17 C-ANCA POSITIVO <3,8 <7,3 18 P-ANCA POSITIVO <20 23 PANEL ANCA NEGATIVO 19 C-ANCA POSITIVO NEG (0,3) POS ALTO (151) 21 C-ANCA POSITIVO C-ANCA 0,2 58 21B POSITIVO 22 NEGATIVO No muestra 1 2,1 23 C-ANCA POSITIVO 0,2 UI/ml (N) 55 UI/ml (P) 24 C-ANCA POSITIVO 0,8 61,1 MBG 0,8 24B C-ANCA POSITIVO 25 C-ANCA POSITIVO 0,63 3,45 PANEL ANCA 26 C-ANCA 0 69 MBG 2 27 <1,23 <1,23 MBG 3,28 28 C-ANCA POSITIVO 29 C-ANCA POSITIVO 0,01 59 PANEL ANCA 29B MBG 30 C-ANCA POSITIVO N PR3 MBG N 31 canca 1/40 POSITIVO 45 32 C-ANCA 0,26 142,13 33 C-ANCA POSITIVO N PFU 34 C-ANCA POSITIVO Positivo MBG N 34B C-ANCA 35 PANEL ANCA N 36 C-ANCA POSITIVO NEG NEG 36B 37 A-ANCA POSITIVO negativo negativo ASCA negativo 37B A-ANCA 1,1 1,7 38 C-ANCA POSITIVO 0 38 39 C-ANCA POSITIVO 0 0 40 C-ANCA POSITIVO NEGATIVO 1,9 155 MBG 2,8 40B C-ANCA POSITIVO 41 C-ANCA POSITIVO 0,2 UI/ml (N) 55 UI/ml (P) 42 C-ANCA POSITIVO NEGATIVO POSITIVO DÉBIL PANEL ANCA NEGATIVO 43 C-ANCA POSITIVO PANEL ANCA 44 1,18 1,95 MBG 4,4 45 C-ANCA POSITIVO PANEL ANCA PR3 45B C-ANCA 47 C-ANCA POSITIVO Neg (1,42 U/ml) Positivo (129 U/ml) 47B A-ANCA NEGATIVO NEG Positivo (59 Ui/ml). 48 C-ANCA POSITIVO 1,1 1,5 48B 49 C-ANCA POSITIVO 50 C-ANCA POSITIVO ND negativo 440 PANEL ANCAS 50B C-ANCA POSITIVO 50C 50D 91 CU 39

SUERO 9. RESUMEN IFI-ETANOL IFI-FORMALINA IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 PANEL ANCA TOTAL: 56 TOTAL: 44 TOTAL: 40 TOTAL: 52 TOTAL: 53 % TOTAL: 8 C-ANCA: 44 P-ANCA: 42 Positivos: 2 : 52 Positivos: 36 67,9 : 7 Atípico: 3 : 2 : 38 (95%) : 17 32,1 PR3: 1. Mismo lab P-ANCA: 2 neg para el ELISA : 7 Téc. Fabric. Positivo Anchor. Euroimm 0 1 Anchor. Phadia 20 0 Captura. Wieslab 7 0 Directo. Aeskulisa 2 0 Directo. INOVA 1 1 Directo. Orgentec 0 6 Directo. Wieslab 0 2 Directo. Zenit 1 0 Dot-blot 1 0 Dot-blot. D-tek 0 2 Dot-blot. Euroimm 1 0 IFI. Euroimmun 0 2 Luminex. Biorad 0 1 Quimiolum. INOVA 2 0 Quimiolumi. Zenit 0 3 SUERO 9. IFI-ETANOL SUERO 9. IFI-FORMALINA 5% 4% 13% C-ANCA: 44 Atípico: 3 P-ANCA: 2 : 7 5% P-ANCA: 42 : 2 78% 95% SUERO 9. ANTI-MPO SUERO9. ANTI-PR3 0% 32% Positivo: 0 : 52 Positivos: 36 : 17 68% 100% 40

