Dirección General de Epidemiología/InDRE Subsecretaría de Prevención y Promoción de la Salud

Transcripción

1 Dirección General de Epidemiología/InDRE Subsecretaría de Prevención y Promoción de la Salud

2 Agenda La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos de LNR y OPS Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna) Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia epidemiológica en el LNR InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades Emergentes (EVE) Perspectivas (activos y no reactivos)

3 Agenda La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos de LNR y OPS Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna) Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia epidemiológica en el LNR InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades Emergentes (EVE) Perspectivas (activos y no reactivos)

4 La vigilancia de Arbovirus en el contexto de LNR/OPS/RELDA En 2009 se acuerda oficializar la Red-InDRE forma parte de la Red Se define comité consultivo RELDA, 4 Coordinadores regionales y Laboratorios nacionales Actualmente 30 países involucrados (México incluido)

5 La vigilancia de Dengue y otros Arbovirus en el contexto de OPS/RELDA Estructura organizativa y funcional de la RELDA COORDINADOR Dra. Guadalupe Guzmán, IPK, Cuba SECRETARÍA TÉCNICA Programa Regional de Dengue OPS/OMS COMITÉ TÉCNICO CONSULTIVO NML Canada CDC Puerto Rico IPK Cuba IEC Brazil INEVH Argentina Dr. Harvey Arstob Dr. Elizabeth Hunsperger Dr. Delfina Rosario Dr. Pedro Vasconcelos Dr. Delia Enria Dr. Susana Vázquez Dr. Ana Cecilia Cruz Dr. Silvana Levi Canadá Puerto Rico Cuba COORDINADORES SUBREGIONALES Brasil Argentina NORTE AMÉRICA NML (CAN) CDC (PUR) MÉXICO Y CENTRO AMÉRICA InDRE (MEX) INCIENSA (COR) ANDINA Y CONO SUR INHRR (VEN) LCSP (PAR) EL CARIBE PASTEUR (FRG) -JAMAICA CANADA: NML COSTA RICA: INCIENSA BOLIVIA: CENETROP BELIZE: CML PUERTO RICO: CDC Dengue Branch EL SALVADOR: ULC COLOMBIA: INS CAREC: COUNTRY MEMBERS USA: CDC- Atlanta GUATEMALA: LNS HONDURAS: LNV ECUADOR PERÚ: INS FRENCH GUYANA: PASTEUR OTRAS REGIONES - OMS MÉXICO: InDRE NICARAGUA: CNDR VENEZUELA: INHRR ARGENTINA GUYANA: NPHRL JAMAICA EURO WPRO SEARO PANAMÁ: ICGES BRAZIL: IEC MARTINICA: CHU ESPAÑA ISC III CHILE: ISP REP. DOMINICANA: LNSPDD PARAGUAY: LCSP SURINAME: CLPH URUGUAY

6 La vigilancia de Arbovirus en el contexto de OPS/RELDA Reunión Dengue Net La Habana Cuba 1ra Reunión RELDA Buenos Aires Argentina Taller de diagnóstico y caracterización de virus dengue Tegucigalpa, Honduras Taller de buenas prácticas de laboratorio. TDR/OMS/OPS Panamá, Panamá Taller de buenas prácticas de laboratorio. TDR/OMS/OPS La habana, Cuba Curso para Instructores para diagnóstico dengue, CDC Atlanta, Georgia EEUU agosto 25-29,2014 Reunion en México D.F. InDRE Para analizar paneles de evaluación serológica y molecular y

7 La vigilancia de Arbovirus en el contexto de LNR/OPS/RELDA Fortalecer las capacidades técnicas y científicas de cada uno de los laboratorios de Dengue y otros Arbovirus en la Región Homologar los protocolos de laboratorio Promover evaluaciones de estuches comerciales y métodos de diagnóstico Intercambiar reactivos de referencia Apoyar con la implementación de Sistemas de Gestión de la Calidad Integrar toda la capacidad científica y técnica para responder oportunamente en brotes y epidemias

8 La vigilancia de Dengue, CHIK, ZIKA, promovida por OPS/RELDA en el contexto de EGI Componentes técnicos: 1.Epidemiología - Vigilancia integrada y preparación a brotes 2. Laboratorio (incluye la vigilancia para DENV, CHIKV y ZIKAV) 3.Atención al paciente 4.Manejo Integrado de Vectores (MIV) 5.Gestión del ambiente 6.Vacuna (preparación ante la eventual introducción)

