HOSPITAL CLÍNICO QUIRÚRGICO HERMANOS AMEIJEIRAS. Ciudad de La Habana, Cuba
APLICACIÓN DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO EN EL TRASPLANTE DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS PERIFÉRICAS - 2009 -
Autores: Dr. Jesús s Diego de la Campa Dr. Adalberto Ballester Santovenia Dr. José Carnot Uría Lic. Margarita Quiala Reyes Dra. Lourdes Morera Carrillo Lic. Mayra Pérez P PérezP Dr. Alejandro Alvarez
CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DEFINICIÓN: Son las células capaces de reconstruir integralmente la hematopoyesis, tienen capacidad de autoduplicación. EXPRESIÓN ANTIGÉNICA: CD 34 positivas CD 45 positivas thy-1 positivas Tinción con rodamine 123 débil positiva No antígenos mieloides No antígenos linfoides T ni B No antígenos HLA-DR. 1 al 2% de células de médula ósea En condiciones normales la décima parte de este total circula en sangre periférica.
Ventajas del trasplante de células precursoras hematopoyéticas periféricas en relación con el trasplante de médula ósea convencional. Recuperación hematológica en un tiempo menor. Menor empleo de componentes de la sangre. Menor empleo de antibióticos. APLASIA Se acorta la estancia hospitalaria.
OBJETIVOS: DETERMINAR EL CONTENIDO DE CÉLULAS CD 34 POSITIVAS OBTENIDAS POR LEUCOFÉRESIS. EXPONER LOS RESULTADOS DE LAS COLECTAS EN PACIENTES SOMETIDOS A TRASPLANTE DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS.
UNIVERSO DE ESTUDIO PATOLOGÍAS TIPOS DE TRASPLANTES Nº DE CASOS - Linfoma no hodgkin -Enfermedad de hodgkin -Artritis reumatoidea -Autólogo -Autólogo -Autólogo 3 1 1 -Linfoma no hodgkin -Leucemia mieloide crónica -Alogénico -Alogénico 1 1
Dosis de Leucocín T Alogénico MOVILIZACIÓN DE CÉLULAS PRECURSORAS HEMATOPOYÉTICAS T. Autólogo 10mcg/kg en 2 subdosis 3 días antes de colectar 10mcg/kg en 2 subdosis 4 días antes de colectar
COLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS EQUIPO DE AFÉRESIS ASTEC-204 ( FRESENIUS ) PROGRAMA P1Y.
PARÁMETROS HEMATOLÓGICOS DE LOS DONANTES DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS. HEMOGLOBINA g/l X (Rango). 13,1(9,3-15,4) HEMATOCRITO % 39,2(28-43) CONTEO DE LEUCOCITOS 10 9 /l CONTEO DE PLAQUETAS 10 9 /l 29,7(11,1-52,7) 282(187-500)
UTILIZACION DE ANTICOAGULANTES LEUCOFÉRESIS DE GRAN VOLUMEN ( MÁS DE 3 VOLEMIAS ): - 10 UDS DE HEPARINA /ML ACD-A Y 40 ML DE LA SOLUCIÓN EN LA BOLSA. - RELACIÓN ACD/ST 25/1. LEUCOFÉRESIS CONVENCIONAL ( MENOS DE 3 VOLEMIAS ): - NO EMPLEAMOS HEPARINA. - RELACIÓN ACD/ST 12/1.
