GELES FORMULADOS CON REACTIVOS MONOCLONALES DE ORIGEN MURINO O HUMANO O GEL NEUTRO

ScanGel ABO Complete/RH/K Duo 86719 2 x 24 tarjetas 86709 2 x 144 tarjetas ScanGel ABO Complete/RH1 Duo y ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo tarjetas GELES FORMULADOS CON REACTIVOS MONOCLONALES DE ORIGEN MURINO O HUMANO O GEL NEUTRO Grupaje ABO. Determinación de los Ag RH1, RH2, RH3, RH4, RH5 y KEL1 IVD Todos los productos fabricados y comercializados por la sociedad Bio-Rad se hallan bajo un sistema de garantía de calidad desde la recepción de las materias primas hasta la comercialización de los productos finales. Cada lote de producto final se somete a un control de calidad y sólo se comercializa si está en conformidad con los criterios de aceptación. El fabricante conserva la documentación referente a la producción y al control de cada lote. 21

I - UTILIZACIÓN Y PRINCIPIO DEL REACTIVO Estas tarjetas están estrictamente reservadas para el empleo profesional y para los diagnósticos in vitro. Diseñada para grupaje ABO y la determinación de antígenos RH1 (D), RH2 (C), RH3 (E), RH4 (c), RH5 (e) y KEL1 (K), el test combina los principios de aglutinación y filtración en gel. La reacción se obtiene y se lee tras la centrifugación de unos microtubos especialmente diseñados, rellenos de gel impregnado del reactivo específico del antígeno eritrocitario a determinar (prueba globular del grupaje ABO y determinación de antígenos RH1, RH2, RH3, RH4, RH5 y KEL1) o bien de gel neutro para la prueba sérica de grupaje ABO. La suspensión de glóbulos rojos y el plasma o el suero (para la prueba sérica del grupaje ABO) se depositan en el pocillo de cada microtubo y se centrifuga inmediatamente. Los glóbulos rojos no aglutinados se depositan en el fondo del microtubo, mientras que los aglutinados se retienen por todo el gel en función de su tamaño. Su posición en el gel determina la intensidad de la reacción. - + ++ +++ ++++ II - CARACTERÍSTICAS DE LOS REACTIVOS OBSERVACION IMPORTANTE : La tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo debe utilizarse obligatoriamente al mismo tiempo que la tarjeta ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo 1. Tarjetas ScanGel ABO Complete/RH1 Duo Los tres primeros microtubos de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo contienen cada uno un gel impregnado con un reactivo monoclonal de origen murino respectivamente de especificidad anti-abo1 (A), anti-abo2 (B) y anti-abo3(ab). Estos anticuerpos se producen a partir de los siguientes clones : anti-abo1 (A) : 15750F7 anti-abo2 (B) : X9 Anti-ABO3 (AB) : AB5-63A5A2 / X9 El cuarto microtubo contiene un gel impregnado con un reactivo monoclonal de origen humano de especificidad anti-rh1 (D). Este anticuerpo monoclonal es una IgM secretada por el clon B9A4-B2A6A6A1A1. Este anti-rh1(d) no permite la detección del fenotipo RH1 parcial categoría VI (DVI). 22

El quinto y el sexto microtubo contienen gel neutro (Neutr.) Estos reactivos contienen azida sódica (< 0,1 %) como conservante. El código del producto y el número de tarjetas por caja se indican en la etiqueta de la caja. 2. Tarjetas ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo Los cinco primeros microtubos de la tarjeta ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo contienen cada uno un gel impregnado con un reactivo monoclonal de origen humano respectivamente de especificidad anti-rh2 (C), anti-rh3 (E), anti-rh4 (c), anti-rh5 (e) y anti-kel1 (K). Estos anticuerpos se producen a partir de los siguientes clones: Anti-RH2 (C) : MS-24 Anti-RH3 (E) : MS-260/MS-258 Anti-RH4 (c) : MS-33 Anti-RH5 (e) : MS-63/MS-21/MS-16 Anti-KEL1 (K) : MS-56 El sexto microtubo contiene el gel sin anticuerpos y corresponde al control (Ctl) válido para las dos tarjetas ScanGel ABO Complete/RH1 Duo y ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo. Estos reactivos contienen azida sódica (< 0,1 %) como conservante. El código del producto y el número de paneles por caja se indican en la etiqueta de la caja. III - CADUCIDAD Y CONSERVACIÓN La fecha de caducidad y las condiciones de almacenamiento se indican en la caja. Las tarjetas deben conservarse a temperatura ambiente, de +15 C a +25 C. Las tarjetas deben almacenarse verticalmente, protegidas de las fuentes de calor, en un local con escasas variaciones de temperatura y humedad relativa. IV - PRECAUCIONES La calidad de los resultados depende del respeto de las buenas prácticas de laboratorio siguientes : No utilizar los reactivos después de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. No utilizar tarjetas que muestren signos de desecación o burbujas, o si la lengüeta de sellado muestra signos de deterioro. Como los reactivos contenidos en los microtubos tienen una naturaleza diferente, es indispensable tomar las precauciones necesarias para no provocar contaminaciones inter-microtubos, especialmente cuando se retira la lengüeta de aluminio y en las etapas de distribución. Utilizar una punta de pipeta para cada muestra. 23