9 Agenda La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos de LNR y OPS Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna) Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia epidemiológica en el LNR InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades Emergentes (EVE) Perspectivas (activos y no reactivos)

10 Retos para la Vigilancia Epidemiológica por Laboratorio de Arbovirus Mejores Metodologías: Mayor desempeño (sensibilidad y especificidad) Estuches comerciales Con capacidad para de brindar resultados oportunos para la toma de acciones (rápidos y precisos) Que sean accesibles para todos los laboratorios Contar con metodologías de referencia en todos los países (LNR) DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serología

11 Retos para la Vigilancia Epidemiológica por Laboratorio para Arbovirus Mejores Algoritmos: Que contemplen marcadores inmunológicos y moleculares con mayor capacidad de entender la enfermedad e interpretar formas graves Que contemplen la detección diferencial bajo una buena definición de caso sospechoso Lo que no es Dengue, es CHIK, lo que no es CHIK es Zika, lo que no es Zika; que es?? Que promuevan metodologías multidetección (DENV, CHIKV, ZIKAV, WNV, y otros-leptospira, Rickettsia DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serología

12 Retos para la Vigilancia Epidemiológica por Laboratorio para Arbovirus Mejores estrategias con carácter anticipatorio: Dengue CHIK Detección de virus en mosquitos (Vigilancia entomovirológica) puede promover la detección oportuna de la circulación de un Arbovirus y facilitar la toma oportuna de acciones de control. Ir detrás de los casos promueve en ocasiones llegar tarde ZIKA WNV Existencia de reacciones cruzadas entre Arbovirus promueve la necesidad de contar con mejores pruebas serológicas Promover la toma de calidad en muestras en fase aguda DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serologíaón de

13 Capacidad metodológica para Arbovirus en el LNR VIROLÓGICOS AISLAMIENTO VIRAL Células C6/36 BHK21 Vero MOLECULARES RT- PCR punto final RT- PCR tiempo real ( Singleplex, Duplex Multiplex ) Secuenciación SEROLÓGICOS ANTICUERPOS IgM IgG ANTÍGENO NS1 MNT Pruebas rápidas DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serología

14 Evolución de las metodologías = Evolución de algoritmos Aislamiento viral (15 días) RT-PCR punto final (72-96 hrs), análisis post amplificación RT-qPCR normal (48 hrs) RT-qPCR multiplex, fourplex, duplex (varios blancos)

15 Capacidad Instalada en México: El éxito de la vigilancia epidemiológica por laboratorio RNLSP con capacidad de Vigilancia Molecular RNLSP con capacidad de Vigilancia Serológica Baja California y Tlaxcala no tienen implementado el RT-qPCR. Aguascalientes (amarillo) esta en fase de implementación por evidencia de circulación vectorial DGE/InDRE 15

16 Agenda La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos de LNR y OPS Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna) Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia epidemiológica en el LNR InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades Emergentes (EVE) Perspectivas (activos y no reactivos)

17 Algoritmos proactivos Muestras de 0-5 días de iniciada la fiebre Muestras de 6 hasta 12 días de iniciada la fiebre ELISA NS1 POS ELISA IgM POS Se confirma caso NEG NEG NO De 4 a 5 Días de Evolución (IgM) SI ELISA IgG POS Se confirma caso ELISA IgM POS Se confirma caso NEG ELISA IgG (de 0-5 días de evolución) POS Con base en definición de caso Continuar con Dx diferencial FD: Chikungunya, ZIKA EFE s FHD: Leptospirosis Ricketsiosis Fiebre amarilla ( en caso de viaje a zona endémica) NEG NEG

18 Métodos serológicos para Arbovirus Vigilancia serológica por MAC ELISA en InDRE Y estuche comercial en LESP Para implementar y sostener la vigilancia de Referencia con este tipo de metodologías se requiere autonomía: Muchos laboratorios son dependientes de CDC u otras instituciones Se necesitan producir antígenos en instalaciones especificas (BSL3) DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Serología

