EVALUACION DE LA VIRULENCIA DE Tagosodes orizicolus E INCIDENCIADE HOJA BLANCA EN COLOMBIA

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1 Página 1 de 5 EVALUACION DE LA VIRULENCIA DE Tagosodes orizicolus E INCIDENCIADE HOJA BLANCA EN 1. JUSTIFICACIÓN El Virus de la Hoja Blanca (VHB), es transmitido por el insecto Tagosodes orizicolus (Muir) ocasiona daños al cultivo de arroz al alimentarse y ovipositar y transmite el virus de la hoja blanca. El complejo Sogata -VHB ha afectado los cultivos de arroz en forma cíclica, apareciendo con mayor incidencia cada años. En el año de 1997 se registraron incrementos en la población del insecto, el nivel de vectores y la incidencia de VHB en campo, desde el año 2010 se vienen observando en campo aumentos de la incidencia y virulencia alta en insectos, registrándose puntos considerados como URGENTES en Cúcuta, Fundación, Norte del Tolima y Saldaña Las evaluaciones en estos puntos han mostrado incidencias superiores al 20% y virulencia en insectos superiores al 10%, lo cual es necesario estar alertas al comportamiento del insecto y la incidencia de la enfermedad. Es indispensable estar alertas y monitorear el complejo para evitar una posible epidemia ya que están sembradas variedades con alta susceptibilidad, que ponen en riesgo los agroecosistemas del país. Además del monitoreo de los puntos URGENTES se debe tener conocimiento de lo que pasa en las zonas NORMALES con la población y la enfermedad. Las variedades sembradas actualmente presentan tolerancia al daño mecánico del insecto, pero no tienen un adecuado nivel de resistencia al VHB. Para un manejo integrado del complejo sogata - VHB, es indispensable monitorear la población del insecto, determinar el porcentaje de vectores y establecer la incidencia de VHB en el campo 2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS 1. Determinar el porcentaje de virulencia de T. orizicolus en diferentes localidades del Caribe Húmedo, Caribe Seco, Tolima, Huila, Llanos orientales y Casanare. 2. Evaluar la incidencia de hoja blanca en líneas promisorias y en variedades comerciales de arroz. 3. Evitar el riesgo de epidemia del Virus de la Hoja Blanca en el Agroecosistema arrocero de Colombia. 4. Generar información que permita tomar decisiones para el manejo integrado del complejo en cada localidad. 3. MATERIALES Y MÉTODOS EL MUESTREO El proyecto se ejecutara en tres etapas: Muestreo de sogata, Monitoreo de la incidencia del VHB en zonas productoras de arroz y determinación en el laboratorio de la virulencia del insecto mediante prueba serológica de ELISA.

2 Página 2 de 5 El muestreo se llevará a cabo en las principales zonas arroceras, apoyados en la información de la Muestra Nacional Arrocera suministrada por la División de investigaciones Económicas de Fedearroz, Fondo Nacional del arroz o por conocimiento de cada evaluador en su zona. Definición de LOTE: se define el lote como aquella área que esta sembrada con la misma variedad en la misma fecha; cuando alguna de estas dos condicione cambie se tomara como OTRO LOTE. Una finca puede ser parte de un lote o haber más de un lote en una finca. De acuerdo a la observación y conocimiento del evaluador, en el campo se clasifican los LOTES a muestrear por categorías: URGENTE- INMEDIATO NORMAL. Se definen como URGENTE a los puntos calientes en las zonas de: Norte del Tolima, Cúcuta, Fundación y Saldaña quienes han reportado aumentos considerables del complejo u otros puntos que aparezcan en el transcurso de las evaluaciones). Los puntos INMEDIATOS representan lotes que estén aledaños o cercanos a los puntos calientes o lotes que en otras zonas hayan indicios de aumentos del complejo. Los NORMALES corresponden a las áreas que están a la fecha libres de la enfermedad, pero que deben monitorearse En los lotes seleccionados se le tomará la siguiente información: MUESTREO DEL INSECTO EN CAMPO: Se definió el termino LOTE, el cual corresponde al conjunto de áreas sembradas con la misma variedad en el mismo mes de siembra. Un lote puede corresponder a varias fincas o a una dependiendo de la condición establecida. Recorra el lote utilizando la jama a su criterio, buscando el mayor cubrimiento posible del área evaluada (LOTE), hágalo en horas de la mañana evitando los días lluviosos, con alta nubosidad o alto punto de rocío 1. Muestreo en los puntos calientes: se definieron los puntos calientes aquellos sitios que han reportado altos porcentajes de virulencia de insectos con valores supeiores al 5% Se debe realizar en los LOTES seleccionados tantos números de pases de jama que garanticen una población MINIMA de 100 individuos, los cuales se deben clasificar en óptimas condiciones, conservarlos y enviarlos inmediatamente a CIAT para prueba de E.L.I.S.A. Determine en cada lote el número de insectos en una muestra de 10 pases dobles con jama, contabilice enemigos naturales como predadores y observe en los insectos los síntomas y porcentaje de parasitismo. Puntos de Muestreo: Las zonas urgentes o puntos calientes en donde se realizara el monitoreo serán: ZONA CENTRO en las localidades del departamento del Tolima: Venadillo, Lérida, Armero, Ambalema Saldaña. ZONA CARIBE SECO: Cúcuta y Fundación. Número de Muestras en puntos calientes: Se tomaran mínimo cinco muestras que corresponden a cinco lotes de acuerdo a su definición Nota: si en el primer muestreo no se logra la población necesaria debe volverse a muestrear tantas veces hasta alcanzar el mínimo número requerido de insectos, cada vez que se muestree se deben

