1. Introducción 2. Metodología 3. Clasificación de los cromosomas 4. Técnicas de bandeado cromosómico 5. Citogenética molecular
Metodología Tejido sólido
Sangre periférica Metodología Fitohemaglutinina G-banding
Metodología Metafase humana teñida con Giemsa
Clasificación de los cromosomas Los cromosomas se clasifican por pares de homólogos y se ordenan atendiendo a: Tamaño Posición del centrómero (constricción primaria) Presencia de constricciones secundarias En el cariotipo humano los cromosomas se clasifican en siete grupos: A, B, C, D, E, F y G
Clasificación de los cromosomas Cariotipo estándar
Técnicas de bandeado cromosómico 1. Bandas que marcan todo el cromosoma Bandas Q Bandas G Bandas R Bandas G de alta resolución 2. Bandas que marcan regiones específicas Bandas C Bandas T Bandas NOR
Técnicas de bandeado cromosómico Bandas que marcan todo el cromosoma Bandas Q ADN rico en AT Bandas Q Quinacrina patrón similar a las bandas G se observan con el microscopio de fluorescencia
Técnicas de bandeado cromosómico Bandas que marcan todo el cromosoma Bandas G ADN rico en AT Resultan de interacciones del ADN y proteínas con los colorantes que componen la tinción Giemsa. Se desnaturalizan proteínas con tripsina.
Técnicas de bandeado cromosómico Bandas-G Los cromosomas se tiñen en zonas oscuras y claras Las bandas G oscuras son regiones de replicación tardía en la fase S, contienen cromatina más condensada Las bandas G claras se replican generalmente más tarde en la fase S. Cromatina menos condensada.
Técnicas de bandeado cromosómico Bandas que marcan todo el cromosoma ADN rico en GC Bandas R La técnica de bandas R supone la desnaturalización de regiones del cromosoma por calor seguida por tinción de Giemsa
Técnicas de bandeado cromosómico Bandas que marcan todo el cromosoma Bandas de alta resolución
Técnicas de bandeado cromosómico Bandas de alta resolución Nº Bandas 400 550 850 Bandas de alta resolución Sincronización en prometafase (methotrexate) bandas G
Técnicas de bandeado cromosómico Bandas que marcan regiones específicas del cromosoma Bandas C Bandas centroméricas tiñe la heterocromatina
Técnicas de bandeado cromosómico Bandas que marcan regiones específicas del cromosoma Bandas t Se tiñen los telómeros
Técnicas de bandeado cromosómico Bandas que marcan regiones específicas del cromosoma Bandas NOR Se tiñen los organizadores nucleolares de los cromosomas acrocéntricos
Citogenética molecular Aplicación de las técnicas de biología molecular a preparaciones citogenéticas. Identificación de reestructuraciones producidas de novo y de cromosomas marcadores. Detección de anomalías cromosómicas en células en interfase. Estudio de la estructura y función de regiones cromosómicas específicas.
Citogenética molecular Hibridación In Situ con fluorescencia (FISH) Una o varias sondas de ADN, unidas a moléculas de marcaje fluorescentes, se hibridan con cromosomas en una preparación, que se visualizan n un microscopio de fluorescencia.
Hibridación In Situ Fluorescente (FISH) Cromosoma en el portaobjetos desnaturalización ADN doble hélice Marcaje de la sonda con una molécula fluorescente desnaturalización Hibridación de la prueba con el cromosoma desnaturalizado
Tipos de sondas de ADN Centroméricas (α-satélite) Sonda α-satélite específica de centrómero Metafase: Identificación de cromosomas Interfase: Recuento de cromosomas
Tipos de sondas de ADN específica de locus Sonda específica de locus con sonda control para el cromosoma Sonda para identificar la región delecionada Sonda para identificar el cromosoma
Tipos de sondas de ADN Teloméricas y subteloméricas (TTAGGG)n Sitio de sondas FISH Altas concentraciones de genes deleciones microscópicas o submicroscópicas pueden tener un impacto significativo. Juegan un papel crítico en el apareamiento de los cromosomas en meiosis
Tipos de sondas de ADN Pintado Marcaje del cromosoma entero: pintado Identifica el material de un determinado cromosoma En translocaciones cromosoma 8
Multiplex FISH: Multi-FISH El ADN de cada cromosoma humano se marca directamente con uno o más fluorocromos, de una manera combinatoria, resultando un color único para cada uno de los 24 cromosomas Los 24 tonos de color no pueden ser distinguidos por el ojo humano Se captura un conjunto de imágenes en la escala de grises, uno por cada uno de los cinco filtros distintos Las imágenes son procesadas por el ordenador para dar una imagen pseudocoloreada de la metafase y del cariotipo Cromosoma 1 Cromosoma 2 Cromosoma 3
Azofeifa et al. METAFASE
Azofeifa et al. CARIOTIPO