Avances de la investigación en la Amazonía Iquitos, 12 y 13 de diciembre del 2012 NOMBRE DE LA INVESTIGACIÓN ANÁLISIS DE DIVERSIDAD GENÉTICA DE UNA COLECCIÓN DE AGUAJE DE Mauritia flexuosa (Aracaceae: Lepidocaryeae) MEDIANTE MARCADORES MICROSATELITES Olivera, J. E. 1, M.S. Gonzales 1. K. Mejía 2,JC, Pintaud 3, R. Ramirez 4. 1. Lab. Genética Molecular. Centro de Investigación de Bioquímica y Nutrición Alberto Guzmán Barrón. Facultad de Medicina San Fernando. UNMSM. 2. Instituto de Investigaciones de la Amazonía Peruana. 3. Institud de recherche pour dévelopment. 4. Lab. Filografia y Sistematica, Facultad Ciencias Biológicas. UNMSM e-mail: joliverag@unmsm.edu.pe
FAMILIA: Arecaceae SUBFAMILIA:Calamoideae TRIBU: Lepidocaryeae SUBTRIBU: Mauritiinae GENEROS: Lepidocaryum, Mauritia, Mauritiella Lepidocaryum tenue Mauritia carana Mauritia flexuosa Mauritiella acuelata Mauritiella armata Mauritiella macroclada Fuente: www.palmweb.org Fuente: www.palmweb.org Fuente: J Olivera Fuente: www.rarepalmseeds.com Fuente: www.palmweb.org Fuente: www.watergardenersinternat ional.org
DISTRIBUCION Fuente: www.palmweb.org Mauritia flexuosa Bolivia, Brasil (Norte, noreste, sureste y oeste-central ), Colombia, Ecuador, Guyana Francesa, Guyana, Surinam, Trinidad-Tobago, Venezuela, Perú.
Autores: Dennis del Castillo Torres, Erasmo Otárola Acevedo, Luis Freitas Alvarado. Año publicación 2006 Autor(es): Ernesto Gonzales Davila Año de Publicación: 2009
OBJETIVO GENERAL valuar la diversidad genética de 20 individuos de Mauritia flexuosa (10 hembras y 10 machos de la colección del banco de germoplasma Alpahuayo-IIAP) mediante la selección de 6 pares de cebadores microsatélite. MATERIALES, METODOS Y RESULTADOS Se enviaron de Iquitos a Lima, hojas verdes de 20 muestras de aguaje, en frascos de centrifuga de 50 ml,. con deshumedecedor comercial ( bola seca ). Las hojas fueron trituradas en mortero con nitrógeno liquido, y el polvo guardado en tubos de 1.5 ml en congelación. Luego se procedió a la extracción de ADN total por el método CTAB (Doyle & Doyle, 1990). Las hojas fueron trituradas en mortero con nitrógeno liquido, y el polvo guardado en tubos de 1.5 ml en congelación. Luego se procedió a la extracción de ADN total por el método CTAB (Doyle & Doyle, 1990). Se realizaron corridas en agarosa al 1% con SYBR Safe DNA Gel Stain para ver la calidad del ADN; y el material se cuantifico en un en un espectrofotómetro NanoDrop. El PCR (reacción en cadena de la polimersa se ejecuto siguiendo las recomendaciones del articulo de Ferderman y col, 2012)
Deshumedecedor usado para traer las hojas de aguaje, de Iquitos a Lima. Corrida de ADN en un gel de agarosa por electroforesis horizontal Pocillos: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Calidad del ADN extraído, por el método CTAB Pocillos: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
Códi go Tm N Alelo s Tamaño pb Secuencia repetitiva Iniciador izquierdo Iniciador derecho Mf13 57 C 10 230-264 (CT)14 TTACAAGCGACCCCTCGTC CGTCGAATAGGGTTTCAGTGG Mf17 54 C 10 210-232 (GA)18 GACAGCTTGTCATCCTCGC TTCCATCCCAGTTCTCCCC Mf19 57 C 7 239-261 (CT)10 AGCCACGTGACACTCTACC CTATAGGACCGGCCACCTG Mf28 57 C 8 184-200 (GA)9(GC)( TCCCACACTCTCTTGCCAC TGAGGGCTGCGTTATGGTC GA)11 Mf30 57 C 6 231-245 (CT)14 GAGGGGAGCTTCCTTGCTG ATTGGCGAAGGTCCAGGG Mf33 57 C 6 215-229 (CT)10 TGCCGCATTTAGGCTTTGG GGCCGGCGATTTATAACGG Fuente: Ferdeman, S., Ch. Hyseni, W. Clement, A. Caccone. Conserv. Genet. Res. 2012 4(2) 355-357. INGREDIENTES DEL PCR Ingredientes Concentración final Agua - Buffer 1X dntp 0.2 mm Foward 0.2 um Reverse 0.2 um MgCl2 1.5 mm Taq polimerasa 0.5 U/ul ADN 20-60 ng
Carril: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Carril: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 1 1 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 1 mf13 RANGO PESO MOLECULAR: 230-260 pb)
Carril: 1 2 3 4 5 6 7 12 MW 250 200 mf30 RANGO PESO MOLECULAR: 230-250 pb) 150 MW 300 250 200 mf33 RANGO PESO MOLECULAR: 200-270 pb)
Numero de alelos detectados por locus microsatélite Marcador N Alelos Referencia Mf13 8 10 Mf19 4 7 Mf30 4 6 Mf33 4 6 Total 20 29 Promedio 3.33 DS 2
Índices de diversidad para cada locus de microsatélite Locus PIC Ho Hs Fst Fis Fit Mf13 0.71 0.80 0.710 0.051-0.195-0.026 Mf19 0.69 0.70 0.694 0.035-0.045 0.139 Mf30 0.71 0.65 0.714 0.062 0.029 0.102 Mf33 0.65 0.45 0.651-0.028 0.328 0.227 Promedio 0.433 0.462 0.021 0.020 0.074 DS 0.147 0.011 0.015 0.114 0.086
CONCLUSIONES 1. Se han evaluado 4 marcadores micro satélite de seis escogidos, del articulo de Federman y col (2012). 2. Se observa una variación alelica de 3.3 alelos por locus, bajo a lo esperado en el articulo de Federman para los 4 alelos evaluados (4.83). 3. Hay una alta heterocigocidad en los individuos evaluados (4.33 en promedio), 4. Sin embargo, se pueden diferenciar dos grupos muy similares entre si, con poca distancia genética entre ellos. 5. Esto ultimo se corrobora con bajo valor Fst (0.015) indicando poca diferenciación genética entre individuos. 6. Existe poca endogamia (Fit=0.086).
ESTE TRABAJO ES PARTE DE UN ESTUDIO DOCTORAL DE LA SUBTRIBU MAURITIINAE, Y ESTA EN EL MARCO DEL PROYECTO PALMS (www.fp7- palms.org) AGRADECIMIENTOS Dra. BETTY MILLAN, Líder del Proyecto PALMS en el Perú MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCION