del Ratón Técnicas de Ingeniería Reproductiva Manual Técnico Técnicas de Ingeniería Reproductiva del Ratón Manual Técnico Naomi Nakagata

Transcripción

1 Técnicas de Ingeniería Reproductiva del Ratón Manual Técnico Naomi Nakagata División de Ingeniería Reproductiva Centro de Recursos Animales y Desarrollo (CARD) Universidad de Kumamoto, Japón Traducción por Jorge Sztein Técnicas de Ingeniería Reproductiva del Ratón Manual Técnico Técnicas de Ingeniería Reproductiva del Ratón Manual Técnico Naomi Nakagata Traducción por Jorge Sztein 10168

2 Técnicas de Ingeniería Reproductiva del Ratón

3 Introducción El número de ratones genéticamente modificados producidos en los últimos años ha incrementado dramáticamente. Por otra parte, ha sido notable el rápido progreso en el desarrollo de nuevas técnicas destinadas a la edición del genoma (TALEN y CRISPR/Cas9) en estudios de biología molecular, de manera tal que un ratón genéticamente modificado puede producirse fácilmente en un tiempo relativamente corto. Esta producción ha sido apoyada por técnicas de reproducción como la fertilización in vitro, la criopreservación de embriones, de esperma y las técnicas de transferencia embrionaria. Estas técnicas se han convertido en inestimables métodos periféricos y su uso se ha popularizado rápidamente. La rápida popularidad alcanzada, ha provocado la publicación de varios manuales técnicos relacionados con la tecnología de la reproducción del ratón (como este mismo). Sin embargo, aun no ha sido publicado un manual con suficiente detalle dado que las técnicas de reproducción asistida del ratón involucran mayoritariamente delicadas operaciones bajo un microscopio estereoscópico. Con ese objetivo en mente, en este libro hemos tratado de crear un manual sobre las técnicas reproductivas del ratón que pueda ser fácilmente comprendido por todos. En nuestro manual hemos incluido un número generoso de diagramas, fotografías y videos para explicar paso a paso cada técnica en la forma más clara y minuciosa que hemos podido. Sinceramente deseamos que nuestro manual se convierta en una guía definitiva para estudiantes, técnicos, investigadores y otras personas que desean estudiar las técnicas de reproducción asistida en ratón. Naomi Nakagata

4 CONTENIDO Fertilización In Vitro (FIV) Transporte de esperma Criopreservación de esperma Preparación de los ovocitos y embriones Transporte de ovocitos y embriones Criopreservación de ovocitos y embriones Otras técnicas Medios 3