SUERO 10. RESULTADOS POR LABORATORIO LAB. IFI-ETANOL IFI-FORM. IFI-METANOL IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 OTROS OTROS 1 P-ANCA POSITIVO Positivo 80 108 N 2 P-ANCA POSITIVO Nucleolar con homogéneo 198,9 <0,6 2B P-ANCA POSITIVO Positivo 3 P-ANCA C-ANCA Nuclear moteado/homog. 210 2,7 3B 4 P-ANCA POSITIVO P-ANCA Nucleolar moteado 89 NEG PANEL ANCA NEGATIVO 5 C-ANCA POSITIVO Nucleolar 137 0,4 MBG 6 P-ANCA POSITIVO 6,2 101 0,4 7 P-ANCA POSITIVO Nucleolarhom.+Nucleolar >134 0,5 MBG 8 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado/homog. >134 0,2 9 155 0,6 10 P-ANCA Tipo Scl-70 >600 0,2 11 P-ANCA 150 NEGATIVO 12 P-ANCA POSITIVO Homogéneo y nucleolar 128 N 13 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado >134 0,7 13B Positivo 14 355 0,8 15 P-ANCA POSITIVO 124 0,8 16 P-ANCA POSITIVO Nuclear homogéneo 136 0.3 MBG 16B P-ANCA 17 P-ANCA POSITIVO Nuclear homogéneo 57,8 <7,3 18 P-ANCA POSITIVO Positivo 106 <20 PANEL ANCA NEGATIVO 19 P-ANCA POSITIVO Moteado y nucleolar POS ALTO (170) NEG (1,4) 21 P-ANCA POSITIVO 99 ND 21B P-ANCA 22 C-ANCA POSITIVO No muestra 72,5 2 23 P-ANCA POSITIVO Scl-70 95 UI/ml (P) 0,3 UI/ml (N) 24 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado 136 0,8 MBG 0,8 24B P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado 25 P-ANCA POSITIVO Nuclear homogéneo 54,2 7,44 PANEL ANCA 26 P-ANCA Nuclear homogéneo >134 1 MBG 3 27 P-ANCA Homogéneo y nucleolar Positivo 82,15 <1,23 MBG 4,99 28 P-ANCA POSITIVO Falta muestra Falta muestra Falta muestra 29 P-ANCA POSITIVO Moteado tipo Scl-70 >134 0,01 PANEL ANCA 29B MBG 30 P-ANCA POSITIVO MPO N MBG N 31 panca>320 POSITIVO Nuclear homogéneo >600 IU/ml 32 P-ANCA POSITIVO Hom.+nucleolar 272,08 0,61 33 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado PFU N 34 P-ANCA POSITIVO Nucleolar/ mot/hom Positivo MBG N 34B P-ANCA 35 A-ANCA Nucleolar PANEL ANCA MPO 36 P-ANCA POSITIVO SIN MUESTRA POS NEG 36B 37 P-ANCA POSITIVO Nucleolar positivo negativo ASCA positivo 37B P-ANCA 56,8 1,7 38 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado 39 P-ANCA POSITIVO Otro.Describir 200 0 40 MBG 40B 41 P-ANCA POSITIVO Scl-70 95 UI/ml (P) 0,3 UI/ml (N) 42 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado POSITIVO NEGATIVO PANEL ANCA NEGATIVO 43 P-ANCA POSITIVO Nuclear moteado/homog. > 200 PANEL ANCA 44 102,23 0,8 MBG 5,04 45 P-ANCA POSITIVO 55 PANEL ANCA 45B P-ANCA 47 P-ANCA POSITIVO Moteado y Nucleolar. Positivo (>300) Neg (1,89U/ml) 47B P-ANCA POSITIVO Positivo (162) NEG 48 P-ANCA POSITIVO Nucleolar-Homogéneo 48 1,5 48B P-ANCA 49 P-ANCA POSITIVO Moteado y Nucleolar 50 P-ANCA POSITIVO ND Nuclear homogéneo 133 negativo PANEL ANCAS 50B P-ANCA POSITIVO 3,79 50C > 50D 670 41