3 Página 3 de 5 separar y refrigerar los insectos Época de muestreo: Teniendo en cuenta el comportamiento poblacional del insecto sogata, el muestreo debe realizarse entre los 10 y 30 días después de emergido el cultivo. Georeferenciación del muestreo: Todo lote muestreado debe ser georefenciado, para su posterior mapificación de acuerdo a las coordenadas y para realizar las evaluaciones de incidencia de la enfermedad en campo. Información del LOTE: La información necesaria que debe tener el lote es: la georefenciación, variedad, fecha de siembra, localización y área muestreada. 2. Muestreo en puntos NORMALES. Se consideran para este caso los puntos normales todos aquellos sitios ubicados en las zonas arroceras del país que no hayan reportado niveles altos de virulencia de VHB en insectos, incluyendo los lotes cercanos a los puntos urgentes o calientes. Teniendo en cuenta la información sobre la reacción de las variedades a la enfermedad, se procede a seleccionar las tres variedades con mayor participación de área sembrada. Tomar una muestra por LOTE, si hay tres VARIEDADES, cada una corresponde a un LOTE si están sembradas más o menos en la misma fecha. Capturar y enviar mínimo 100 insectos. NO SE ACEPTAN ENVIOS MENOS A ESTA CANTIDAD. Determine en cada lote el número de insectos en una muestra de 10 pases dobles con jama, contabilice enemigos naturales como predadores y observe en los insectos los síntomas y porcentaje de parasitismo. Puntos de Muestreo: Las zonas arroceras donde se realizara el monitoreo serán: ZONA CENTRO en las localidades del departamento del Tolima: Venadillo, Lerida, Armero, Ambalema; Alvarado, Piedras, Ibagué Meseta; Espinal, Coello, Guamo -Espinal; Saldaña, Purificación, Prado, Natagaima; en el departamento del Huila: Aipe, Villa Vieja; Neiva, Palermo, Juncal y Campoalegre. ZONA LLANOS ORIENTALES del departamento del Meta: Ariari, Vista hermosa, Castilla la nueva, Villavicencio, Puerto Lopez, Villanueva, el viento vichada; en el departamento de Casanare: Aguazul, Tauramena, Nunchia, San Luis de Palenque, Mani, El pauto, Pore, Trinidad. ZONA CARIBE HUMEDO Montería, Tierralta, San Marcos, San Benito de Abbad, La Doctrina, María La baja, Majagual, Guaranda, Nechí, San Jacinto, El Bagre, Planeta Rica y Aguachica. ZONA CARIBE SECO: Cúcuta, Fundación, Valledupar, Bosconia, San Alberto, Badillo y Fonseca. PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA: Tenga en cuenta para el muestreo de los insectos: 1. Deben muestrear en las horas de la mañana, evitando el rocío y la humedad en la muestra 2. La muestra se colecta con JAMA. 3. Un pase doble con jama equivale a desplazarla de un lado a otro VERIFICANDO que la boca de la jama este completamente abierta. 4. Debe golpearse la planta de tal manera que permita la captura de adultos y ninfas. 5. Los insectos se deben depositar en bolsas de papel de seis (6) libras.

