Equivalente de jornada completa: 8,15

Proyecto Nº SC93-029 CONTROL QUIMIOTERAPICO DE ASCOSFEROSIS Y DINAMICA POBLACIONAL DE VARROA JACOBSONI EN APIS MELLIFERA IBERICA Equipo Investigador: Jesús Llorente Martínez (Dr. Vet.) Miguel Suárez Robles (L.V.) Julián Atienza del Rey (Dr. C.Q.) José Ignacio Negro Rodríguez (L.Q.) José Luis Bernal Yagüe (Dr. C.Q.) Gustavo Adolfo García Buj (Dr. C.Q.) Julio Brogueras Andrés (L.Q.) Juan José Jiménez Sevilla (Dr C.Q.) Mª Jesús Verdú Gallardo (Dra C.B.) Fernando Calatayud Tortosa (L.B.) Antonio Cobo Ochoa (Dr. Vet.) Manuela Valenzuela Ruano (L.B.) Francisco Martínez Fernandez (I.T.A.) Eduardo Eraso Luca de Tena (Dr. I.A.) Manuel Bustos Ruiz (Dr Vet.) Francisco Padilla Alvarez (Dr. C.B.) Francisco Puerta Puerta (Dr. Vet.) José Manuel Flores Serrano (Dr. Vet.) Equivalente de jornada completa: 8,15 Centro de Investigación: Centro de Investigación: Centro Regional Apícola Extramuros, s/n. - 19280 Marchamalo (GUADALAJARA) Tel: 911/25 05 26 - Fax: 949/25 01 76 Servicio de Investigación en Tecnología Agraria y Alimentaria Finca Zamadueñas, Apartado 172-47080 VALLADOLID Tel: 983/41 47 94, 41 47 69 - Fax: 983/41 47 80 Instituto Valenciano de Investigaciones Agrarias Apartado Oficial - 46113 Moncada VALENCIA Tel: 96/139 10 00 - Fax: 96/139 02 40 Centro de Investigación y Desarrollo Agrario (C.I.D.A.). Junta de Andalucía 1

Duración: Enero 1993 - Diciembre 1995 Coste: Miles de pesetas: 31.462 Financiación INIA 100 % 2

PLANTEAMIENTO Y OBJETIVOS La ascosferosis y la varroosis son dos importantes enfermedades de la abeja de la miel que están provocando graves perjuicios económicos a las explotaciones apícolas. La problemática actual de la ascosferosis es que no existe ningún tratamiento eficaz y el apicultor se ve impotente para frenar un proceso inherente al ritmo productivo del colmenar. Existe la posibilidad de ensayar productos químicos de síntesis, de baja peligrosidad para el hombre y las abejas y de escaso poder residual, para conocer la cantidad necesaria que tienen que recibir las larvas de abeja, para que no prospere el hongo causante de esta enfermedad. Uno de los objetivos del proyecto ha sido el seguimiento de los fungicidas ensayados a través de la cadena alimento + fungicida-nodrizas-larvas, para tratar de cuantificar la dosis curativa aplicada a las colonias de abejas base del ensayo. De los 11 productos seleccionados por su baja toxicidad se seleccionaron tres a partir de los estudios in vitro, (Puerta et al. 1994): Vincrozolina, Benomilo y Captan, aumentando el número de productos ensayados (4) en el desarrollo del proyecto: aceite esencial de ajedrea, Iprodiona, Thiabendazol y Microbutanil. Los trabajos in vitro han consistido en proporcionar una suspensión de esporas a las larvas, sometiéndolas a continuación a un choque térmico, introduciéndolas después en la colmena, para terminar el proceso en una estufa de cultivo para un control final de resultados. Se ha realizado un seguimiento de las pérdidas del principio activo desde la aplicación del antifúngico en la alimentación de la colonia de abejas hasta su llegada a las larvas para averiguar la concentración del producto que hay que aplicar en la alimentación artificial para que llegue la sustancia activa al tubo digestivo larvario en los niveles que han sido previamente determinados. El vehículo utilizado para el suministro de los productos ensayados ha sido el jarabe (miel + azúcar + agua), utilizando distintas concentraciones del producto a ensayar. Cuando aparecen los primeros síntomas de la enfermedad se aplica el alimento medicando dos veces por semana, durante un mes. El uso de productos fitosanitarios en las prácticas apícolas ha tenido numerosos efectos positivos, pero hay que reconocer que la inquietud de la sociedad por la calidad toxicológica de los alimentos y más concretamente por los 3