5 Capítulo 1 Fertilización In Vitro (FIV) 4

6 Fertilización In Vitro (FIV) Capítulo 1 P P bo 5

7 Capítulo 1 Fertilización In Vitro (FIV) c el el 6

8 Fertilización In Vitro (FIV) Capítulo 1 el a 7

9 Capítulo Chapter 1 Fertilización In Vitro (FIV) l 8

10 Fertilización In Vitro (FIV) Capítulo 1 el 9

11 Capítulo Chapter 1 Fertilización In Vitro (FIV) 10

12 Fertilización In Vitro (FIV) Capítulo 1 11

13 Capítulo 1 Fertilización In Vitro (FIV) 12

14 Fertilización In Vitro (FIV) Capítulo 1 13

15 14 Capítulo 2 Transporte de esperma

16 Transporte de esperma Capítulo 2 15

17 Capítulo 2 Transporte de esperma 16

18 Transporte de esperma Capítulo

19 Capítulo 2 Transporte de esperma 18

20 Transporte de esperma Capítulo 2 e frío 19

21 20 Capítulo 3 Criopreservación de esperma v v

22 Criopreservación de esperma Capítulo 3 21

23 Capítulo 3 Criopreservación de esperma 22

27 Capítulo 3 Criopreservación de esperma

29 28 Capítulo 3 Criopreservación de esperma 2. o 3. t

32 31 Capítulo 3 Criopreservación de esperma

33 Capítulo 3 Criopreservación de esperma o 32

34 33 Capítulo 3 Criopreservación de esperma

37 Capítulo 4 Preparación de los ovocitos y embriones 36

38 Preparación de los ovocitos y embriones Capítulo v 3. v 37

40 Preparación de los ovocitos y embriones Capítulo 4 39

47 46 Capítulo 5 Transporte de ovocitos y embriones

48 Transporte de ovocitos y embriones Capítulo 5 47

49 Capítulo 5 Transporte de ovocitos y embriones 48

55 54 Capítulo 6 Criopreservación de ovocitos y embriones

56 Criopreservación de ovocitos y embriones Capítulo 6 55

57 Chapter 6 Criopreservación de ovocitos y embriones 56

60 Criopreservación de ovocitos y embriones Capítulo

63 62 Capítulo 6 Criopreservación de ovocitos y embriones

65 Capítulo 7 Otras técnicas 64

66 65 Otras técnicas Capítulo 7

68 Otras técnicas Capítulo 7 67

73 72 Otras técnicas Capítulo 7

79 Capítulo 8 Medios 78

80 Medios Capítulo 8 79

83 Capítulo 8 Medios + 82

88 Medios Capítulo 8 Atención 87

91 Información 90

92 FERTIUP Medio de Fertilización in vitro de ratón Crioprotector Medio de pre-incubación CARD MEDIUM Baja FIV? FERTIUP le permitirá mejorar!! El uso combinado del crioprotector FERTIUP y el medio de pre-incubación FERTIUP junto con el MEDIO CARD de fertilización de ratón ofrece los siguientes beneficios: Porcentajes de fertilización sobre el 80% Mejora el manejo de los animales transgénicos Reduce el tiempo de expansión de la colonia Producción eficiente con líneas difíciles de criar Reduce el trabajo, las instalaciones y el costo de manutención FERTIUP y el MEDIO CARD son valiosos compuestos para mejorar la recuperación del esperma de ratón congelado y mejorar la eficiencia de la fertilización in vitro del ratón de laboratorio. Porcentaje de fertilización in vitro (%) Fertilización con esperma criopreservado y descongelado usando FERTIUP y MEDIO CARD Porcentaje de fertilización 30% < Porcentaje de fertilización 80% < Método usual convencional method FERTIUP FERTIUP + MEDIO CARD Descripción Cat. No. Cantidad FERTIUP Crioprotector: CPA KYD-001-EX 1 ml KYD-001-EX-X5 KYD EX KYD EX-X5 FERTIUP Medio de pre-incubación: PM KYD-002-EX 1 ml KYD-002-EX-X5 KYD EX KYD EX-X5 5 x 1 ml 0.5 ml 5 x 0.5 ml 5 x 1 ml 0.5 ml 5 x 0.5 ml MEDIO CARD KYD-003-EX 1 kit El kit incluye 1 ampolla con medio (A), 1 vial con materia en polvo (B), un tubo plástico de 1.5 ml (c), un tubo plástico de 1.5 ml (D), una jeringa descartable de 2.5 ml, 1 aguja, 1 filtro (tamaño de poro: 0.22 m) Conjunto FERTIUP PM 1ML-MEDIO CARD KYD-004-EX 1 juego FERTIUP Medio de pre-incubación: PM (1 ml) x 1 vial, MEDIO CARD x 1 Kit Conjunto FERTIUP PM 0.5ML- MEDIO CARD KYD-005-EX 1 juego FERTIUP Medio de pre-incubación: PM (5 ml) x 1 vial, MEDIO CARD x 1 Kit

93 Kit para transporte en frio Especialmente designado para un transporte económico y seguro de los epidídimos yembrionesderatónabajastemperaturas ratón a bajas temperaturas. Reduce el costo de transporte de ratones vivos Elimina el riesgo de fatalidades o escape de los ratones durante el transporte Previene la transmisión de patógenos Importante para el rescate por el método de fertilización in vitro de un stock legado de esperma criopreservado Descripción Cat. No. Cantidad Kit para transporte en frio CARD KYD-006-EX 1 juego Caja de trasporte de espuma de poliuretano (1 caja), Bolsas refrigerantes (4 grandes, 2 pequeñas), termo (1 botella), caja de papel (1 caja), material protector (1 pieza) FERTIUP & y MEDIO CARD productos periféricos Descripción Cat. No. Cantidad Pajuelas de semen (10 piezas x 10 unidades) KYD-S020X10 10 pza Canasta de congelación KYD-S018 1 unidad Canastilla de congelado KYD-S018 Conector de pajuelas (incluye 5 partes) KYD-S025 1 pza Casete triangular corto (10 unidades) KYD-S unidad Casete triangular largo (10 unidades) KYD-S unidad Conjunto de instrumentos para manipular embriones KYD-S036 1 juego Capilares de vidrio 20 Pzas KYD-S037 1 juego Mechero APT-3 PHD-APT3-EX 10 unidad Conector de pajuelas KYD-S025 Conjunto de instrumentos para la manipulación de embriones KYD-S036 Casete triangular corto KYD-S021 Casete triangular largo KYD-S035 Pajuelas de semen (10 piezas) KYD-S020X10 Mechero APT-3 PHD-APT3-EX Busca! fertiup

94 Reactivo para aumentar la superovulación en ratón Crías nacidas por FIV de una sola hembra superovulada con CARD HyperOva

95 Superovulation Reagent for mouse 1 ml Store at -80 C to -20 C For research use only. Not for human or medicinal use. Cat. No. KYD-010-EX Manufactured by KYUDO CO., LTD. Búsqueda! card hyperova

96 Líquidos y medios para Vitrificación/ descongelado/ Para la manipulación de embriones de rata y ratón Para ratón Descripción Aplicación Cat. No. Cantidad Almacenaje HTF Fertilización in vitro CSR-R-B x 2 ml 4 HTF Fertilización in vitro CSR-R-B x 5 ml 4 mhtf Fertilización in vitro KYD EX 1 x 2 ml 4 mhtf Fertilización in vitro KYD EX-X5 5 x 2 ml 4 mhtf Fertilización in vitro KYD EX 1 x 5 ml 4 mhtf Fertilización in vitro KYD EX-X3 3 x 5 ml 4 KSOM Cultivo in vitro CSR-R-B x 2 ml 4 KSOM Cultivo in vitro CSR-R-B x 5 ml 4 mwm Cultivo in vitro CSR-R-B x 5 ml M sucrose Congelado- descongelado CSR-R-Y x 2 ml M sucrose Congelado- descongelado CSR-R-Y x 5 ml 4 1M DMSO Criopreservación CSR-R-T x 2 ml 4 DAP213 Criopreservación CSR-R-T x 1 ml 4 Para rata Descripción Aplicación Cat. No. Cantidad Almacenaje mr1ecm Cultivo in vitro CSR-R-M x 5 ml 4 mr1ecm Cultivo in vitro CSR-R-M x 2 ml 4 Para manipulación del embrión Descripción Aplicación Cat. No. Cantidad Almacenaje M2 Manipulación in vitro CSR-R-M x 2 ml 4 M2 Manipulación in vitro CSR-R-M x 5 ml 4 PB1 Manipulación in vitro CSR-R-P x 5 ml 4 PB1 Manipulación in vitro CSR-R-P x 2 ml 4 P10 Criopreservación CSR-R-P x 2 ml 4 PEPeS Criopreservación CSR-R-P x 1 ml 4 Busque! cosmobio