Dispositivo de prueba Hygiena para la detección de levaduras Propósito En la fabricación de alimentos y bebidas, la presencia de levaduras no deseadas en el equipo de procesamiento puede introducir problemas de deterioro del producto o sabores indeseables (por ejemplo, en la producción de la cerveza y vino). Una parte importante de un proceso de limpieza profundo es monitorear en tiempo real la efectividad de la limpieza. Fabricantes de alimentos y bebidas al rededor del mundo utilizan el sistema de monitoreo de Hygiena para ATP para verificar que los procesos de limpieza han funcionado correctamente y que residuos microbianos y otros residuos se han eliminado de manera efectiva de las superficies. Dado a que los sistemas de ATP detectan trifosfato de adenosina (ATP) y no pueden diferenciar entre células microbianas y otras materias orgánicas. Esto no debería importar para la persona a cargo del saneamiento, ya que el objetivo principal es eliminar todos los residuos orgánicos de las superficies durante el proceso de limpieza. Sin embargo, la detección de los organismos específicos a bajos niveles, tales como levaduras, por el sistema de Hygiena para ATP es importante para las procesadoras de alimentos y bebidas que manejan levaduras y puede llegar a ser problemático si no se detectan. El propósito de este estudio es demostrar la detección de una variedad de levaduras en ausencia de una matriz alimentaria en una gama de dispositivos de prueba Hygiena. (Es importante señalar que no existen levaduras en el aislamiento y en una planta de fabricación de alimentos las levaduras siempre se encuentran dentro de una matriz alimentaria.) Este estudio demostrará que los dispositivos de prueba de Hygiena ATP detectan eficazmente una variedad de levaduras a niveles bajos con poca variación en los resultados. Métodos Todas las levaduras se cultivaron en PDB (caldo de dextrosa de patata) a 37 C y 30 C durante 72 horas y luego subcultivadas en PDA (agar de dextrosa de patata) para comprobar la pureza. Las levaduras se cultivaron de nuevo en PBD antes de ser diluido en MRD (diluyente de recuperación máxima). No había necesidad de lavar la levadura en solución salina antes de la medición, ya que es más práctico medir el fondo del ATP (ATP sin levaduras) en lugar de tratar de removerlo y estresar la levadura en el proceso. Las levaduras en el campo nunca se lavaran a fondo del ATP (libre), por lo que este método es más práctico. El ATP de fondo (ATP sin levaduras) se detectó utilizando un dispositivo de prueba de propiedad interno de control de calidad que detecta ATP no microbiano. Levaduras usadas en este experimento: 1. Saccharomyces cerevisiae 2. Candida albicans 3. Zygosaccharomyces bailii 4. Candida parasilosis 5. Rhodotorula rubra Los siguientes dispositivos de Hygiena fueron probados: 1. SuperSnap High-Sensitivity Surface ATP 2. UltraSnap Surface ATP 3. AquaSnap Total Water ATP Las series de dilución utilizadas fueron las siguientes: 1. Neat culture (Cultura Neat) 2. Dilución -1 3. Dilución -2 4. Dilución -3 5. Dilución -4 6. Dilución 7. Dilución -6
De cada dilución se añadió 10 μl directamente a la yema del hisopo o se añade 100 μl al cucharón. Cada dispositivo se activó y se leyó en el sistema de monitoreo EnSURE. Cinco repeticiones se ejecutaron de cada dilución. Placas de referencia también se realizaron utilizando el método de Miles y Mizra mediante la inoculación de cada dilución como manchas de 10 μl en el PDA para estimar exactamente el número por 10 μl y también para estimar a partir del método M&M el %CV del método de la inoculación independientemente de los resultados de las URL. Resultados Levadura 1: Saccharomyces cerevisiae Comenzando un cultivo durante la noche = 2e7 levaduras por ml (25,500,000) Tabla 