SUERO 10. RESUMEN IFI-ETANOL IFI-FORMALINA IFI-ANA ANTI-MPO ANTI-PR3 PANEL ANCA TOTAL: 54 TOTAL: 43 TOTAL: 40 TOTAL: 50 TOTAL: 49 TOTAL: 7 P-ANCA: 51 (94,4%) Positivo: 43 : 2 Positivo: 50 : 49 : 6 C-ANCA: 2 Positivo: 38 (95%) MPO: 1 A-ANCA: 1 SUERO 10. IFI-ETANOL 2% 4% P-ANCA: 51 C-ANCA: 2 A-ANCA: 1 94% SUERO 10. IFI-FORMALINA 0% Positivo: 43 : 0 100% SUERO 10. ANTI-MPO 0% Positivo: 50 : 0 100% SUERO 10. ANTI-PR3 0% Positivo: 0 : 49 100% 42

9.2. Análisis de los sueros sin consenso: Resumen de sueros según consenso del 75% de los participantes SUERO ETANOL FORMALINA ANA MPO ANTI-PR3 OTROS 1 Sin consenso Sin consenso 2 P-ANCA Positivo Nuclear moteado Positivo 3 Sin consenso Sin consenso Sin consenso Lactoferrina 4 Sin consenso Sin consenso 5 Sin consenso Sin consenso Nuclear Homogéneo Sin consenso 6 Sin consenso 7 Sin consenso 8 C-ANCA Positivo Tipo Ribosomal 9 C-ANCA Positivo Sin consenso 10 P-ANCA Positivo Tipo Scl-70 Positivo Patrón IFI- ETANOL según dilución de cribaje del suero para cada laboratorio Suero 1. IFI-Etanol. Positivos según Tit. cribaje 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 1/10. n = 11 1/20. n = 39 1/40. n = 5 Positivo (%) Suero 3. IFI-Etanol. Positivos según Tit. cribaje 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 1/10. n = 11 1/20. n = 40 1/40. n = 5 Positivo (%) 43

Suero 4. IFI-Etanol. Positivos según Tit. cribaje 100 80 60 40 Positivo (%) 20 0 1/10. n = 11 1/20. n = 39 1/40. n = 5 Suero 5. IFI-Etanol. Positivos según Tit. cribaje 120 100 80 60 Positivo (%) 40 20 0 1/10. n = 10 1/20. n = 38 1/40. n = 4 Suero 6. IFI-Etanol. Positivos según Tit. cribaje 100 80 60 40 Positivo (%) 20 0 1/10. n = 11 1/20. n = 40 1/40. n = 3 Suero 7. IFI-Etanol. Positivos según Tit. cribaje 36 35 34 33 32 31 30 29 28 27 1/10. n = 10 1/20. n = 40 1/40. n = 3 Positivo (%) 44

Patrón IFI- FORMALINA según dilución de cribaje del suero para cada laboratorio SUERO 1. IFI-FORMALINA 100 80 60 40 Positivo (%) 20 0 1/10. n = 10 1/20. n = 31 1/40. n = 4 SUERO 3. IFI-FORMALINA 80 70 60 50 40 30 20 10 0 1/10. n = 9 1/20. n = 31 1/40. n = 4 Positivo (%) SUERO 4. IFI-FORMALINA 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 1/10. n = 10 1/20. n = 32 1/40. n = 4 Positivo (%) SUERO 5. IFI-FORMALINA 120 100 80 60 40 20 0 1/10. n = 9 1/20. n = 32 1/40. n = 3 Positivo (%) 45

Sueros sin consenso, IFI Según fabricante. Suero 1 SUERO 1. ETANOL. TOTALES SUERO 1. FORMALINA. TOTALES 30% 34% A-ANCA = 20 31% C-ANCA = 6 NEGATIVO = 31 P-ANCA = 14 POSITIVO = 14 25% 11% = 17 69% Suero 1. Etanol.Patrones Biosystems Suero 1.Formalina.Patrones Biosystems 56% 33% 11% A-ANCA C-ANCA P-ANCA 40% 60% Positivo 0% Suero 1. Etanol.Patrones Euroimmun Suero 1.Formalina.Patrones Euroimmun 18% 18% 37% A-ANCA C-ANCA P-ANCA Positivo 36% 9% 82% Suero 1. Etanol.Patrones INOVA Suero 1.Formalina.Patrones INOVA 0% 24% 52% 24% A-ANCA C-ANCA P-ANCA 59% 41% Positivo Suero 1. Etanol.Patrones Zenit Suero 1.Formalina.Patrones Zenit 0% 46% 36% A-ANCA C-ANCA P-ANCA Positivo 18% 0% 100% 46