19 Kit RT-qPCR Dengue - CDC: Ejemplo de homologación metodológica propuesta por OPS para el diagnóstico de Dengue Implementación a toda la RNLSP en 2016 Santiago, 2013, CDC

20 Validado en InDRE para uso en dos plataformas de amplificación (Applied 7500 y CFX96) Kit RT-qPCR Dengue - CDC (robustez en la vigilancia) Applied 7500 Cuatro serotipos y RP RP DENV-1 DENV-2 DENV-3 DENV-4 DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo

21 Nuevas y mejores Metodologías: Protocolo dúplex DENV/CHIKV Una mezcla de reacción Mismo protocolo de amplificación para ambos virus Se identifican simultáneamente co-infecciones con DENV(serotipo)/CHIKV-ZIKAV Optimización de reactivos (enzima) e insumos Aplicado a muestras de humanos y moscos. DENV2 DENV1 DENV4 DENV3 CHIKV Protocolo de Amplificación Curvas de Amplificación DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo

22 Gráficos DUPLEX DENV/CHIKV CHIKV DENV1, 2, 3, 4 CHIKV/DENV1, 2, 3, 4 CHIKV DENV1/CHIKV DENV2/CHIKV DENV3/CHIKV DENV4/CHIKV NEGATIVO DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo

23 Inclusión del RP (control interno) en la reacción de RT-qPCR para detección de Virus Chikungunya CHIKV-RP CHIKV-RP Escala lineal Escala logarítmica CHIKV RP DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo

24 Verificación de metodologías en InDRE para uso en dos plataformas de amplificación (Applied 7500 y CFX96) DENV-1 DENV-2 Eficiencias de reacción correctas DENV-3 DENV-4 Coeficientes de Variación correctas DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo Ct obtenido Ct esperado Sistema de Gestión de la Calidad, aplicado En el Diagnóstico y Referencia

25 DUPLEX DENV-ZIKAV B En una sola reacción detección de cinco virus Ahorro de insumos E A D C Ahorro de tiempo Detección simultanea Gráfico de amplificación reacción dual (Controles positivos en la misma mezcla de reacción): A) DENV-1, B) DENV-2, C) DENV-3, D) DENV-4 Y E) ZIKAV. DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo Arbovirus y virus hemorrágicos División Biología Molecular/ Innovación y Desarrollo

26 DUPLEX DENV/ZIKA DENV 1/ZIKAV B DENV 2/ZIKAV A A B DENV 3/ZIKAV B DENV 4/ZIKAV B A A DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo Arbovirus y virus hemorrágicos División Biología Molecular/ Innovación y Desarrollo

27 DUPLEX Dengue/ZIKA Precisión, Coeficiente de variación y pendiente dentro de los estándares 25 x 10-7 copias de genoma 25 copias de genoma Dilución Curva 1 Curva 2 Curva 3 Concentrado Única amplificación para ZIKAV Arbovirus y virus hemorrágicos División Biología Molecular/ Innovación y Desarrollo Chikungunya Dengue 1-4 Fiebre Amarilla Encefalitis del Nilo Occidental Encefalitis Equina del Este Encefalitis Equina del Oeste Selectividad con otro patógenos Encefalitis Equina de Venezuela Sarampión Rubeóla Influenza PDM Leptospira Rickettsia

28 Plataforma Multi-diagnóstico en desarrollo para Arbovirus Basado en micro-fluidos En un mismo proceso extrae material genético y realiza proceso de amplificación Detección de hasta diez agentes etiológicos (virus por separado, familias de virus) DENV CUATRO SEROTIPOS, CHIKV, ZIKV, WNV, LEPTOSPIRA, RICKETTSIAS, MALARIA, SARAMPION, RUBEOLA DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo

29 Genotipificación de DENV DENV-1 DENV-2 Cosmopolita Americano /africano Asiático Pacifico Sur Asiático América/Asia DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo

30 Genotipificación de DENV DENV-3 DENV-4 Genotipo I Genotipo III Genotipo II Genotipo II Genotipo IV DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo

31 CRONOLOGÍA DEL INGRESO DE LOS CUATRO SEROTIPOS DEL VIRUS DENGUE EN MÉXICO DENV-2 ASIATICO/AMERICANO DENV-3 GEN-III DENV-4 GEN-II DG DG?? DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo

32 Genotipificación de CHIK 0.02 DGE/InDRE BIMO Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo EU Malaysia 2006 HM Indonesia 1985 HM Thailand 1988 HM Thailand 1975 FJ Indonesia 2007 HM Thailand 1978 EU Malaysia 2006 HM Indonesia HM Philippines 1985 MEX Jalisco Cultivo KJ YAP KJ British Virgin Islands 2014 KC Philippines 2012 KF China Zhejiang MEX Coahuila Cultivo MEX Chiapas Muestra 97 HM Thailand 1995 HE New Caledonia:2011 HM Thailand 1958 HM India HM India 1963 HM India 1973 HM DR Congo HM Central African Republic HM Uganda 1982 HM Central African Republic 1978 HM Angola 1962 JF India 2006 EU Italy GU Sri Lanka 2006 HQ Comoros 2005 FJ Singapore 2008 AF Tanzania 1953 HM Nigeria HM Ivory Coast AY Senegal 1983 Ya se cuentan con secuencias de genoma completo Asiático East/Central/South African (ECSA) West African

33 El éxito y los resultados provienen del trabajo en Conjunto y multidisciplinario Vigilancia Entomovirológica ENTOMOLÓGICA VIROLÓGICA Vigilancia con carácter ACTIVO y no reactivo DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo

34 Vigilancia Entomovirológica Detección de DENV-4 en moscos antes de que se detectaran los casos en humanos Detección de DENV-4 en humanos Aislamiento viral Detección de antígeno NS1 Detección molecular Biol. DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serología

35 Te mi xco E B Jojutla C F Yautepec Tlaquiltenango Tepalcingo A Axochiapan D A C B Vigilancia Entomovirológica 2011 Municipi o Especie Distrito Federal Serotipo identificado por RT-qPCR Jojutla A. aegypti DENV-1 Jojutla A. aegypti DENV-1 Municipio Puerto Vallarta No. De grupo Sinaloa Serotipo identificado por RT-PCR Fourplex en tiempo real 16 DENV-2 3 DENV-2/DENV-4 2 DENV-4 Localidad de captura. Col. Repobladores Col. Emiliano Zapata Col. Emiliano Zapata Serotipo identificado por RT-PCR Fourplex en tiempo real DENV-2 DENV-1/DENV-2 DENV-1 Estado de México Estado de México Aguascalientes Nayarit Zacatecas Cozumel Guerrero Puebla Colima Michoacán Quintana Roo Biol. DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo

36 Resultados de la vigilancia entomovirológica 2014 Año 2014 ESTADO NO. DE GRUPOS Chiapas 36 RESULTADO 10 POSITIVOS A CHIK Durango 1 NEGATIVO Guanajuato 1 NEGATIVO Guerrero 8 8 POSITIVOS A CHIK Jalisco 43 NEGATIVO Michoacán 33 NEGATIVO Morelos 8 3 NEGATIVOS, 4 DENV-1, 1 DENV-4 Nuevo León 3 NEGATIVO Tamaulipas 22 NEGATIVO Veracruz 10 NEGATIVO TOTAL 165 CHIKUNGUNYA ESTADO LOCALIDAD MUNICIPIO RESULTADO Chiapas Tuxtla Gutiérrez Tuxtla Gutiérrez Positivo Chiapas Tuxtla Gutiérrez Tuxtla Gutiérrez Positivo Chiapas Tuxtla Gutiérrez Tuxtla Gutiérrez Positivo Chiapas Tuxtla Gutiérrez Tuxtla Gutiérrez Positivo Chiapas La Libertad Suchiate Positivo Chiapas La Libertad Suchiate Positivo Chiapas Rayón Suchiate Positivo Chiapas Rayón Suchiate Positivo Chiapas Rayón Suchiate Positivo Chiapas La Libertad Tuxtla Chico Positivo CHIKUNGUNYA ESTADO LOCALIDAD RESULTADO Guerrero Vicente Guerrero Positivo (29.30) Guerrero Vista Hermosa Positivo (26.84) Guerrero Niños Héroes Positivo (27.68) Guerrero Libertad Positivo (21.66) Guerrero Juchitán Positivo (33.90) Guerrero Sin dato Positivo (17.37) Guerrero Sin dato Positivo (34.60) Guerrero Sin dato Positivo (18.05) DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorragicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo

37 Resultados de la vigilancia entomovirológica 2015 Necesario intensificar la vigilancia entomo virologica Aprovechar la ventaja de esta vigilancia. AÑO ESTADO NO. DE GRUPOS RESULTADO Chiapas NEGATIVO Y 6 POSITIVOS 2015 Morelos Amacuzac (Teacalco) 41 1 POSITIVO A DENV-1 Tabasco 5 NEGATIVO Veracruz 1 NEGATIVO Guerrero POSITIVOS CHIK, 3 NEGATIVOS TOTAL 92 Búsqueda anticipada y preventiva ZIKA DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo

38 Panel de Evaluación Externa del Desempeño para Arbovirus en la RNLSP de México Panel exclusivo para serología (IgM e IgG) Envío anual Panel exclusivo para serología (IgM, IgG) Envío semestral DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serología Panel exclusivo para serología (IgM, IgG) Se incluye NS1 Panel exclusivo para serología (PAN-SER-DEN) y Biología Molecular RT-qPCR por separado (NAT-DEN) Panel para Serología Algorítmico) y Biología Molecular RT-qPCR Por separado Panel algorítmico y diferencial (IgM, IgG, NS1) y RT-qPCR y Serología DENV Y CHIKV) SMART-ARBO Panel algorítmico (IgM, IgG, NS1 y RT-qPCR) SMART-DEN

39 Paneles de Evaluación Externa del Desempeño Internacional al LNR Propuesto por CDC y RELDA DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serología 100% de concordancia en Biología Molecular (RT-qPCR) y Serología (MAC ELISA)

40 Paneles de Evaluación Externa del Desempeño Internacional - ENIVD DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División Serología Análisis serológico MAC ELISA, ELISA Comercial InBIOS Análisis Molecular qrt-pcr y qrt-pcr DUPLEX

41 Agenda La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos de LNR y OPS Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna) Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia epidemiológica en el LNR InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades Emergentes (EVE) Perspectivas (activos y no reactivos)

42 InDRE a la vanguardia en el estudio de infecciones virales emergentes y reemergentes Para el estudio y Diagnostico por Laboratorio, el InDRE ha diseñado la colaboración interdisciplinaria. DENV ZIKAV CHIKV El InDRE ha participado en Wet Lab para la detección de Filovirus a nivel internacional (2011). El InDRE forma parte de la iniciativa en seguridad para la salud global. El InDRE participa en paneles internacionales para el estudio de patógenos desconocidos. **Se cuenta con personal altamente capacitado y con protocolos estandarizados.

43 Preparación proactiva Para el Diagnostico por Laboratorio, el InDRE ha diseñado la colaboración interdisciplinaria. DGE BSL3 BIMO DGE DGE DVIR LARB DGE

44 Infraestructura: Laboratorio de Bioseguridad Nivel 3 Inactivación de muestras en una CBS tipo III Área completamente contenida Manejo en una CBS tipo II

45 Algoritmo para la Vigilancia de EVE Toma de muestra con menos de 7 días de evolución Estándar de servicio de máximo 48 horas FIlovirus negativo Diagnóstico diferencial: Dengue, Fiebre amarilla, Leptospira spp, Rickettsias spp. Recepción de muestras en InDRE Inactivación de muestra Extracción de RNA RT-PCR para Filovirus Secuenciación InDRE FIlovirus positivo RT-PCR para Identificación de especie: [Zaire y Sudan] InDRE Envío CDC.. Buenas prácticas de Laboratorio Nivel 3 Estándar de servicio de máximo 72 horas Informe de resultados

46 Clasificación: Base para la identificación Familia Filovirus Género Ébola Especie Zaire (EBOV) Sudan (SUDV) Reston (RESTV) Budinbunyo (BDBV) Tai Forest (TAFV)

47 Identificación de Familia (Filovirus) 1 Iniciadores para identificación de Filovirus Amplifican un fragmento de 419 pb del gen L que codifica para la polimerasa Identifican todos los Filovirus conocidos (Ebola/Marburg) Punto final Filo A 5` ATCGGATTTTTCTTTCTCATT 3` Filo B 5` ATGTGGTGGGTTATAATAATCACTGACATG 3`