Comprobar la precisión y el correcto funcionamiento de las pipetas y de los otros equipos. Llevar guantes y gafas de protección durante la manipulación de los reactivos y de las muestras. No pipetear directamente con la boca. Evitar las salpicaduras. En caso de salpicaduras, limpiar las superficies manchadas con lejía de 12ºCl diluida al 10% y secar con papel absorbente. El material utilizado para la limpieza deberá ser desechado en un contenedor especial para residuos contaminados. Producto y fungible que hayan estado en contacto con muestras o reactivos que contenga material de origen humano deben ser descartados una vez descontaminados. Las fichas de seguridad están disponibles bajo petición. V - RECOGIDA Y TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS La sangre debe obtenerse en condiciones de asepsia en un tubo sin o con anticoagulante (EDTA, CPD). Tras la obtención, la prueba debe realizarse lo antes posible. Las muestras que no puedan analizarse rápidamente deberán conservarse entre +2 C y +8 C para ser sometidas a prueba en las 48 horas siguientes. En ningún caso debe observarse hemólisis. No calentar las muestras. VI - TÉCNICAS Material suministrado ABO Complete/RH/K Duo 2 x 24 tarjetas que incluye ScanGel ABO Complete/RH1 Duo 24 tarjetas ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo 24 tarjetas ABO Complete/RH/K duo 2 x 144 tarjetas que incluye ScanGel ABO Complete/RH1 Duo 144 tarjetas ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo 144 tarjetas Material necesario pero no suministrado Medios de suspensión de los glóbulos rojos 86441 ScanLiss 100 ml 86442 ScanLiss 500 ml 86448 ScanSol 100 ml 86449 ScanSol 500 ml IH QC : Control de serología de grupos sanguíneos 86745 IH QC 4 x 6 ml ReverScan A1 y B : Hematíes para grupo sérico del grupaje ABO 86790 ReverScan A1, B, 2 x 5 ml 24

Centrífuga : ScanGel Centrifuge Pipetas automáticas o semiautomáticas Puntas de pipetas Tubos de un solo uso Contenedor especial para residuos con riesgo biológico Lejía Guantes de látex Papel absorbente Gafas de protección Controles Grupo hemático ABO y la determinación de antígenos RH1, RH2, RH3, RH4, RH5 y KEL1 Controles positivo y negativo : glóbulos rojos encontrados positivos y negativos para el antígeno estudiado. Estos controles deben ser testados simultáneamente con los glóbulos rojos de la muestra a probar para validar la actividad propia del reactivo. Grupo sérico ABO Control positivo (plasma o suero conocido que contenga al menos un anticuerpo específico), control negativo (plasma o suero conocido que no contenga ningún anticuerpo). IH QC : Control de serología de grupos sanguíneos. Procedimiento Seguir estrictamente el protocolo propuesto. La tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo debe utilizarse obligatoriamente al mismo tiempo que la tarjeta ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes, con la misma suspensión de glóbulos rojos que habrá que comprobar. Antes de su utilización, llevar todos los reactivos a temperatura ambiente. Por centrifugación, separar el suero o el plasma de los glóbulos rojos de la muestra a probar. Cuando la obtención se sangre se realiza en tubo seco, el suero se debe centrifugar. VI.1 - Suspensión en ScanLiss a) Previa preparación de la suspensión de globulos rojos 1% para testarse en ScanLiss Poner 1 ml de ScanLiss en un tubo de un solo uso identificado. Añadir 10 μl del precipitado globular. Mezclar. La suspensión de glóbulos rojos está lista para su uso. 25

