Respuesta a las técnicas reproductivas de las razas en peligro de extinción. Influencia de la consanguinidad

Transcripción

1 Respuesta a las técnicas reproductivas de las razas en peligro de extinción. Influencia de la consanguinidad Ángel Poto Remacha Coordinador de Investigación Instituto Murciano de Investigación y Desarrollo Agrario y Alimentario (IMIDA) 1

2 - Obtención de semen - Inseminación Artificial: especies bovina, porcina y aviaria - Obtención de ovocitos: especies bovina y porcina - Congelación de gametos - Obtención de embriones in vivo e in vitro: especie bovina - Criopreservación de embriones: congelación y vitrificación - Clonación de animales y otras técnicas de actualidad 2

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5 Manejo de sementales Alimentación adecuada a la raza. Ubicación en parques individuales. Protección contra fenómenos ambientales extremos. Limpieza adecuada (incluidos los animales). Vigilar el bienestar animal. Comenzar el entrenamiento al inicio de la pubertad. Variable según especies y razas. 5

6 Características de los criadores (N=19) Bovino Murciano Levantino - Edad media: 55,8 años Menores de 40: 2 Profesionales cría bovinos: 2 máximo: 68 años mínimo: 32 años Otras profesiones: Restauradores, fontaneros, constructores, policía local, sala de despiece de aves, capataz conservero. Posible repuesto familiar: hijos universitarios???... Algunos aprendiendo alemán!! Características de los criadores (N=70) Cerdo Chato Murciano - Edad media: 52,3 años máximo: 75 años mínimo: 22 años Profesionales producción porcina: 6 Otras profesiones: Mismas a las del bovino Murciano Posible repuesto familiar: muy probable en los profesionales Gallina Murciana Sin problemas por la edad, existe toda la gama La producción es la belleza del ave y el prestigio del dueño Problemas de tipo normativo 6

7 Los comienzos tecnológicos Antonie Van Leeuwenhoek (1677) aumentos --- perro y hombre Huygens and Hartsoeker ( ) renacuajos en semen perro anguilas en semen gallo Spallanzani, Lazzaro (1776) Camadas de perras inseminadas FIV con gametos de rana Ensayos preservación nieve carbónica Siglo XIX. Centros de estudio de reproducción en Cambridge y Rusia (IVANOFF) Siglo XX. Desarrollo rápido de la tecnología (Polge, 1949) ÚLTIMOS AVANCES -DISMINUCIÓN DEL NÚMERO DE ESPERMATOZOIDES 7

8 ÚLTIMOS AVANCES -SEPARACIÓN DE SEXOS ( X, Y) PUNTOS CRÍTICOS EN LA CONGELACIÓN DE SEMEN Eliminación del plasma seminal. Tiempo de preparación del diluyente. Tipo de diluyente. % de crioprotector. Curva de descenso de temperatura. Geometría del envasado. Descongelación. 8

9 Obtención y transferencia de embriones DONANTE RECEPTORA INDUCCIÓN PLURIOVULACIÓN (SUPEROVULACIÓN) ESTRO ESTRO RECUPERACIÓN DE EMBRIONES MANTENIMIENTO / ALMACENAJE TÉCNICA QUIRÚRGICA REPRODUCCIÓN NORMAL TRANSFERENCIA TÉCNICA NO QUIRÚRGICA GESTACIÓN INICIO NUEVA SECUENCIA PARTO Obtención y transferencia de embriones 9

10 Criocongelación de Embriones Método tradicional Obtención por lavado (PBS) Sacarosa PBS + Glicerol + Em. Sacarosa Estudio calidad y paso a mantenimiento Diluyente PBS mantenimiento + glicerol (Otros) Temperatura 20 ºC -Un paso: 10 minutos en Soluc. 1,5 M glicerol -Dos Pasos: 10 minutos en Soluc. 0,75 M glicerol 10 minutos en Soluc. 1,5 M glicerol Temperatura -7 º C (10 minutos) Inducción del SEEDING Temperatura -7 ºC (10 minutos) Congelar hasta -35 ºC (-0,3 a -0,7 ºC/min) Almacenar en N líquido Aire Aire 10

11 Descongelación de embriones Un solo paso Sacarosa PBS + Glicerol + Em. Sacarosa Varios pasos Agua tibia (20 35 ºC) Aire a temperatura ambiente (22ºC) Aire segundos + agua (35ºC) Soluciones retirada glicerol: Aire Agitar a 37º C Aire -Glicerol decreciente 0.25 M (8-10 min.) -Sacarosa creciente 0.5 M-1M (8-10 min.) -Método tres pasos en 5 minutos -0,75M Glic M Sacarosa -0,375M Glic M Sacarosa -0.3M Sacarosa Criocongelación de Embriones Método OPS (Open Pulled Straw) Vitrificación de embriones Pasos Medio Tiempos PBS PBS PBS 85% EG 7.5% DMSO 7.5% PBS 64% EG 18% DMSO 18% 1 minuto 1 minuto 3 minutos 2M 1 minuto 6.5 M Descongelación Pasos Medios PBS + Sucrosa 0,2M Tiempos PBS + Sucrosa 0,2M PBS + Sucrosa 0,1M PBS 1 minuto 5 minutos 5 minutos 5 minutos EG: Etilen Glicol DMSO: Dimetil sulfóxido Envase: Pajuela muy fina. Capilaridad. 2 µl. 4-5 embriones por pajuela 11

12 Fertilización in vitro (FIV): Comprende: -Maduración de ovocitos -Fecundación o inseminación de ovocitos -Cultivo embrionario Obtención de ovocitos de ovarios procedentes del matadero: Aspiración con aguja (18 21 g) Fuentes de vacío: Mecánica con jeringuilla Bomba de vacío eléctrica o de agua Slicing: Cortes de la superficie ovárica Recogida de ovocitos en caja de petri Otras fuentes obtención de ovarios: Castración 12

13 Raza MurcianaMurciana-Levantina, en situación crítica (S. (S.E.R.G.A.) Alternativa viable para recuperación recursos genéticos: genéticos: OPU/PIV embriones 13

14 18 sesiones de OPU con 2 tratamientos tratamientos:: RFD (punción transvaginal ecoguiada) GnRH (Dalmarelin) (IM, 0.2 mg) 48 h antes de 500 UI (IM) FSH (Pluset ) Animales: Animales: 3 vacas raza MurcianoMurciano-Levantina 6 sesiones OPU/animal. OPU/animal. 1 OPU/semana 3 sesiones OPU con cada tratamiento (alternos) Equipamiento Ecógrafo (Pie Medical, FalcoVET) Sonda transvaginal (R(R-10, 7 5 MHz) Handgrip mango de OPU (60 cm) Guía de punción Agujas de punción desechables (18 G, 0 9 x 70 mm) PBS lavado (heparina 0 06 g/l y SBF 1%) Bomba aspiración (Labotech, mm Hg) 14

15 Tratamiento farmacológico: farmacológico: Analgesia: carprofeno Tranquilización: xilacina (Rompun ) Anestesia epidural Guía de punción 15

16 Categorías COCs (Oropeza et al., 2004) Tipo I (muy buena calidad): - Ooplasma oscuro y homogéneo - Muchas capas de células cúmulo Tipo II y III (calidad buena e intermedia): Ooplasma homogéneo, claro o pigmentado y menos capas células cúmulo 16