EFECTO DEL SEMEN FRESCO Y REFRIGERADO SOBRE LA TASA DE CONCEPCION EN VACAS INSEMINADAS A TIEMPO FIJO

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1 UNIVERSIDAD NACIONAL DE CÓRDOBA FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS ESCUELA PARA GRADUADOS INSTITUTO DE REPRODUCCIÓN BOVINA CÓRDOBA (IRAC) EFECTO DEL SEMEN FRESCO Y REFRIGERADO SOBRE LA TASA DE CONCEPCION EN VACAS INSEMINADAS A TIEMPO FIJO Maria Leticia Frutos Porro José Federico Frutos Porro Trabajo Final Para optar al Grado Académico de Especialista en Reproducción Bovina Córdoba

2 INDICE 1. Contenido 2. RESUMEN INTRODUCCIÓN... 5 OBJETIVO GENERAL... 6 OBJETIVOS ESPECÍFICOS MATERIALES Y MÉTODOS ANIMALES Y LUGAR DE TRABAJO TRATAMIENTOS ANÁLISIS DE DATOS RESULTADOS DISCUSIÓN CONCLUSIONES BIBLIOGRAFÍA ANEXO

3 2. RESUMEN El uso del semen fresco o refrigerado son biotecnologías implementadas con el objeto de aumentar la fertilidad en los programas de Inseminación Artificial a Tiempo Fijo (IATF) y también para disminuir los costos directos de compra de semen y posibilitar la masificación de la técnica. El objetivo de este trabajo fue evaluar la. utilización del semen fresco y refrigerado de toros propios de un establecimiento ganadero, y evaluar la tasa de concepción obtenida en los programas de I.A.T.F. Todos los lotes fueron manejados sobre pastura de Gatton Panicc, lo que permite servir las vacas con una condición corporal por encima de 3,5. (Escala del 1 al 5) Se utilizaron para el estudio 766 vacas con cría al pie Tipo Cebú e Hibridas, formando 3 lotes. Lote 1: Inseminadas con semen fresco Lote 2: Inseminadas con semen refrigerado Lote 3: Inseminadas con semen importado (Lote Control) Los 3 Lotes fueron sometidos, a un protocolo de IATF, que consistió en la aplicación en el Día 0 de un dispositivo intravaginal impregnado de progesterona (Dispocel 1,2 g, VonFranken, Argentina.) y 2 mg de benzoato de estradiol (Benzoato de Estradiol, Von Franken) por vía intramuscular (IM) profunda. En el Día 8, se retiraron los dispositivos y cadahembra recibió 150 µg de D-cloprostenol, (Dextrogenol, Von Franken) y 0,75 mg decipionato de Estradiol (Cipionato de Estradiol, Von Franken). Otras variables incluidas en el estudio fueron: el momento de la inseminación (48 o 52 hs desde el retiro del dispositivo) y la utilización de dispositivos Nuevos o Usados. Los Controles de preñez fueron realizados a través de la ultrasonografía 35 días post IATF. 3

4 La tasa de preñez lograda en el estudio fue de la siguiente manera: Lote 1 Inseminado con semen Fresco 55.8 % Lote 2 Inseminado con semen refrigerado 44.6 % Lote 3 Inseminado con semen Importado 56.9 % No existen diferencias significativas en el % de preñez entre los grupos Inseminados con semen Fresco e Importado. Pero si se observan diferencias significativas en los lotes de Fresco y Refrigerado. 4

5 3. INTRODUCCIÓN En los últimos años en el Paraguay y gracias a la implementación de los programas de IATF que posibilito la Inseminación de las vacas con cría al pie, se vio un aumento considerable en el porcentaje de Inseminación de vientres con edad de servicio. Desde el año 2002, donde se inseminaba 3,5 %, actualmente en el Paraguay sobre un total de más de vientres con edad de servicio se insemina el 10 % de esa población (SENACSA 2010). Pese a ese aumento queda una gran cantidad de vientres por inseminar. Las dificultades más comunes relatadas por los ganaderos para introducir la técnica en sus establecimientos, son los costos directo de la técnica. entiéndase como costos directos, los insumos para la sincronización, contratación de personal capacitado, asesoramiento profesional, compra de semen y por sobre todo bajos índices de concepción obtenidos por la IA. De manera tal que es importante concentrarse en maximizar los resultados obtenidos de la IA y al menor costo posible. Eso lleva a pensar que se podría utilizar de una manera más eficiente los reproductores de alto valor genético existentes en el campo y aumentar el número de su descendencia y de tal manera disminuir los costos de compra de semen importado. Por lo que planteamos la utilización de semen fresco y refrigerado de dichos reproductores en los programas de IATF. El uso del semen fresco o refrigerado también nos permitiría aumentar la fertilidad de las pajuelas y lograr incremento en los resultados. 5