1: Promedio de Saccharomyces cerevisiae en la detección de dispositivos de prueba Hygiena (RLU) (n = 5) Non-yeast ATP (ATP sin levaduras) Neat 9235 7969 9888 245-1 7966 5312 9790 42-2 2486 765 7648 8-3 183 77 1116 1-4 28 23 246 0 0 0 12 0 Neat CV% 1 9 1 17-1 CV% 3 8 2 11-2 CV% 9 6 4 11-3 CV% 9 10 13 149-4 CV% 8 21 7 NA CV% NA NA 18 NA Tabla 2: Recuentos de placas de Saccharomyces cerevisiae (CFU) Dilución Rep 1 Rep 2 Rep 3 Rep 4 Rep 5 Promedio / Limite de -3 255 241 274 291 243 261 (<500 CFU) -4 21 22 27 21 24 23 (<50 CFU) 1 2 2 2 2 2 (<10 CFU) Tabla 3: Limite de detección para Saccharomyces cerevisiae (CFU)
Levaduras 2: Candida albicans Comenzando un cultivo durante la noche = 2e7 levaduras por ml (23,660,000) Tabla 4: Promedio de Candida albicans en la detección de dispositivos de prueba Hygiena (RLU) (n = 5 Non-yeast ATP (ATP sin levaduras) Neat 9083 8068 9891 257-1 7664 6864 9374 74-2 2838 996 8265 8-3 290 95 1146 0-4 91 30 133 0 1 5 9 0 Neat CV% 2 3 1 3-1 CV% 2 2 4 20-2 CV% 10 4 3 10-3 CV% 8 5 13 NA -4 CV% 6 11 15 NA CV% 37 16 8 NA Tabla 5: Recuentos de placas de Candida albicans (CFU) Dilución Rep 1 Rep 2 Rep 3 Rep 4 Rep 5 Promedio / Limite de -3 201 250 266 191 275 237 (<250 CFU) -4 24 27 21 31 16 24 (<50 CFU) 4 2 1 1 2 2 (<10 CFU) Tabla 6: Límite de Detección de Candida albicans (CFU)
Levaduras 3: Zygosaccharomyces bailii Comenzando un cultivo durante la noche = 1e6 levaduras por ml (1,280,000) Tabla 7: Promedio de Zygosaccharomyces bailii de detección en los dispositivos de prueba Hygiena (RLU) (n = 5) Non-yeast ATP (ATP sin levaduras) Neat 6928 7892 9917 659-1 1718 2993 9400 174-2 243 263 4023 19-3 34 27 480 1-4 4 5 47 0 0 0 5 0 Neat CV% 5 2 1 7-1 CV% 7 4 3 10-2 CV% 8 11 5 14-3 CV% 7 19 14 91-4 CV% 15 32 10 NA CV% NA NA 9 NA Tabla 8: Recuentos de placas para bailii Zygosaccharomyces (CFU) Dilution Rep 1 Rep 2 Rep 3 Rep 4 Rep 5 Promedio / Limite de -2 142 112 128 114 144 128 (<250 CFU) -3 11 25 18 14 19 17 (<50 CFU) -4 0 0 2 3 1 1 (<10 CFU) 0 1 0 0 0 0 (<10 CFU) Tabla 9: Límite de detección para Zygosaccharomyces bailii (CFU)
Levaduras 4: Candida parasilosis Comenzando un cultivo durante la noche = 3e7 levaduras por ml (3,124,000) Tabla 10: Detección Promedio parasilosis Candida en dispositivos de prueba Hygiena (RLU) (n = 5) Non-yeast ATP (ATP sin levaduras) Neat 8874 8351 9999 129-1 8122 4875 9999 25-2 3124 478 8114 7-3 284 58 897 1-4 33 12 142 0 0 0 8 0 Neat CV% 2 11 2 11-1 CV% 4 5 5 9-2 CV% 4 6 5 14-3 CV% 8 8 12 121-4 CV% 9 15 9 NA CV% NA NA 14 NA Tabla 11: Recuentos de placas de Candida parasilosis (CFU) Dilution Rep 1 Rep 2 Rep 3 Rep 4 Rep 5 Promedio / Limite de -3 312 347 325 284 294 312 (<500 CFU) -4 28 24 31 18 27 26 (<50 CFU) 2 3 3 1 1 2 (<10 CFU) Tabla 12: Límite de Detección para Candida parasilosis (CFU)
Levaduras 5: Rhodotorula rubra Comenzando un cultivo durante la noche = 1e7 levaduras por ml (1,130,000) Tabla 13: Detección Promedio Rhodotorula rubra en dispositivos de prueba Hygiena (RLU) (n = 5) Non-yeast ATP (ATP sin levaduras) Neat 8712 7894 8989 88-1 5841 5111 8478 11-2 2811 1421 7133 4-3 198 88 1011 0-4 21 4 114 0 0 0 5 0 Neat CV% 2 1 1 1-1 CV% 4 4 4 8-2 CV% 4 4 6 10-3 CV% 8 5 10 88-4 CV% 11 12 19 NA CV% NA NA 14 NA Tabla 14: Recuentos de placas de Rhodotorula rubra (RLU) Dilution Rep 1 Rep 2 Rep 3 Rep 4 Rep 5 Promedio / Limite de -3 112 147 125 84 94 113 (<250 CFU) -4 14 16 15 14 17 15 (<50 CFU) 0 0 0 1 0 0 (<10 CFU) Tabla 15: Límite de Detección de Rhodotorula rubra (CFU) Conclusión En general, los dispositivos de prueba para superficies SuperSnap y UltraSnap para ATP detectan aproximadamente <50 UFC/mL de levaduras. La variación en los resultados a este bajo nivel fue muy mínima con el rango de %CV como sigue: SuperSnap (6-11%), UltraSnap (12-21%) y AquaSnap (8-18%).