Sueros sin consenso, IFI Según fabricante. Suero 3 SUERO 3. ETANOL TOTALES 7% SUERO 3. FORMALINA TOTALES 32% 5% 56% A-ANCA = 4 C-ANCA = 32 P-ANCA = 3 = 18 36% 64% Positivo = 28 = 16 Suero 3. Etanol.Patrones Biosystems Suero 3.Formalina.Patrones Biosystems 11% 11% 25% A-ANCA 45% 33% C-ANCA P-ANCA 75% Positivo Suero 3. Etanol.Patrones Euroimmun Suero 3.Formalina.Patrones Euroimmun 18% 18% 18% 0% A-ANCA C-ANCA P-ANCA Positivo 64% 82% Suero 3. Etanol.Patrones INOVA Suero 3.Formalina.Patrones INOVA 24% 0% 6% 70% A-ANCA C-ANCA P-ANCA 38% 62% Positivo Suero 3. Etanol.Patrones Zenit Suero 3.Formalina.Patrones Zenit 0% 25% 55% 36% A-ANCA C-ANCA P-ANCA Positivo 9% 75% 47

Sueros sin consenso, IFI Según fabricante. Suero 4 SUERO 4. IFI-ETANOL TOTALES SUERO 4. IFI-FORMALINA TOTALES 13% 32% 48% A-ANCA: 27 C-ANCA: 4 P-ANCA: 18 : 7 67% 33% POSITIVO: 15 : 31 7% Suero 4. Etanol.Patrones Biosystems Suero 4.Formalina.Patrones Biosystems 25% A-ANCA 13% 62% C-ANCA P-ANCA 50% 50% Positivo 0% Suero 4. Etanol.Patrones Euroimmun Suero 4.Formalina.Patrones Euroimmun 0% A-ANCA 45% 55% C-ANCA P-ANCA 55% 45% Positivo 0% Suero 4. Etanol.Patrones INOVA Suero 4.Formalina.Patrones INOVA 0% 53% 35% A-ANCA C-ANCA P-ANCA 65% 35% Positivo 12% Suero 4. Etanol.Patrones Zenit Suero 4.Formalina.Patrones Zenit 11% 36% A-ANCA 46% C-ANCA P-ANCA Positivo 9% 9% 89% 48

Sueros sin consenso, IFI Según fabricante. Suero 5 SUERO 5. ETALNOL TOTALES SUERO 5. FORMALINA TOTALES 17% 28% 4% A-ANCA = 15 C-ANCA = 2 P-ANCA = 27 = 9 43% Positivo = 25 57% = 19 51% Suero 5. Etanol.Patrones Biosystems Suero 5.Formalina.Patrones Biosystems 13% 13% 0% 0% A-ANCA C-ANCA P-ANCA Positivo 74% 100% Suero 5. Etanol.Patrones Euroimmun Suero 5.Formalina.Patrones Euroimmun 8% 9% 53% 31% 8% A-ANCA C-ANCA P-ANCA Positivo 91% Suero 5. Etanol.Patrones INOVA Suero 5.Formalina.Patrones INOVA 18% 13% 47% 35% 0% A-ANCA C-ANCA P-ANCA 87% Positivo Suero 5. Etanol.Patrones Zenit Suero 5.Formalina.Patrones Zenit 18% 36% 9% 37% A-ANCA C-ANCA P-ANCA 43% 57% Positivo 49