6 OBJETIVO GENERAL El objetivo general de este trabajo fue comparar las tasas de preñez obtenidas en programas de IATF utilizando Semen fresco o Refrigerado. OBJETIVOS ESPECÍFICOS 1. Comparar la tasa de preñez lograda con la utilización de semen fresco y refrigerado en los programas de I.A.T.F. 2. Reducir costos en la compra de semen importado. 3. Evaluar si existen diferencias en la tasa de preñez utilizando dispositivos nuevos o usados. 4. Determinar la la tasa de preñez inseminando los lotes a las 48 hs. 6

7 2. MATERIALES Y MÉTODOS 2.1. ANIMALES Y LUGAR DE TRABAJO El trabajo fue realizado en la Estancia La Cotorrita, en el Departamento de Boquerón Chaco Paraguayo, en el mes de Noviembre del Año Se utilizaron para el estudio 766 vacas con cría al pie tipo Cebú e hibridas con una condición corporal promedio de 3,5 (escala del 1 al 5). Estas se encontraban sobre pasturas de Gatton Panic. Del total de vientres del estudio se formaron 3 lotes al azar, Lote 1: Inseminados con semen fresco. Lote 2: Inseminados con semen refrigerado. Lote 3: Inseminados con semen Importado. Los tres lotes fueron expuestos a un protocolo tradicional de sincronización a tiempo fijo con dispositivos intravaginales e inseminados según su grupo. Horas antes de la Inseminacion fueron colectados 4 toros de la raza Brangus Colorado, que reunían los parámetros mínimos de calidad seminal. Toro 1 BN : Motilidad Progresiva 75% - mayor a 70 % de células normales Toro 2 BN: Motilidad Progresiva 70%- mayor a 70 % de células normales Toro 3 BN: Motilidad Progresiva 70%- mayor a 70 % de células normales Toro 4 BN: Motilidad Progresiva 75%- mayor a 70 % de células normales Semen fresco: se colecto el semen de cuatro toros seleccionados como superiores en el rodeo, luego de una evaluación microscópica de motilidad progresiva y morfología con tinción de Eosina Nigrosina., Se realizó una dilución 1:1 con el diluyente comercial (Andromed, Minitub, Alemania), se evaluó la concentración mediante la Cámara de Newbawer, y a continuación se realizó la dilución final. Las 7

8 pajuelas fueron cargadas con una concentración de 30 millones de espermatozoides por ml en pajuelas de 0.5 y posterior sellado Previa a la Inseminacion se volvió a evaluar motilidad progresiva y se tomo como parámetro minimo para utilizarla 30 % de Motilidad Progresiva. El tiempo trascurrido entre la colecta y la I.A.T.F. con semen fresco fue de 1 hora. Semen refrigerado: El grupo de pajuelas refrigeradas se confeccionaron de la misma manera que las pajuelas en fresco y fueron mantenidas en heladera 5 grados centígrados por 7 horas. También aquí se evaluó motilidad progresiva teniendo como parámetro mínimo 25%. Desde la heladera hasta el corral de inseminacion fueron mantenidas las pajuelas en un termo de plástico desde donde se cargaban los inyectores para la I.A. SemenComgelado: El semen congelado también fue evaluados de la misma manera que los anteriores en cuanto a parámetros mínimos, motilidad progresiva, vigor y evaluación a las 0 y a las 2 hs post congelado siendo los resultados satisfactorios para las tres pruebas. Las pajuelas fueron descongeladas a 35 grados centígrados por 35 segundos. Se realizó el diagnostico de preñez por ultrasonografía a los 35 días post IATF. 8