b) Técnica 1. Identificar cada tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo y ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo por el nombre o el número de muestra correspondiente. Retirar las lengüetas de aluminio de los paneles con cuidado para evitar las contaminaciones interpocillos. Resuspender los hematíes antes de usar. 2. Distribuir 50 μl de ReverScan A1 en el pocillo de microtubo 5 de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo. 3. Distribuir 50 μl de ReverScan B en el pocillo de microtubo 6 de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo. 4. Añadir 50 μl de plasma o de suero a ensayar en el pocillo de los microtubos 5 y 6 de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo. 5. Distribuir 50 μl de suspensión globular a ensayar en los pocillos de los microtubos 1, 2, 3 y 4 de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo, y en el pocillo de cada microtubo de la tarjeta ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo. 6. Centrifugar 10 minutos en ScanGel Centrifuge. 7. Leer las reacciones. VI.2 - Suspensión en ScanSol a) Preparación extemporánea de una suspensión de glóbulos rojos 5% en ScanSol Poner 0,5 ml de ScanSol en un tubo de un solo uso identificado. Añadir 25 μl del precipitado globular. Mezclar. La suspensión de glóbulos rojos está lista para su uso. b) Técnica 1. Identificar cada tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo y ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo por el nombre o el número de muestra correspondiente. Retirar las lengüetas de aluminio de los paneles con cuidado para evitar las contaminaciones interpocillos. Resuspender los hematíes antes de usar. 2. Distribuir 50 μl de ReverScan A1 en el pocillo de microtubo 5 de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo. 3. Distribuir 50 μl de ReverScan B en el pocillo de microtubo 6 de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo. 4. Añadir 50 μl de plasma o de suero a ensayar en el pocillo de los microtubos 5 y 6 de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo. 26

5. Distribuir 10 μl de suspensión globular a ensayar en los pocillos de los microtubos 1, 2, 3 y 4 de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo, y en el pocillo de cada microtubo de la tarjeta ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo. 6. Centrifugar inmediatamente 10 minutos en ScanGel Centrifuge. El retraso entre el final de la distribución y el principio de la centrifugación no debe exceder los 10 minutos. 7. Leer las reacciones. VII - INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS La presencia de aglutinados en la superficie o dispersos en el gel corresponde a un resultado positivo. Un sedimento de glóbulos rojos en el fondo del microtubo corresponde a un resultado negativo. Una reacción positiva en los microtubos 1 a 4 de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo, o en los microtubos 1 a 5 de la tarjeta ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo solamente se podrá validar si el microtubo Ctl de la tarjeta ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo es negativo. Si el microtubo Ctl presenta una reacción positiva : Lavar los glóbulos rojos con solución salina isotónica (NaCl 0,9%). Repetir el procedimiento como se indica en VI.1 o VI.2. Si el microtubo Ctl es negativo, la interpretación para los microtubos 1 a 4 de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo es la siguiente : Resultado positivo Resultado positivo bajo Resultado negativo ++++ + a +++ - Si el microtubo Ctl es negativo, la interpretación para los microtubos de la tarjeta ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo es la siguiente : Resultado positivo Resultado positivo bajo Resultado negativo +++ a ++++ + a ++ - Si el microtubo Ctl da siempre una reacción positiva repetir la prueba utilizando otra técnica que no sea la técnica de filtración en gel. La interpretación de les microtubos 5 y 6 de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo es la siguiente : Resultado positivo Resultado negativo + a +++ - Los resultados sólo son válidos si los controles positivo y negativo dan los resultados esperados. 27

a) Interpretación del grupaje ABO Un agrupamiento ABO completo conlleva 2 pruebas complementarias : la prueba globular realizada con los reactivos anti-abo1 (A), anti-abo2 (B) y anti-abo3 (AB) y la prueba sérica realizada con los glóbulos rojos problema A1 y B. En la tabla siguiente se muestran los perfiles de las reacciones esperadas con los reactivos anti-abo1 (A), anti-abo2 (B), anti-abo3 (AB) y los glóbulos rojos problema A1, B así como sus interpretaciones : GROUPOS PRUEBA GLIBULAR PRUEBA SÉRICA Anti-ABO1 (A) Anti-ABO2 (B) Anti-ABO3 (AB) ReverScan A1 ReverScan B A + - + - + B - + + + - AB + + + - - O - - - + + La prueba globular y la prueba sérica deben dar resultados concordantes. Cualquier divergencia entre ambas pruebas deberá resolverse antes de dar un resultado de agrupamiento ABO. Cada vez que se observe una divergencia entre las pruebas globular y sérica, habrá que realizar pruebas complementarias con los controles adecuados. b) Interpretación del microtubo RH1 (D) Un resultado positivo en al microtubos RH1 (D) indica la presencia del antígeno RH1 (D) en la superficie de los glóbulos rojos. A pesar de estos resultados, el anti-rh1 (D) de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo no permite la detección de todos los antígenos RHW1 (D débil) ni la detección del fenotipo RH1 parcial de categoría VI (DVI). Si la detección de estos antígenos particulares fuera necesaria, se efectuará una prueba complementaria con el reactivo ScanGel Monoclonal Anti-RH1(D)/RHW1 asociado a la tarjeta ScanGel COOMBS Anti-IgG, -C 3 d. c) Interpretación de los microtubos RH2 (C), RH3 (E), RH4 (c) y RH5 (e) Un resultado positivo en uno de los microtubos RH2 (C), RH3 (E), RH4 (c) y RH5 (e) indica la presencia del antígeno correspondiente en la superficie de los glóbulos rojos probados. d) Interpretación del microtubo KEL1 (K) Un resultado positivo en el microtubo KEL1 (K) indica la presencia del antígeno KEL1 (K) en la superficie de los glóbulos rojos probados. 28

VIII - COMPORTAMIENTO a) Comportamiento específico de los reactivos anti-abo1 (A), anti-abo2 (B) y anti-abo3 (AB) Se evaluaron los reactivos anti-abo1 (A), anti-abo2 (B) y anti-abo3 (AB) utilizando un panel de 1.641 muestras no seleccionadas (1.150 donantes, 332 pacientes, y 159 recién nacidos) que se completó con un panel de muestras seleccionadas (antígenos débiles o variantes). Cada resultado ha sido comparado con el obtenido en técnica de placa, tubo, microplaca o filtración de gel. Las 1.641 muestras han dado resultados compatibles con los esperados. Se comprobó un panel de 17 muestras seleccionadas (Ax, B3, AxB, Bh, CisAB, A3B, ABf). Todas las muestras fueron detectadas con una reactividad de 1+ a 3+. Los antígenos B adquiridos comprobados no fueron detectados con el anti-abo2(b) de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo. Los reactivos anti-abo1 (A), anti-abo2 (B) y anti-abo3 (AB) de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo mostraron una buena reproducibilidad interanálisis e intraanálisis. b) Comportamiento específico del reactivo anti-rh1 (D) Se evaluó el reactivo anti-rh1 (D) utilizando un panel de 1.641 muestras no seleccionadas (1.150 donantes, 332 pacientes, y 159 recién nacidos) que se completó con un panel de muestras seleccionadas (antígenos débiles o variantes). Cada resultado ha sido comparado con el obtenido en técnica de placa, tubo, microplaca o filtración de gel. Las 1.641 muestras han dado resultados compatibles con los esperados. Se ha ensayado un panel de 24 muestras especiales (Ag débiles, variantes y fenotipos especiales). Se ha detectado el conjunto de las variantes y de los fenotipos especiales, excepto una muestra de fenotipo RH1 parcial categoría VI (DVI). Fue detectado el 94% de los antígenos RHW1 (D débil) comprobados. Ambos reactivos anti-rh1 (D) de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo mostraron buena reproducibilidad interanálisis e intraanálisis. c) Comportamiento específico del reactivo neutro (pocillos A1 y B, posición 5 y 6 de la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo) Los hematíes ReverScan (A1, B) se han evaluado en un panel de 1.132 muestras. Cada resultado se ha comparado con el obtenido en la técnica de placa, microplaca o por filtración sobre gel. En el conjunto de las muestras, 1.130 han dado resultados conforme a lo esperado y 2 han presentado discordancias, con uno de los métodos utilizados en paralelo, que han podido eliminarse tras la comparación con la prueba globular. 29

Los hematíes ReverScan asociados a la tarjeta ScanGel ABO Complete/RH1 Duo presentan una buena reproducibilidad tanto intra como interensayo, sea cual sea la muestra probada. d) Comportamiento especifico de la tarjeta ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo Se ha evaluado el comportamiento de la tarjeta ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo en un panel de 1518 muestras no seleccionadas (1.149 donantes, 332 pacientes, y 37 recién nacidos) que se completó con un panel de muestras seleccionadas (antígenos débiles). Cada resultado ha sido comparado con el obtenido en técnica de placa, tubo, microplaca o filtración de gel. Las 1518 muestras han dado resultados compatibles con los esperados. Se ha analizado un panel de 13 muestras débiles y fenotipos raros. Se han detectado todos con una reactividad de 2+ a 4+. Los reactivos de la tarjeta ScanGel Monoclonal RH/K Phenotypes Duo mostraron una buena reproducibilidad interanálisis e intraanálisis. LÍMITES Los resultados anormales pueden ser consecuencia de : una contaminación bacteriana o química del suero, del plasma, de los glóbulos rojos o del material. una medicación o un estado patológico del paciente que provoque una reacción cruzada. el uso de un medio de suspensión para los glóbulos rojos diferente al recomendado. una preparación de los glóbulos rojos diferente a la recomendada. una hemólisis de los glóbulos rojos problema. la presencia de fibrina (imagen de un sedimento celular compacto en el fondo de un microtubo acompañado de una fina banda rosada en la zona superior del gel correspondiente a los glóbulos rojos retenidos por los residuos de fibrina). contaminación entre microtubos. uso de otro procedimiento del descrito anteriormente. Con la licencia de DIAMED, S.A., 1785 Cressier-sur-Morat, Suiza 30

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