niveles de los residuos presentes en los mismos o por la contaminación medioambiental ha ido en un progresivo aumento, por lo que se ha realizado el seguimiento de los productos fitosanitarios de la colmena y un control de los residuos que podrían aparecer en la miel procedente de las colmenas tratadas. Se ha aplicado una metodología genérica denominada análisis multirresiduo. Esta metodología se ha empleado sobre larvas de abejas, miel, polen y alimentación artificial. En cuanto a la Varroosis se conoce que la evolución de la población de ácaros en la mayoría de las colonias de abejas de península sigue una pauta uniforme, de acuerdo con los parámetros descritos para Centro Europa. No obstante, se ha observado, que ciertas colonias de abejas, presentan una resistencia natural al parásito, con una baja tasa reproductiva y un elevado porcentaje de hembras infértiles. Estas colonias han sobrevivido, sin ningún tratamiento químico contra el ácaro varroa. Esta conducta puede ser debida a características sociales del hospedador o a diferencias en los parámetros poblacionales del ácaro. Se ha realizado el análisis de las causas de resistencia medrival de determinadas colonias de abejas a V. jacobsoni, que sin recibir tratamiento alguno, presentan una baja tasa reproductiva del ácaro así como un elevado porcentaje de hembras infértiles. RESULTADOS Ascosferosis - Se ha desarrollado una metodología multirresiduo por HPLC para la determinación de varios fungicidas. - Se han determinado las estructuras moleculares de los productos de degradación que aparecen en la miel como consecuencia del uso del fluvalinato. - Se ha desarrollado una metodología multirresiduo por cromatografía de gases para la determinación de varios acaricidas. - Se han estudiado las posibilidades de la cromatografía con fluidos supercríticos en la operación pormenorizada de ditiocarbonatos. - Se ha establecido un método analítico por cromatografía de líquidos para la determinación de Captan y del Benomilo (antifúngicos) y de cromatografía de gases para el análisis de vincrozolina (antifúngico). 4

- Se ha adaptado una metodología analítica para la cuantificación de los aminoácidos procedentes de la hemolinfa de las larvas de las abejas. El benomilo, aplicado en la alimentación, ha demostrado una alta eficacia en el control de la Ascosferosis. Varroosis Es necesario un adecuado manejo evitando el enfriamiento de la cría. - Se ha obtenido la mejor correlación entre la mortalidad acumulada durante 65 días y la población final evaluada mediante tratamiento acaricida. - El ácaro Varroa puede sobrevivir, en fase forética entre 80 y 100 días. - El incremento en la población del ácaro durante cuatro meses se calcula mediante ecuación. - La expectativa de vida del ácaro es de 27 días en colmenas con cría, en las que se reprodujo normalmente. - La tasa reproductiva por ciclo de ácaro es de 1,8 y 2,8 descendientes viables en cría de obrera y de zángano respectivamente. - La base de la resistencia natural a la Varroosis detectada en algunas colonias del sur de la península estriba en el comportamiento de limpieza entre abejas adultas. Se desconoce la heredabilidad de dicho comportamiento. INFORMACION CIENTIFICA Y TECNICA PROPORCIONADA POR EL PROYECTO. POSIBLES APLICACIONES. Ascosferosis - Para la determinación de los niveles de residuos de los plaguicidas, se han utilizado metodologías multirresiduos, basadas principalmente en la utilización de cromatografía en fase gaseosa, empleando otras técnicas (métodos de residuo simple) para aquellos compuestos que no aparecen con las técnicas citadas en primer lugar. La investigación se ha centrado en las dos metodologías citadas. - Se ha examinado la disipación del principio activo (fungicida) suministrado en alimentación artificial de las abejas en su recorrido hasta las larvas. - Se puede afirmar que ya existe un tratamiento aplicable para la Ascosferosis y unas medidas profilácticas para controlarla. 5

