TRABAJO PRÁCTICO Nº 6 FISIOLOGIA DE LA REPRODUCCIÓN APARATO REPRODUCTOR MASCULINO 1. OBJETIVOS Con los conocimientos de los contenidos de la clase teórica: 1.a. OBJETIVOS GENERALES Explicar la regulación del eje Hipotálamo Hipófisis Testículo y los mecanismos de control. Conocer el origen y función de la Testosterona y su importancia en gónadas y caracteres sexuales secundarios. 1.b. OBJETIVOS ESPECIFICOS Conocer el efecto de la Testosterona sobre la espermatogénesis. Conocer la función de las glándulas anexas y su contribución a la formación del plasma seminal. Observar microscópicamente la morfología de los Espermatozoides (SPTZ) y relacionarla con el movimiento y la funcionalidad de los mismos. Observar y describir los distintos movimientos observados de los SPTZ y relacionarlo con su función. 2. CONOCIMIENTOS NECESARIOS Principales hormonas del eje Hipotálamo Hipófisis Testicular. Regulación hipotalámica de la síntesis y secreción de la Testosterona. Hormonas Foliculoestimulante Luteinizante Inhibina Activina - Folistatina. Funciones. Órgano reproductor masculino. Anatomía. Formación y desarrollo. Funciones. Testosterona: secreción, transporte, órganos blancos y funciones. 3. DESARROLLO DEL TRABAJO PRÁCTICO 3.a. Fundamento EVALUACIÓN DEL LÍQUIDO SEMINAL ESPERMOGRAMA Consiste en determinaciones cuali y cuantitativas encaminadas a valorar la aptitud reproductiva masculina y a determinar funcionalidad de los testículos y glándulas accesorias. En la composición del semen intervienen las secreciones de Testículo y Glándulas Anexas en diferentes proporciones siendo mayor la contribución de la vesícula seminal. El plasma seminal tiene propiedades buffer debida a carbonatos, citratos y fosfatos. Está formado por un 85-98% de agua y un 2-15% de materia seca que contiene elementos inorgánicos Fisiología de la Reproducción 1
(oligoelementos electrolitos dióxido de carbono) y orgánicos (espermina colina creatina glúcidos citratos compuestos fosforados vitaminas y otros elementos). La muestra a utilizar en el trabajo práctico es el líquido seminal, obtenido por masturbación. El sujeto deberá tener tres días de abstinencia sexual y no más de 5, recolectar en frasco estéril y remitir al laboratorio dentro de los 30 minutos. 3.b. Materiales Líquido seminal. Microscopio. Cámara de Neubauer. Baño térmico. Solución Macomber y Saunders Eosina 0,5% (en Solución Fisiológica) Portaobjetos Cubreobjetos. Papel indicador de ph. Extendidos de semen coloreados con May Grundwal Giemsa. Materiales de limpieza (por comisión): Detergente Rejilla alcohol gel Cepillo Rollos de papel 3.c. Técnica A partir de la muestra obtenida observar y registrar: Aspecto Color Volumen Determinación de ph Determinación de la concentración y recuento de espermatozoides: Colocar en un tubo de Kahn 500 µl de semen. Llevarlo a baño térmico de 60-70 ºC durante 2-3 minutos. (inmoviliza los SPTZ). Realizar una dilución 1:20 en Solución Fisiológica (0.38 ml S.F + 20µl de semen). Otra manera de inmovilizar los espermatozoides es utilizar la solución de Macomber y Saunders, la cual contiene bicarbonato de sodio para disolver el moco y formol al 40% para inmovilizar los espermatozoides. La dilución 1:20 se realiza directamente con la solución de Macomber y Saunders. Fisiología de la Reproducción 2