Sueros sin consenso, IFI Según fabricante. Sueros 6 y 7 SUERO 6 SUERO 7 SUERO 6. ETANOL TOTALES SUERO 7. ETANOL TOTALES 15% 6% 27% 53% A-ANCA: 29 C-ANCA: 3 P-ANCA: 15 : 8 66% 26% 2% A-ANCA: 3 C-ANCA: 14 P-ANCA: 1 : 36 5% Suero 6. Etanol.Patrones Biosystems Suero 7. Etanol.Patrones Biosystems 25% 14% 13% 0% 62% A-ANCA C-ANCA P-ANCA 72% 14% 0% A-ANCA C-ANCA P-ANCA Suero 6. Etanol.Patrones Euroimmun Suero 7. Etanol.Patrones Euroimmun 18% 0% 0% 18% 0% 82% A-ANCA C-ANCA P-ANCA 73% 9% A-ANCA C-ANCA P-ANCA Suero 6. Etanol.Patrones INOVA Suero 7. Etanol.Patrones INOVA 0% 6% 41% 41% A-ANCA C-ANCA P-ANCA 47% 47% A-ANCA C-ANCA P-ANCA 18% 0% Suero 6. Etanol.Patrones Zenit Suero 7. Etanol.Patrones Zenit 20% 0% 20% 40% 0% A-ANCA C-ANCA P-ANCA 0% A-ANCA C-ANCA P-ANCA 40% 80% 50

Resultado para ANTI-PR3 según el tipo de técnica y fabricante 25 20 15 10 5 0 Anchor. Euroimm Anchor. Phadia Captura. Wieslab Directo. Aeskulisa 25 20 15 10 5 0 Anchor. Euroimm Anchor. Phadia Captura. Wieslab 25 20 15 10 5 0 Anchor. Euroimm Anchor. Phadia Captura. Wieslab SUERO 3. ANTI-PR3 Directo. INOVA Directo. Orgentec Directo. Zenit Dot-blot Dot-blot. D-tek Dot-blot. Euroimm IFI. Euroimmun Luminex. Biorad Quimiolum. INOVA Quimiolumi. Zenit SUERO 5. PR3 Quimiolumi. Zenit Directo. Aeskulisa Directo. INOVA Directo. Orgentec Directo. Wieslab Directo. Zenit Dot-blot Dot-blot. D-tek Dot-blot. Euroimm IFI. Euroimmun Luminex. Biorad Quimiolum. INOVA SUERO 9. PR3 Directo. Aeskulisa Directo. INOVA Directo. Orgentec Directo. Wieslab Directo. Zenit Dot-blot Dot-blot. D-tek Dot-blot. Euroimm IFI. Euroimmun Luminex. Biorad Quimiolum. INOVA Quimiolumi. Zenit.19 Positivo.32 = 37 Positivo = 16 Nenativo: 17 Positivo: 36 SUERO 3. ANTI-PR3 Técnica. Fabricante Positivo Neg Anchor. Euroimm 0 1 Anchor. Phadia 21 0 Captura. Wieslab 6 1 Directo. Aeskulisa 0 2 Directo. INOVA 0 2 Directo. Orgentec 0 6 Directo. Zenit 1 0 Dot-blot 1 0 Dot-blot. D-tek 1 1 Dot-blot. Euroimm 0 1 IFI. Euroimmun 0 2 Luminex. Biorad 0 1 Quimiolum. INOVA 2 0 Quimiolumi. Zenit 0 2 SUERO 5. ANTI-PR3 Técnica. Fabricante Positivo Neg Anchor. Euroimm 1 0 Anchor. Phadia 0 20 Captura. Wieslab 1 6 Directo. Aeskulisa 0 2 Directo. INOVA 2 0 Directo. Orgentec 4 2 Directo. Wieslab 0 1 Directo. Zenit 0 1 Dot-blot 0 1 Dot-blot. D-tek 1 1 Dot-blot. Euroimm 0 1 IFI. Euroimmun 1 1 Luminex. Biorad 2 0 Quimiolum. INOVA 2 0 Quimiolumi. Zenit 2 1 SUERO 9. ANTI-PR3 Técnica. Fabricante Positivo Neg Anchor. Euroimm 0 1 Anchor. Phadia 20 0 Captura. Wieslab 7 0 Directo. Aeskulisa 2 0 Directo. INOVA 1 1 Directo. Orgentec 0 6 Directo. Wieslab 0 2 Directo. Zenit 1 0 Dot-blot 1 0 Dot-blot. D-tek 0 2 Dot-blot. Euroimm 1 0 IFI. Euroimmun 0 2 Luminex. Biorad 0 1 Quimiolum. INOVA 2 0 Quimiolumi. Zenit 0 3 51