Varroosis - Se ha estudiado la etiopatogenia de la enfermedad. - No se ha podido trabajar sobre enjambres tolerantes a la parasitosis, si bien parece que existen colonias con capacidad de antifdifuso frente al ácaro. - Los parámetros poblacionales de Varroa jacobsoni son similares a los obtenidos para otras razas y otros climas. - Se han descrito metodologías indirectas para el estudio de los parámetros poblacionales ante la dificultad que ofrece la cría del ácaro en el laboratorio y la imposibilidad de utilizar marcajes no realizativos en las colmenas. - La metodología permite modelizar la evolución de la población del ácaro y detectar las posibles variaciones de los parámetros en colonias supuestamente tolerantes. FORMACION DE PERSONAL Elaboración y presentación de la tesis doctoral de Fernando Calatayud Tortosa, titulada Dinàmica poblacional de l acar ectoparàsit Varroa jacobsoni en les colònies d abelles meliliferes, en la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad de Valencia. Septiembre, 1995. Apto cum laude. Elaboración y presentación de la tesis doctoral de Mariano Higes Pascual, Titulada Control quimioterápico de la Ascosferosis de la abeja melífera en condiciones de caampo, en la Facultad de Veterinaria de la Universidad Complutense de Madrid. PUBLICACIONES Artículos científicos Calatayud, F. and Verdú, M.J. 1993. Hive debris counts in honeybee colonies. A method to estimate the size of small populations and rate of growth of the mite V. jacobsoni. Experimental and Applied Acarology, 17. 12. 889-894. Calatayud, F. and Verdú, M.J. 1994. Survival of the mite Varroa jacobsoni Oud. in broodless colonies of the honeybee Appis mellifera (Hym.; Apidae). Experimental and Applied Acarology, 18. 10. 603-612. Calatayud, F. and Verdú, M.J. 1995. Number of adult female mites Varroa jacobsoni Oud. on hive debris from honeybee colonies artificially infested to 6

monitor mite population increase. Experimental and Applied Acarology, 19. 181-188. Calatayud, F. y Verdú, M.J. 1995. Expectativa de vida del ácaro ectoparásito Varroa jacobsoni en colonias de abejas melíferas durante periodos reproductivos. Investigación Agraria. Producción y Sanidad Animales, 10. 2. 154-161. Atienza, J., Jiménez, J.J., Bernal, J.L. and Martín, M.T. 1993. Supercritical fluid extraction of fluvalinate residues in honey. Determination by high-performance liquid chromatography. Journal of Chromatography, 655. 95-99. Jiménez, J.J., Atienza, J. and Bernal, J.L. 1995. Characterization of fluvalinate residues in honey by gas chromatography/mass spectrometry and gas chromatography/atomic emission detection. J. High. Resol. Chromat., 18. 367-373. Jiménez, J.J., Atienza, J. and Bernal, J.L. 1995. How much acaricide in the honey? Peak, 2. 1-4. Jiménez, J.J., Bernal, J.L. and Atienza, J. 1995. CGC/AED and CGC/ECD/NPD comparison for the determination of acaricides in honey after hexane/acetone extraction. Chromatographia, 42. 3/4. 130-134. Artículos de divulgación Calatayud, F., Barberá, C. y Verdú, M.J. 1994. Fluvalinato. Eficacia comparada de dos formas de aplicación. Vida Apícola. 65. 20-25. Calatayud, F. y Verdú, M.J. 1995. Cómputo de ácaros en los detritus de la colmena. Vida Apícola. 69. 41-46. Suárez, M. y Higes, M. 1993. Las Agrupaciones de Defensa Sanitaria en apicultura. Cuadernos de Apicultura. 13. 12-14. Flores, J.M., Ruiz, J.A., Ruiz, J.M., Puertas, F., Bustos, M., Padilla, F. y Campano, F. 1993. El fenómeno de la resistencia natural a la varroasis Vida Apícola, 74. 45-49. Puerta, F., Flores, J.M., Bustos, M. y Padilla, F. 1993. Distribución selectiva de varroa en larvas de Apis mellifera ibérica. Vida Apícola, 59. 21-25. Flores, J.M., Puerta, F., Bustos, M., Padilla, F., Campano, F., Ruiz, J.A. y Navero, F. 1995. Efecto de las causas predisponentes y métodos de prevención en el colmenar. Vida Apícola, 71. 33-36. 7