48 Identificación del género Ébola virus Ebo Sud BMG + Ebo Sud BMG - Ebo Sud BMG Probe 5` GCCATGGNTTCAGGTTTGAG 3` 5` GGTNACATTGGGCAACAATTCA 3` 5` FAM ACGGTGCACATTCTCCTTTTCTCGGA BHQ-1 3` 2 Iniciadores para identificación de la cepa Sudán Amplifican un fragmento del gen NP que codifica para la Nucleoproteína Tiempo Real 3 Iniciadores para identificación de la cepa Bundibugyo Amplifican un fragmento del gen NP que codifica para la Nucleoproteína Tiempo Real EboU965 + EboU EboU989Probe 5` GAGAAAAGGCCTGTCTGGAGAA 3` 5` TCGGGTATTGAATCAGACCTTCTT 3` 5` FAM TTCAACGACAAATCCAAGTGCACGCA BHQ-1 3`

49 Identificación de las especies de Ébola virus Zaire (EBOV) Gen NP que codifica para la Nucleoproteína (Punto final) 268 pb ZAI-NP1 ZAI-NP2 5 -GGACCGCCAAGGTAAAAAATGA-3 5 -GCATATTGTTGGAGTTGCTTCTCAGC-3 Especies Sudan (SUDV) Reston (RESTV) Budinbunyo (BDBV) Gen NP que codifica para la Nucleoproteína (Tiempo real) Gen NP que codifica para la Nucleoproteína (Punto final) 337 pb Gen NP que codifica para la Nucleoproteína (Tiempo real) EboU965 + EboU EboU989Pro be 5` GAGAAAAGGCCTGTCTGGAGAA 3` 5` TCGGGTATTGAATCAGACCTTCTT 3` 5` FAM TTCAACGACAAATCCAAGTGCACGCA BHQ- 1 3` RES-NP1 5 -GTATTTGGAAGGTCATGGATTC -3 RES-NP2 5 CAAGAAATTAGTCCTCATCAATC-3 Tai Forest (TAFV) Ebo Sud BMG + Ebo Sud BMG - Ebo Sud BMG Probe 5` GCCATGGNTTCAGGTTTGAG 3` 5` GGTNACATTGGGCAACAATTCA 3` 5` FAM ACGGTGCACATTCTCCTTTTCTCGGA BHQ-1 3`

50 Documentación establecida 24/26

51 Agenda La vigilancia epidemiológica proactiva en el contexto de lineamientos de LNR y OPS Retos para la Vigilancia por laboratorio (mejores pruebas, mejores algoritmos, mayor capacidad anticipatoria-vigilancia oportuna) Innovación y desarrollo tecnológico como fortaleza en la Vigilancia epidemiológica en el LNR InDRE como LNR a la vanguardia en la vigilancia de Enfermedades Emergentes (EVE) Perspectivas (activos y no reactivos)

52 Perspectivas DENV (CUATRO SEROTIPOS, GENOTIPOS) CHIKV ZIKA WNV Implementación de vigilancia proactiva MAYARO

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55 Algoritmo de diagnóstico SIKA Algoritmo en fase aguda Algoritmo en fase aguda

56 Laboratorio certificado y Acreditado Por algoritmo de diagnóstico Certificación ISO 9001:2008 Acreditación ISO 15189, por la Entidad Mexicana de Acreditación (EMA) Detección de Antígeno NS1 Detección de anticuerpos IgM (ELISA de captura) Detección de Anticuerpos IgG (ELISA de captura) Detección de RNA de virus dengue mediante RT-qPR Multiplex Detección de RNA de virus dengue mediante RT-qPCR Fourplex DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarroll División Serología o

57 Laboratorio de Arbovirus y virus hemorrágicos QFB. Alma Núñez León QBP. Rosalba Pérez Meza QFB. Yanelli Adriana Torres Olmos QFB. Claudia Rosales Jiménez T.L. Adela Monserrat Aparicio Antonio Apoyo Admvo. Rosa María Herrera Bautista M. en C. María de la Luz Torres Rodríguez M. en C. Mauricio Vázquez Pichardo DGE/InDRE Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos División Biología Molecular/Innovación y desarrollo División de serología

58 GRACIAS Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos CISCO: 59410, arbored.indre@gmail.com

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