Resultado para ANTI-PR3 según el tipo de técnica SUERO 3. TIPO DE TÉCNICA SUERO 3. ANTI-PR3 Tipo técnica Positivo 25 20 Anchor 21 1 Captura 6 1 Directo 1 10 15 10 5 0 Positivo Dot-blot 2 2 IFI 0 2 Luminex 0 1 Quimiolum. 2 2 Anchor Captura Directo Dot-blot IFI Luminex Quimiolum. SUERO 5. TIPO DE TÉCNICA SUERO 5. ANTI-PR3 Tipo técnica Positivo 25 20 Anchor 1 20 Captura 1 6 Directo 6 6 15 10 5 0 Positivo Dot-blot 1 3 IFI 1 1 Luminex 2 0 Quimiolum. 4 1 Anchor Captura Directo Dot-blot IFI Luminex Quimiolum. SUERO 9. TIPO DE TÉCNICA SUERO 9. ANTI-PR3 Tipo técnica Positivo 25 20 15 10 Positivo Anchor 20 1 Captura 7 0 Directo 4 9 Dot-blot 3 1 IFI 0 2 Luminex 0 1 5 Quimiolum. 2 3 0 Anchor Captura Directo Dot-blot IFI Luminex Quimiolum. 52

Resumen resultados e imágenes IFI

Suero 1 Diagnóstico: Colitis ulcerosa Patrón ANCA por I.F.I Según terminología consenso internacional: P-ANCA Según terminología participantes del Taller: A-ANCA / P-ANCA (no consenso) Especificidad ANCA MPO: negativo PR3: negativo ANA 54

Suero 1: A-ANCA / P-ANCA A. Marín. H Vall d Hebrón. P etanol INOVA 1/20. A. Marín. H Vall d Hebrón. HEp-2 / neutrófilos etanol. Euroimmun Garbiñe Roy. H Ramón y Cajal. P formalina INOVA 1/20 D.Pascual. H. La Paz. P metanol Biosystems 1/20 55

Suero 1: A-ANCA / P-ANCA IFI objetivo x100: No se detectan puntos intranucleares M.R. Julià. H U Son Espases. P etanol casero I 1/20 56

Suero 2 Diagnóstico: Lupus eritematoso sistémico Patrón ANCA por I.F.I Según terminología consenso internacional: P-ANCA Según terminología participantes del Taller: P-ANCA Especificidad ANCA MPO: positivo PR3: negativo ANA Positivo: anti-sm, SSA, SSB, U1RNP 57

SUERO 2: P-ANCA, MPO+, ANA+ ML Vargas, I Alcalá. H Infanta Cristina. P etanol MOVACO 1/20 H Cruces. MA Pacho. Hep2 Kallestad 1/80 ML Vargas, I.Alcalá. H Infanta Cristina P formalina MOVACO 1/20 D. Pascual H. La Paz. P Metanol Biosystems 1/20 58

Suero 3 Diagnóstico: Granulomatosis con poliangiitis (G. Wegener) Patrón ANCA por I.F.I Según terminología consenso internacional: C-ANCA / NEGATIVO Según terminología participantes del Taller: C-ANCA / NEGATIVO (no consenso) Especificidad ANCA MPO: negativo PR3: positivo (no consenso) Lactoferrina: positivo ANA 59

Suero 3: C-ANCA / NEGATIVO, PR3+, LACTOFERRINA+ M.A. Montes. H Virgen del Rocío. P etanol INOVA 1/20 A. Marín. H Vall d Hebrón. Hep-2/neutrófilos etanol 1/10 Euroimmun D. Pascual. H La Paz. P formalina INOVA 1/20 D. Pascual. H La Paz. P metanol Biosystems 1/20 60