Cargar la cámara de Neubauer dejándola reposar durante 2 minutos en cámara húmeda. El recuento se realiza como si se tratara de glóbulos rojos (cuadrados Terciaros de la cámara de Neubauer) y el total contado se lo multiplica por 10 6. Por ejemplo si se contaron 27 células en los 5 cuadrantes terciarios la concentración será 27x10 6 SPTZ/ ml. Si el total eyaculado fue de 4.1 ml entonces el recuento total de espermatozoides será: 27.000.000 x 4.1 = 110.700.000 SPTZ/eyaculado. Registrar los resultados obtenidos. Observación Morfológica: Observar el extendido teñido con May-Grunwald Giemsa en microscopio óptico con objetivo de 100X Dibujar las células observadas. Teniendo en cuenta las proporciones y morfología de cabeza, cuello, cola y acrosoma normales Describa la muestra analizada. Fisiología de la Reproducción 3
Observación de la movilidad: Colocar una gota de semen en un portaobjetos y cubrirlo con un cubreobjeto. Observar los distintos tipos de movimientos que presentan los SPTZ de acuerdo a la siguiente lista: a: movimiento progresivo rápido. b: movimiento progresivo lento. c: movimiento no progresivo. d: Inmóviles. Registrar el número de espermatozoides inmóviles por campo que se observen con objetivo de 40 x. Test de Vitalidad Mezclar una alícuota de semen (10 a 15 ul) en un portaobjetos con una alícuota de colorante eosina al 0,5% en un portaobjetos y colocar el cubreobjeto. Dejar reposar 1 minuto. Contar 200 SPTZ (coloreados y no coloreados) con objetivo de 40X. Los SPTZ vivos tienen su membrana intacta que impide la penetración del colorante y la cabeza se ve de color blanca o rosado muy pálido, mientras que los muertos adquieren la coloración y la cabeza se ve de color rojo o rosado fuerte. El resultado se expresa en porcentaje y se compara con el resultado de los SPTZ inmóviles, ya que el porcentaje de SPTZ muertos no debe ser mayor al de los inmóviles. 3.e. Conclusiones: Teniendo en cuenta contenidos teóricos (Clases Teóricas Bibliografía Recomendada) escriba relacionando los aspectos observados con los procesos fisiológicos involucrados en lo observado durante el Trabajo Práctico. 4. GUIA DE ESTUDIO 1. Cuáles son las funciones de la Testosterona en la ontogenia del individuo? 2. Cómo se regula la síntesis y secreción de Testosterona? 3. Cuál es la función de las células de Leidyg? 4. Cuál es la función de las Células de Sértoli? 5. Esquematice un espermatozoide normal indicando cada una de sus partes. 5. BIBLIOGRAFIA Fisiología de la Reproducción 4
Cingolani, H. E.; Houssay, A. B. y Col: Fisiología Humana de Houssay. 7ª Edición. Editorial El Ateneo. Buenos Aires. 2006. Dvorkin, M. A.; Cardinali, D. P.; Iermoli, R. H.: Best & Taylor. Bases Fisiológicas de la Práctica Médica. 14ª Edición. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires. 2010. Guyton, A. C.: Tratado de Fisiología Médica. 11ª Edición. Editorial Elsevier. Madrid. 2006. Koeppen, B.M.; Stanton, B.A.: Berne & Levy. Fisiología. 6ª Edición. Editorial Elsevier Mosby. Madrid, 2009. Silvernagl, S; Despopoulos, A.: Fisiología. Texto y Atlas. 7ª Edición. Editorial Médica Panamericana. Madrid, 2009. Silverthorn, D. U.: Fisiología Humana. Un Enfoque Integrado; 4ª Edición. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires. 2007. Henry, J.B.: El Laboratorio en el diagnóstico clínico: homenaje a Todd-Stanford & Davidsohn. Tomos I y II. Editorial Marbán. 2005. Ióvine, E.; Atilio SeIva, A.: El Laboratorio en la Clínica. 3ª Edición. Editorial Médica Panamericana. 1985. Coppo, J. A.: Guía de Trabajos Prácticos. Cátedra de Fisiología Facultad de Ciencia Veterinarias. U.N.N.E. Fisiología de la Reproducción 5