VARIABLES UTILIZADAS EN EL PROCESO DE COLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS. VARIABLES TOTAL DE LEUCOFÉRESIS VOLEMIAS PROCESADAS. NUMERO DE CICLOS. VOLUMEN DE CICLOS (ML) VOLUMEN DE REBOSADO VOLUMEN CELULAR(ML) VELOCIDAD DE FLUJO(ml/min) VELOCIDAD CENTRÍFUGA RELACIÓN ACD/ST TOTAL ACD EMPLEADO ml TRASPLANTE AUTÓLOGO MEDIA RANGO TRASPLANTE ALOGÉNICO MEDIA RANGO 1,4 1-2 2 2 3,4 1,8-4,6 2,3 1,9-2,9 49 25-66 21 17-25 370 300-400 550 400-700 8,4 7-12 9,2 7-12 10,7 9-11,6 14 11-17 95 60-100 60 60 1933 1250-2200 1625 1600-1700 25/1 25/1 12/1 12/1 913 525-1400 990 897-1130
DETERMINACIONES EN EL PRODUCTO DE LEUCOFÉRESIS. Conteo de leucocitos con diferencial. Conteo de células CD34+/CD45+ Viabilidad celular con azul tripano 1%
TRASPLANTE DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS ALOGÉNICAS ( INCOMPATIBILIDAD MAYOR ) 1era. colecta 7% (11,5 ml sangre incompatible) 2da. colecta 8% (12,9 ml sangre incompatible) PARÁMETROS AJUSTADOS EN LA COLECTA VOLUMEN DE LOS CICLOS ( 700 ml ) VOLUMEN DE REBOSADO ( 12 ml ) VELOC. CENTRÍFUGA ( 1600-1700 RPM )
PROCESAMIENTO DEL PRODUCTO DE LEUCOFÉRESIS INCOMPATIBILIDAD MENOR ( DONANTE GRUPO O Y RECEPTOR A ) CENTRIFUGACIÓN DEL PRODUCTO DE LA LEUCOFÉRESIS A 3000 RPM DURANTE 10 MINUTOS A 4ºC Y DECANTAR EL PLASMA SOBRENADANTE. INCOMPATIBILIDAD MAYOR ( DONANTE GRUPO A Y RECEPTOR O ) NO FUE NECESARIO REALIZAR PROCESAMIENTO ADICIONAL POR LA BAJA CONTAMINACIÓN CON ERITROCITOS EN EL PRODUCTO DE LA LEUCOFÉRESIS.
-LECTURA EN EL CITÓMETRO DE FLUJO: (FILTROS) -FITC -FICOERITRINA (PE) -IODURO DE PROPIDIO 525nm (FL1) 575nm (FL2) 675nm (FL4)
REACTIVOS PARA LA IDENTIFICACIÓN CELULAR : AcMo anti CD 34-FITC (ISOCIANATO DE FLUORESCEÍNA) AcMo anti CD 45-PE (FICOERITRINA) IODURO DE PROPIDIO (IP) VOLUMEN DE LA MUESTRA: 2OµL - Concentrado de Leucocitos ( Garantiza que la muestra a analizar no exceda 1x10 6 leucocitos ) Análisis- 50 000 eventos
ADQUISICIÓN Y ANÁLISIS DE CD 34+
La detección simultánea del Ag. CD34 y del Ag CD45 en células permite hacer recuento preciso de las células progenitoras hematopoyéticas, descartando la interferencia de células no hematopoyéticas y/o células no viables.
CONSERVACIÓN DEL PRODUCTO DE LEUCOFÉRESIS. TRASPLANTE ALOGÉNICO TRANSFUSIÓN INMEDIATA TRASPLANTE AUTÓLOGO CONSERVACIÓN 4-8º C MÁXIMO 69 HORAS
CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO DE LEUCOFÉRESIS. CARACTERÍSTICAS VOLUMEN DEL PRODUCTO(ML), TRASPLANTE AUTÓLOGO MEDIA RANGO 521 285-769 TRASPLANTE ALOGÉNICO MEDIA RANGO 285 161-415 CONTEO DE LEUC. 10 9/L 54,5 24,7-121,6 99,2 96,4-102 % DE CÉLULAS MONO- NUCLEARES. 29,6 15-68 52,1 48-56,2 % CÉLULAS CD 34+ CD 34+ X 10 6 /kg 4,9 2,04-8,9 1,4 1,02-1,69 2,4 1,05-5,28 2,96 1,79-4,13 VIABILIDAD COLECTA % 98,8 98-99 97,8 96,5-99 VIAB. AL TRANSF. % 94,4 87-98 97,8 96,5-99
CONCLUSIÓN EL EMPLEO DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO PARA IDENTIFICAR CÉLULAS CD 45 Y CD34 POSITIVAS PERMITE DEMOSTRAR QUE LA TÉCNICA EMPLEADA ES SEGURA PARA OBTENER PRODUCTOS DE LEUCOFÉRESIS CON ADECUADA COMPOSICIÓN DE PROGENITORES HEMATOPOYÉTICOS QUE GARANTICEN LA REPOBLACIÓN MEDULAR EN PACIENTES SOMETIDOS A TRASPLANTE DE CÉLULAS MADRE HEMATOPOYÉTICAS.
HOSPITAL CLÍNICO QUIRÚRGICO HERMANOS AMEIJEIRAS Ciudad de La Habana, Cuba GRACIAS