Suero 4 Diagnóstico: Colitis ulcerosa Patrón ANCA por I.F.I Según terminología consenso internacional: P-ANCA Según terminología participantes del Taller: A-ANCA / P-ANCA (no consenso) Especificidad ANCA MPO: negativo PR3: negativo ANA 61

Suero 4: A-ANCA / P-ANCA Y Barrios, A Franco. H U de Canarias. P etanol Zenit 1/20 A. Marín. H Vall d Hebrón. Hep-2/neutrófilos etanol Euroimmun 1/10 MJ martínez. Fundación Jiménez Díaz. P formalina INOVA 1/10 G.Roy. H Ramón y Cajal. P metanol Biosystem 1/20. 62

Suero 4: A-ANCA / P-ANCA Objetivo x100: Se observan puntos intranucleares M.R. Julià. H U Son Espases. P etanol INOVA 1/20 63

Suero 5 Diagnóstico: Colitis ulcerosa Patrón ANCA por I.F.I Según terminología consenso internacional: P-ANCA Según terminología participantes del Taller: P-ANCA / A-ANCA (no consenso) Especificidad ANCA MPO: negativo PR3: negativo (no consenso) ANA Positivo, patrón homogéneo 64

Suero 5: P-ANCA / A-ANCA, ANA+ patrón homogéneo MA Pacho. H Cruces. P etanol INOVA 1/20 P. Martínez. H V Arrixaca. Hep2 Immunoconcepts 1/80 A.Marín. H Vall d Hebrón. P formalina 1/10 Euroimmun G. Roy. H Ramón y Cajal. P metanol Biosystems 1/20 65

Suero 5: P-ANCA / A-ANCA. IFI sobre portas de neutrófilos fijados con formalina G Roy. H.Ramón y Cajal. INOVA 1/20: resultado +/- P Martínez. H Virgen de la Arrixaca. MBL 1/20: resultado - MJ Martínez. Fundación Jiménez Díaz INOVA 1/10: resultado - A Marín. H Vall d Hebrón. INOVA 1/20: resultado + 66

Suero 5: P-ANCA / A-ANCA, ANA+ patrón homogéneo IFI Objetivo x100: No se observan puntos intranucleares M.R. Julià. H U Son Espases. P etanol casero 1/20 M.R. Julià. H U Son Espases. P etanol Biosystems 1/20 67

Suero 6 Diagnóstico: Granulomatosis necrotizante pulmonar Patrón ANCA por I.F.I Según terminología consenso internacional: P-ANCA Según terminología participantes del Taller: A-ANCA (no consenso) Especificidad ANCA MPO: negativo PR3: negativo ANA 68

Suero 6: P-ANCA / A-ANCA F. Pujalte, M. Alsina. Parc logístic de salut. P etanol Zenit 1/20 P. Eiras. H. Universitario Santiago. Hep2 Kallestad 1/40 M.Rodríguez. H Gregorio Marañón. P formalina INOVA 1/10 M.Rodríguez. H Gregorio Marañón. P metanol Biosystems 1/20 69

Suero 6 Objetivo X100: No se detectan puntos intranucleares MR Julià. H.U.Son Espases.. P etanol casero 1/20 70

Suero 6: P-ANCA / A-ANCA C Gelpí. H Sant Pau. P etanol casero absorbido con pellet Hep2 71

Suero 7 Diagnóstico: Granulomatosis con poliangiitis (G. Wegener) Patrón ANCA por I.F.I Según terminología consenso internacional: NEGATIVO / C-ANCA ATÍPICO Según terminología participantes del Taller: NEGATIVO / C-ANCA ATÍPICO (no consenso) Especificidad ANCA MPO: negativo PR3: negativo ANA 72

Suero 7: ANCA negativo / C-ANCA atípico A.Sánchez. Clínica U. Navarra. P etanol INOVA 1/10 P.Martínez. Hep2 Immunoconcepts 1/80 G.Roy. H Ramón y Cajal P formalina INOVA 1/10 G.Roy. H Ramón y Cajal. P metanol Biosystems 1/10 73