4 Página 4 de 5 6. En el muestreo se capturan diferentes especies de artrópodos por lo tanto No almacene en las bolsas altas poblaciones, forme submuestras tantas que garanticen la población mínima de envío (100 insectos). 7. Separe de los demás artrópodos las sogatas, seleccione únicamente las sogatas que no presenten daños (insectos incompletos), parasitismo, ataque por hongos o insectos húmedos. 8. Los insectos defectuosos que lleguen en el envió no cumplen las condiciones requeridas para el análisis de virulencia por ELISA, por lo tanto no los incluya. 9. Coloque los 100 individuos en un tubo de ependoff que contengan silica gel, luego séllelos con cinta vinipel y agite el tubo para que se mezcle la sogata con la silica gel (absorbe la humedad y los conserva). 10. Tan pronto los insectos sean capturados y embalados, envíelos en el menor tiempo posible al Departamento de Biotecnología, CIAT, Km 17 recta Cali Palmira, Palmira. Para confirmar el envío y recepción de la muestra comuníquese con NATALIA ESPINOSA BAYER al número celular La muestra será analizada mediante prueba serológica de ELISA por las personas encargadas en CIAT del procedimiento. 12. Los análisis estadísticos serán practicados y analizados por Myriam Cristina Duque utilizando el muestreo secuencial de Wald, quien informara sobre los resultados a través de Natalia Espinosa, para la toma de decisiones por zona. CALCULO DEL PORCENTAJE DE VIRULENCIA DE INSECTOS. Se realizara en el Laboratorio de Virología del CIAT por el método de E.L.I.S.A. Para ello mediante el muestreo secuencial de Wald se determino que una muestra mínima de 45 insectos (hembras o machos) por lote, son estadísticamente los necesarios para analizar la virulencia. El resultado se organiza en la tabla de cálculo del muestreo secuencial modelo de Wald, el cual origina una gráfica con 2 rectas: una representa a Ho (p=0,02) que equivale a que todos los insectos que estén por debajo de esta recta se consideran no virulíferos, y la otra, a H1 (p=0,05) todos los insectos que estén por su virulencia por arriba de esta recta, se consideran virulíferos. Los valores permiten determinar si el lote está enfermo o sano, dependiendo de la cantidad de sogatas con virus (positivas) en la muestra. Si el número de insectos resultante queda entre el área de las dos rectas, se analizara nuevamente tomando insectos de la contra muestra (sogatas de reserva), otra muestra de 15 sogatas del mismo lote, para comprobar el estado de la virulencia, tantas veces como requiera la ubicación de la población. MEDIDA DE LA INCIDENCIA DE LA HOJA BLANCA EN CAMPO Se plantea el método de MUESTREO POR ESTRATOS, que permite mediante observaciones del evaluador decidir la estratificación de acuerdo a la presencia de la enfermedad en el área. Tenga en cuenta que usted debe ser capaz de identificar los síntomas típicos en la planta ocasionados por el virus. Su observación es muy importante y considerando que se hace a los 60 dde debe inspeccionar muy bien el campo, para establecer en el espacio los porcentajes reales aproximados de VHB PROCEDIMIENTO: En el campo se deben definir cuadriculas fijas de área entre 0,25 a 0,5has., dependiendo de lo que pueda abarcar: con la mirada, del tamaño del lote, de la observación y presencia de la enfermedad. Los estratos los define cada técnico en la zona (ver diagrama). Entre más pequeñas sean las áreas estratificadas mayor confiabilidad de la información. Recuerde que en los mismos sitios o Lotes en

5 Página 5 de 5 donde muestreo el insecto en lo posible determine la incidencia de la enfermedad. 1. Estratificación: 1.1. Divida el lote en cuadriculas fijas marcadas por estacas a partir de los 20 días de emergencia del cultivo De acuerdo a la presencia de enfermedad categorice en cada cuadricula: AREAS SANAS (S), AREAS CON PRESENCIA MEDIA(M) y AREAS CON PRESENCIA TOTAL (T) 1.3. Determine en cada cuadricula; los porcentajes del área y de la enfermedad de cada una de las categorías A LOS 60 DIAS DESPUÉS DE EMERGENCIA (DDE) 1.4. Registre la información de cada cuadricula para las tres categorías en el formato de registro adjunto Sume y calcule la incidencia de cada cuadricula de acuerdo a la tabla de cálculo adjunta (auto calculo) (%AS x %Incidencia) + (%APM x %incidencia) + (%APT x %Incidencia) % INCIDENCIA = Para calcular la incidencia total del LOTE, coloque los datos en el cuadro resumen y allí la tabla le calcula el promedio ponderado de la incidencia El valor obtenido corresponde al porcentaje de la INCIDENCIA DE HOJA BLANCA en campo 1.8. Si es posible registre el rendimiento obtenido en cada cuadricula o de lo contrario el promedio de rendimiento en todo el área. Tiempo del ensayo: Semestralmente Análisis estadístico: Muestreo secuencial ANEXOS: 1. Hoja de cálculo para toma de datos: al abrir el hipervínculo adjunto muestra la tabla guía para el cálculo de la incidencia de VHB y puede usarse para muestreo fitosanitario, en ella aparecen algunos números como ejemplo los cuales pueden borrarse, que calculan % de incidencia en varios limitantes tecnológicos. OBSERVACIONES: (1) Proyecto en corresponsabilidad con ingenieros del Area Técnica