CONTROL DE CALIDAD EN ESPERMOGRAMA. Alvarez M. Soledad Blanco Hirota Natalia E. Bajuk M. Milena Conde Valentino M. Alejandra

Transcripción

1 CONTROL DE CALIDAD EN ESPERMOGRAMA Alvarez M. Soledad Blanco Hirota Natalia E. Bajuk M. Milena Conde Valentino M. Alejandra

2 Cuál es el objetivo del análisis del semen? Predecir la fertilidad potencial masculina Identificar causas de infertilidad Definir el tipo de técnica de fertilización asistida

3 Obtención de la muestra 3 a 5 días de abstinencia sexual Semen obtenido por masturbación directa Envase estéril chico de boca ancha Transporte a temperatura corporal Remitir dentro de la hora de recolección

4 Examen macroscópico Volumen Aspecto Color Viscosidad Licuefacción ph VN: ml VN:

5 Examen microscópico Movilidad espermática Recuento espermático Presencia de agrupados Morfología espermática Observación de elementos celulares distintos de espermatozoides

6 Movilidad espermática Condiciones para la observación Gota de 10µl entre porta y cubre de 22x22mm Estabilización por 1 minuto Platina termostatizada a 37 ºC Temperatura del laboratorio entre 21 y 24ºC Observación de 5 campos o al menos 200 espermatozoides Hacer por duplicado

7 Movilidad espermática Clasificación: Móviles GRADO a (progresiva rápida) GRADO b (progresiva lenta) GRADO c (no progresiva, móviles in situ ) Inmóviles GRADO d Vivos Muertos (Eosina positivos)

8 Test de Eosina VR: < 50% espermat. necrosados

9 Movilidad espermática % Promedio Diferencia límite VR: Grado a > 25% Grado a+b > 50%

10 Recuento espermático DILUCIONES PARA RECUENTO EN CAMARA DE NEUBAUER Espermatozoides por campo de 40 x ESPERMATOZOIDES DILUCION < 15 1:5 ME E :10 R :20 A >200 1:40 MA SC. DILUYENTE: 50gr NaHCO3 10,0ml de formaldehído al 36-40%(saturada) H2O csp 1000ml

11 Recuento espermático

12 Recuento espermático

13 Recuento espermático Esp /ml= N x D x 25 x nº de cuadrados contados N=nº de espermatozoides contados D=inversa de la dilución empleada 25= número total de cuadrados = factor de corrección para expresar el resultado en ml VR: 20x10 6 esp/ml 40x10 6 esp/eyaculado

14 Morfología espermática Tinción: Papanicolaou Expresión de resultados: % Normales % Anormales OMS 1999 > 15% Kruger > 14%

15 Morfología espermática

16 Elementos celulares distintos de espermatozoides Células Epiteliales del tracto uretral y próstata Células de la espermatogénesis (Células germinales inmaduras) Leucocitos (Peroxidasa +) Macrófagos VR: <5x10 6 células redondas/ml <1x10 6 leucocitos/ml

17 Cuán confiables son los resultados del análisis del semen?

18 Nuestro laboratorio frente al problema Se utilizan los criterios OMS 1999 A partir del año 2002 se ha iniciado el CCI para la evaluación de morfología, movilidad y concentración espermática Ha asumido el compromiso de desarrollar un Programa Nacional de CCE que está en marcha desde el 2006: PEEC-laboratorio del semen

19 CONTROL DE CALIDAD INTERNO Control de la etapa pre-analítica Reinterrogar a pacientes al azar para verificar que la anamnesis fue adecuada Citar a aquellos pacientes en que se sospecha incumplimiento de las instrucciones

20 CONTROL DE CALIDAD INTERNO Control de la etapa analítica Comprende principalmente: Concentración espermática Movilidad Morfología

21 Niveles del control de la etapa analítica Intra-individual e inter-individual Como entrenamiento de un nuevo operador Procesamiento repetido de una muestra 10 mediciones del control X y DS Gráfico tipo Levey- Jennings

22 Medias mensuales 4 Recuento espermático (Ez./ml) 6 Morfología. (%) Normales UES 0 UES Meses Meses M ovilidad grado a Movilidad grado (a+b) Meses 2002 UES Meses 2002

23 CONTROL DE CALIDAD INTERNO Monitoreo de medias mensuales Probables fuentes de error : Movilidad Concentración espermática Funcionamiento de la platina termostatizada Limpieza del material no descartable Toxicidad del material descartable Temperatura de transporte y conservación de la muestra Tamaño de la gota de semen utilizada Tamaño del cubreobjetos Calibración de las pipetas automáticas Homogeneizado de las muestras Cámaras de recuento Cubrecámaras Morfología Grosor de los extendidos Fijación de los extendidos Batería de coloración Cambio de operador

24 CONTROL DE CALIDAD INTERNO Control de la etapa post-analítica Control de la verosimilitud y coherencia de los resultados

25 PEEC Parámetros evaluados Morfología Movilidad Concentración Materiales de control Suspensión estabilizada de espermatozoides Filmaciones en DVD Fotomicrografías en CD

26 Morfología espermática Material de control: Fotomicrografías en CD

27 Movilidad espermática Material de control: Filmación Características especiales Aproximación a la técnica microscópica Evaluación del criterio del operador No hay efecto de temperatura No hay efecto por la cámara

28

29 Concentración espermática Material de control: Suspensión de espermatozoides fijados en formol Influencia del material volumétrico utilizado en las diluciones Influencia de la cámara de recuento

30 Información suministrada por el laboratorio Valor hallado Instrumentos Criterios

31 Conclusión La única forma que una metodología tan subjetiva pueda dar resultados comparables y reproducibles es la implementación de un control de calidad interno y externo

32 Agradecimientos Cátedra de Citología. Facultad de Farmacia y Bioquímica Residentes y ex-residentes del Hospital de Clínicas

33