ESPECTROFOTOMETRÍA UV-VISIBLE. Mª Luisa Fernández de Córdova Universidad de Jaén

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1 ESPECTROFOTOMETRÍA UV-VISIBLE

2 1. Propiedades de la luz 2. Absorción de luz 2.1. Fenómeno de la absorción 2.2. Espectros de absorción molecular 2.3. Tipos de transiciones electrónicas 3. Ley de Lambert-Beer 4. Instrumentación 4.1. Fuente de radiación 4.2. Selector de longitud de onda 4.3. Recipientes para muestra 4.4. Detector

3 1. Propiedades de la luz longitud de onda (λ) Onda λ ν = c Longitud de onda x Frecuencia = velocidad de la luz

4 1. Propiedades de la luz ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO Energía Longitud de onda Luz visible Longitud de onda (nm)

5 2.1. Fenómeno de absorción de radiación 2. Absorción de luz Estados excitados ABSORCIÓN DE RADIACIÓN (hν) EMISIÓN DE RADIACIÓN (hν) Energía Estado fundamental - Cuando una molécula absorbe luz aumenta su energía - Cuando una molécula emite luz disminuye su energía

6 Rotura de enlace e ionización e - excitación electrónica vibración 2. Absorción de luz Luz visible Longitud de onda (nm) Energía

7 2.2. Espectros de absorción molecular 2. Absorción de luz V 2 Niveles rotacionales Niveles vibracionales V 1 S 1 V o Transiciones electrónicas Energía V 1 h ν (UV-Vis) V 0 S 0

8 2. Absorción de luz S 2 S 1 Transiciones electrónicas y espectros de los átomos Transiciones electrónicas y espectros UV-Visible en moléculas

9 2. Absorción de luz ESPECTRO DE ABSORCIÓN A 0.8 Paracetamol Propifenazona Ác. acetilsalicílico Cafeína Longitud de onda (nm)

10 2. Absorción de luz * AZUL DE BROMOFENOL (λ max = 614 nm) Luz blanca Luz azul

11 2. Absorción de luz * * Espectro de absorción de la clorofila en la región visible. Obsérvese que absorbe en las regiones del rojo y del azul.

12 1. Propiedades de la luz 2. Absorción de luz 2.1. Fenómeno de la absorción 2.2. Espectros de absorción molecular 2.3. Tipos de transiciones electrónicas 3. Ley de Lambert-Beer 4. Instrumentación 4.1. Fuente de radiación 4.2. Selector de longitud de onda 4.3. Recipientes para muestra 4.4. Detector

13 3. Ley de Lambert-Beer Muestra I I o Fuente de luz Selector de longitud de onda I o I Detector de luz b Instrumentación para medir absorción de luz I 0 (intensidad radiante) I (intensidad transmitida)

14 3. Ley de Lambert-Beer I o c I b - Transmitancia T = I / I o (fracción de la luz incidente que sale de la muestra) varía entre 0 y 1 - Absorbancia A = - log T = log (I o / I) Ley de Lambert-Beer A = ε b c ε : coeficiente de absortividad molar (l mol -1 cm -1 ) b : espesor de la célula (cm) c : concentración (moles/l)

15 1. Propiedades de la luz 2. Absorción de luz 2.1. Fenómeno de la absorción 2.2. Espectros de absorción molecular 2.3. Tipos de transiciones electrónicas 3. Ley de Lambert-Beer 4. Instrumentación 4.1. Fuente de radiación 4.2. Selector de longitud de onda 4.3. Recipientes para muestra 4.4. Detector

16 Espectrofotómetro 4. Instrumentación Muestra Fuente de luz Selector de longitud de onda I o I Detector de luz b Instrumento para medir intensidad de radiación Fuente de radiación Sistema de selección de longitud de onda Recipiente para la muestra Detector

17 MONOCROMADOR 4. Instrumentación rendija entrada fuente detector red o prisma espejos rendija salida

18 MONOCROMADOR DE RED 4. Instrumentación

19 4.3. Recipientes de muestra 4. Instrumentación Material UV : cuarzo Visible: cuarzo o vidrio

20 4. Instrumentación Macro-células Células semi-micro UV Vis UV Vis

21 4. Instrumentación Esquema de un espectrofotómetro de haz simple

22 ESPECTROFOTÓMETROS, FOTÓMETROS, COLORÍMETROS 4. Instrumentación Espectrofotómetro de doble haz Espectrofotómetros portátiles

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