9 2.2. DETERMINACIONES O TRATAMIENTOS Para la realización del estudio se utilizaron Vacas cebú y cruza hibridas, todas con cría al pie. La edad mínima de post parto de las vacas para ser introducidas al programa de I.A.T.F. fue de 40 días. El establecimiento Estancia la Cotorrita del Grupo Intercontinentale S.A. se encuentra A 720 Km de la Ciudad de Asunción, dentro del departamento de Boquerón, con un régimen de lluvias de 600 a 700 mm anuales. Lluvia que se distribuye entre los meses de Noviembre a Marzo. El Agua para bebida de los animales proviene de pozos artesianos de mas de 200 mts de profundidad ANÁLISIS DE DATOS Los datos se analizaron estadísticamente mediante los programas Epiinfo. El limite de confianza que se fijo 95%. 9

10 3. RESULTADOS Los resultados se encuentran indicados en la Tabla 1 y Figura 1. No hubo diferencias significativas en los porcentajes de preñez entre los grupos de vacas inseminadas con semen congelado y semen fresco. Sin embargo, las tasas de preñez fueron inferiores cuando se utilizó semen refrigerado. En las tablas 2 y 3 se muestran las evaluaciones de los objetivos secundarios. No se observan diferencias significativas entre los grupos de Dispositivos Nuevos y usados, así como tampoco hubo diferencia inseminando a las 48 o 52 hs. Tabla 1. Porcentajes de preñez a la IATF. GRUPOS DAS PRENA VACIAS TOTAL % Semen Importado (56.9)a Semen Fresco (55.8)a Semen Refrigerado (44.6)b TOTAL

11 Tabla 2. Porcentajes de preñez Dispositivos Nuevos y Usados. GRUPOS PRENA VACIA TOTAL % DAS S Dispositivos Nuevos Dispositivos Usados (56.9) a (52.2) a Total 766 Tabla 3. Porcentajes de preñez 48 hs vs 52 hs. GRUPOS PRENA DAS VACIAS TOTAL % Inseminados 48 hs Inseminados 52 hs (54.3) a (54.6) a Total

12 4. DISCUSIÓN La tasa de preñez obtenida en este estudio, utilizando semen fresco, refrigerado y congelado concuerdan con los presentados por Guillermo Brogliatti en el año 2014 donde evaluó 176 vaquillonas cruzas hibridas y cebú no habiendo encontrado significancia en la tasa de preñez obtenida En cuanto al momento de la I.A.T.F de 48 hs vs 52 hs en nuestro trabajo no se encuentran diferencias significativas, resultado que coincide con los presentado por Díaz, Saralegui y Cutaia (Simposio Internacional de Reproducción Animal 2011), donde sincronizaron 303 vaquillonas e inseminaron a tiempo fijo a las 48 y 54 hs donde no encontraron diferencias signifcativas en los porcentajes de preñez entre ambos grupos. En cuanto a vacas con cria al pie se menciona el trabajo presentado de Zabala, Repiso, López y Cutaia (Simposio Internacional de Reproducción Animal 2011) donde sincronizaron 200 vacas con cría y los resultados a las 48 o 54 hs no muestran diferencias significativas en la tasa de preñez. En otro estudio de Sauton, Marcoveccio, Diaz y Cutaia (Simposio Internacional de Reproducción Animal 2011) donde sincronizaron 73 vacas y las inseminaron a las 48 y 72 hs respectivamente tampoco encontraron significativa en los porcentajes de preñez logrados. En relación a los dispositivos nuevos y usados concluimos que no existen diferencias sobre la tasa de preñez utilizando dispositivos de primer uso o de segundo uso, datos similares fueron presentados por Cutaia, Tribulo, Alicio, Tegli, Moreno y Bo en el año 2001 en el marco del cuatro simposio internacional de Reproducción Animal donde fueron evaluadas 391 vacas no encontrando diferencia en la tasa de preñez utilizando dispositivos nuevos y usados. 12

13 5. CONCLUSIONES Los resultados demuestran que no existen diferencias significativas en el % de preñez entre los grupos Inseminados con semen Fresco e importado, por lo que puede ser una técnica implementada en los programas de I.A.T.F. con el fin de aumentar la eficiencia de los reproductores de alto valor genético que se encuentran en los campos. A pesar de que no obtuvimos aumento en la tasa de preñez con el uso del semen fresco, consideramos que puede tener un gran impacto, pues disminuye el costo directo de compra de semen, se aumenta la cantidad de descendencia por toro, y permite al profesional veterinario estar presente en el momento de la I.A. así como también es un servicio más que se le ofrece al productor en busca de la eficiencia del programa. En cuanto al semen refrigerado, si se observo una menor tasa de preñez por lo que consideramos, seguir evaluando la técnica que utilizamos para el mantenimiento de las pajuelas refrigeradas, pues existen reportes de otros trabajos mencionados donde no se ven diferencia. No hubieron diferencias en los lotes de dispositivos nuevos o usados, así como tampoco se observó diferencias al inseminar a las 48 hs o 52 hs. Por lo que se podría estar Inseminando de rutina a las 48 hs volviendo los protocolos más prácticos. 13