Flores, J.M., Puerta, F., Bustos, M., Padilla, F., Jiménez, A. y Trocoli, F. 1995. Efecto del ATC sobre la germinación de esporas de A. apis. Revista Iberoamericana de Micología, 12. 49-51. Alonso, J.M., Rey, J., Puerta, F., Hermoso, J. and Flores, J.M. 1993. Enzymatic equipment of Ascosphaera apis and the development of infection by the fungus in Apis mellifera. Apidologie, 24. 383-390. Puerta, F., Flores, J.M., Bustos, M. y Padilla, F. and Campano, F. 1994. Chalkbrood development in honeybee brood under controlled conditions. Apidologie, 25. 540-546. Fores, J.M., Puerta, F., Padilla, F., Campano, F., Ruiz, J.A. y Ruiz, D. 1994. Lucha contra la varroasis: situación actual y perspectivas. Vida Apícola, 67. 36-40. Higes, M. 1995. El pollo escayolado (Ascosferosis) en la abeja. I parte. El Colmenar. 40. 13-15. Libros Puerta, F., Flores, J.M., Bustos, M. y Padilla, F. 1995. Desarrollo de la varroasis en Apis Mellifera Ibérica. Ed. de la UCO. 1. 1.245 pp. Trabajos presentados a congresos, reuniones o simposios Verdú, M.J. Dinámica poblacional de Varroa jacobsoni en Apis mellifera. XIII Feria Apícola de Castilla-La Mancha. Pastrana, Guadalajara (España). 1994. 147-152. Jiménez, J.J., Atienza, J. and Bernal, J.L. Characterization of fluvalinate residues in honey. Sixteenth International Simposum on Capillary Cromatograph. Riva del Garda (Italia). Septiembre, 1994. Ed. P. Sandra. University of Gent, Belgium. I. 509-518. Jiménez, J.J., Bernal, J.L., Atienza, J. and Toribio, L. Determination of amitraz and related degradation products on honey by GC/AED and GC/MS. 18 th International Symposium on Capillary Chromato Graphy. Riva del Garda (Italia). Mayo, 1996. Ed. P. Sandra. University of Gent, Belgium. II. 1.477-1.485. Bernal, J.L., Jiménez, J.J., Atienza, J., del Nozal, Mª.J. and Toribio, L. Use of solid-phase and solvent extraction for the analysis of residual vinclozolin in honey and beed-larvae samples. 1 st European Pesticide Residue Workshop. Alkmaar (Holanda). Junio, 1996. 8

Higes, M., Suárez, M. y Llorente, J. Ensayo sobre la distribución del fungicida Benomilo en el interior de las colmenas. 34 Congreso Mundial de Apicultura. Lausana. Agosto, 1995. Otros trabajos de difusión de resultados Conferencias Conferenciante: Mariano Higes. Título: Ascosferosis: etiopatogenia y tratamiento. Lugar: Facultad de Veterinaria de Madrid. Programa de doctorado del Departamento de Sanidad Animal. I. Año: 1993. Conferenciante: Mariano Higes. Título: Ascosferosis: situación actual y medidas de control. Lugar: León. VIII Jornadas Apícolas. Año: 1994. Conferenciante: Mariano Higes. Título: Ascosferosis y Loque americana: perspectivas de futuro. Lugar: León. IX Jornadas Apícolas. Año: 1995. 9