LASERS FUENTES 543 405 405 633 488 UV
UNIDAD DE BARRIDO Llave Ver)cal (dos posiciones, una para cada set de lásers) No tocar!! (Se desalinean los lásers). X X Abajo : 405/488/543 Arriba : 633/488/543
Llave de Canal 2 Espejo Dicroico Canal 1 >570 < 570 Llave de filtros - adentro: se interpone el filtro Llave 430-460 afuera: no se filtra de filtros >510 560-600 >660 Laser 488 Laser Llave ver)cal Obje7vo Arriba Plano del preparado Abajo
NOTAR QUE: Si está acostumbrado a chequear con el software la configuración, tenga en cuenta que para FICT y afines le va a seguir indicando los filtros 510 y 530, aunque ahora sólo usaremos el 510 En suma: Llave de Espejo Dicroico Tres posiciones, para seleccionar con cuál canal se va a detectar la emisión: Llave Ver4cal Dos posiciones, una para seleccionar con qué set de lásers se va excitar la muestra: Abajo : 405 488 543 Arriba : 633 488 543 - Adentro: Canal 1 - Afuera: Canal 2 - Intermedia: Ambos (< 570 va a Canal 1 y >570 va a Canal 2). Llaves de filtros Para filtrar la luz emi7da según el espectro del fluoróforo. Dos posiciones: adentro: se interpone el filtro afuera: no se filtra Los filtros instalados son: Canal 1: 430-460 (por ej DAPI) Canal 2 :560-600 (por ej. TRICT) >510 (por ej. FICT) >660 (por ej. Cy5)
Hay 10 combinaciones posibles Las 7 combinaciones básicas y 3 más Las 7 básicas se pueden combinar en simultaneo con luz transmi7da
Canal 2 >570 Filtro Rojo (560-600) Llave de Espejo Dicroico: Afuera Opción 1: Quiero ver una marcación Con texas red o similar (rojo) Láser 543 prendido Llave ver)cal irrelevante Shu]er abierto (so^ware) obje7vo Llave ver7cal Registro en canal 2 (Llave Espejo Dicroico Afuera) Filtro Rojo ac7vo 560-600 Plano del preparado
Llave de Espejo Dicroico: Adentro Canal 1 < 570 Opción 2: Quiero ver una marcación Con FITC o similar (verde/amarillo) Laser 488 prendido Llave ver)cal irrelevante Shu]er abierto (so^ware) Laser 488 obje7vo Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro) Filtro Verde Ac7vo >510 Plano del preparado
Llave de Espejo Dicroico: Adentro Canal 1 < 570 Opción 3: Quiero ver azul (i.e. DAPI) Laser UV prendido Llave ver7cal Llave ver)cal abajo Shu]er abierto (so^ware) obje7vo Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro) Filtros azul ac7vo Plano del preparado 430-460
Canal 2 >570 Filtro Rojo (> 660) Llave de Espejo Dicroico: Afuera Opción 4: Quiero ver Rojo lejano Laser 633 prendido Llave ver)cal para arriba Shu]ers abierto (so^ware) Laser 633610 Llave ver7cal Registro en canal 2 (Llave Espejo Dicroico Afuera) Filtro rojo lejano ac7vo obje7vo >660 ano del preparado
Llave de Espejo Canal 2 Dicroico: Canal 1 Intermedia >570 < 570 Opción 5: Quiero ver doble marcado FITC y Rojo lejano Laser 633 prendido Laser 488 prendido Llave ver)cal para arriba obje7vo Laser 488 Laser 633 Llave ver7cal Shu]ers abiertos (so^ware) Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia) >660 Filtros rojo lejano y verde ac7vos >510 Plano del preparado
Canal 2 Canal 1 Llave de Espejo Dicroico: Intermedia >570 < 570 Opción 6 (menos especifica que la anterior): Quiero ver doble marcado Con texas red o similar (rojo) Y con FITC o similar (verde amarillo) Laser 488 prendido Laser 543 prendido Llave ver7cal irrelevante Laser 488 Shu]ers abiertos (so^ware) Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia) obje7vo Filtros Rojo y Verde ac7vos 560-600 >510 Plano del preparado
Llave de Espejo Canal 2 Dicroico: Canal 1 Intermedia >570 < 570 obje7vo Laser 546 Laser uv Llave ver7cal Opción 7 : Quiero ver texas red y fluorescente azul (i.e. DAPI) Decir los problemas Laser UV (405) prendido Laser 543 prendido Llave ver)cal para abajo Shu]ers abiertos (so^ware) Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros azul y rojo ac7vos 560-600 lano del preparado 430-460
Tres opciones mas Dos de triple marcado y una de cuádruple marcado
Canal 2 Canal 1 >570 < 570 Opción 8 (para triple marcado): Quiero ver FITC, Rojo lejano y AZUL Láser 633, 488 y UV (405) prendidos Primera pasada Shu]ers 633 y 488 abiertos (software) Filtros rojo y verde ac7vos Llave ver)cal para arriba Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia) >660 Laser 488 Laser 610 Llave Llave ver7cal ver7cal >510 obje7vo obje7vo Segunda pasada Llave ver)cal para abajo Shu]ers UV (405) abierto (software) Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro) Filtro Azul ac7vo Plano del preparado 430-460
2 fluorocromos y luz transmitida
Canal 2 Canal 1 >570 < 570 Opción 9 (poco probable porque TxR y Rojo lejano cerca): Quiero ver texas red, rojo lejano y azul (i.e. DAPI) Laser UV (405), 543 y 633 prendidos Primera pasada Llave ver)cal para abajo Shu]ers UV, 543 abiertos (so^ware) Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros azul y rojo ac7vos 560-600 Laser 546 Laser 610 uv Llave ver7cal 430-460 obje7vo Plano del preparado Segunda pasada Llave ver)cal para arriba Shu]er 633 abierto Registro en canal 2: (Llave Espejo Dicroico Afuera) Filtro rojo ac7vo >660
Canal 2 Canal 1 >570 < 570 Opción 10: Ud es exigente y quiere ver todo Todos los Lasers prendidos Primera pasada Shu]ers 546 y UV abiertos Llave ver)cal para abajo Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros Rojo y UV ac7vos Laser 546 488 Laser 610 uv Llave ver7cal obje7vo Segunda pasada Shu]ers 633 y 488 abiertos Llave ver)cal para arriba Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros rojo lejano y verde ac)vos Plano del preparado o si Ud prefiere al revés puede ser también
Sequential scan con canales virtuales 3 o 4 fluorocromos y luz transmitida NOTAR que el programa no acepta ingresar más de dos fluorocromos, el tercero se especifíca después (cuando se agrega el canal virtual)
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Si tiene cualquier duda o piensa que necesita algún cambio de configuración CONSULTE a la COMISIÓN. No haga cambios sin avisar al resto!! Así evitaremos pérdida de tiempo y hasta de preparados de todos.
Por cualquier consulta a la hora de usar el microscopio me peden encontrar de lunes a jueves de 13 a 17hs y los viernes de 9 a 13 hs en el interno 123 del IIBCE. Mi mail es marce_d@yahoo.com Marcela Díaz Investigadora contratada Grado 1 del servicio de microscopia confocal IIBCE