14 6. BIBLIOGRAFÍA Uso de semen fresco e refrigerado en programas de inseminación artificial en tempo fixo en femeas bovinas. Natalia do Carmo Silva 1, Karen Martins Leao 2, Thaisa Campos Maques3, Rossana Pereira da Silva4, Moraima Castro Rodriguez 4. Comparison of three diluents for the storge of fresh bovine semen. Department of Reproduction, Obstetrics and Herd Health, Ghent University, Faculty of Veterinary Medicine, Salisburylaan 133, 9820 Merelbeke, Belgium.stevenv.verberckmoes.Ugent.be. Theriogenology.2006 Dec; 66 (9):2219 El Impacto de la calidad seminal en los programas de IATF. G.M Brogliatti Director Tecnico del Centro Genético Bovino Eolia SA y del Centro de Inseminación Artificial de la Argentina Chica. Semen Refrigerado vs Semen Congelado en Programas de IATF. Fixed-time Al pregnancy rate following insemination with frozen- thawed or fresh-extended semen in progesterone supplemented CO Synch protocol in beef cows. Bucher A1, Kasimanickam R, Hall JB, Dejarnette JM, Whittier WD, Kahn W, Xu Z. Departament of large Animal Clinical Sciences, Virginia- Maryland Regional College of Veterinary Medicine, Virginia 24061, USA. Comparison between liquid and deep- frozen semen for insemination in developing and developed countries. H Schuh. The author was an associate professional officer in the Animal Production and Health Division, FAO. Características del semen Fonseca1999 parámetros genéticos de las características andrológicas en la especie bovina.genetic parameters of andrological traits in bovine. MR Silva a, VB Pedrosa b, JBC Silva c*, LGG Herrera d, JP Eler b, LG Albuquerque a Análisis de semen congelado- descongelado en bovinos.ezequiel Etcheber; Ricardo M. Larsen; Jorge Cabodevila; María Catena Fac. Cs. Veterinarias UNCPBA. 14

15 7. ANEXO Semen Preñadas No preñadas DIV nuevo DIV usado Identificación del parámetro de la población a estimar Totales de filas y columnas Semen Preñadas No preñadas Total DIV nuevo DIV usado Total Frecuencia esperada Semen Preñadas No preñadas l Tota DIV nuevo DIV usado Total

16 Hipótesis estadísticas Hipótesis nula: Existe similar porcentaje de preñez con la utilización de DIV nuevo y usado Hipótesis alternativa: Existe diferencia en el porcentaje de preñez con la utilización de DIV nuevo y usado. Nivel de significación= 95% Regla de decisión. X² = Σ (O E) 2 /E= ( ) 2 / ( ) 2 / ( ) 2 / ( ) 2 / 189= 1,72 Grados de libertad (v)= (Nº de filas 1) x (Nº de columnas 1)= 2 1 x 2 1 = 1 * Se acepta Ho si X² < X² (0,05 ; v) ; X² < 3,84 * Se rechaza Ho en caso contrario Toma de decisión. Como X² = 1,72 es menor a 3,84, según la regla de decisión, se acepta la Hipótesis Nula, es decir, no existe suficiente evidencia para afirmar que existe diferencia en el porcentaje de preñez con la utilización de DIV nuevo y usado. Distribución Chi-Cuadrado teniendo en cuenta el porcentaje de preñez con inseminación a las 48 y 52 horas. Resultados obtenidos Semen Preñadas No preñadas 48 horas horas

17 Identificación del parámetro de la población a estimar Totales de filas y columnas Semen Preñadas No preñadas Total 48 horas horas Total Frecuencia esperada Semen Preñadas No preñadas Total 48 horas horas Total Hipótesis estadísticas Hipótesis nula: Existe similar porcentaje de preñez con la inseminación a las 48 y 52 horas. Hipótesis alternativa: Existe diferencia en el porcentaje de preñez con la inseminación a las 48 y 52 horas. Nivel de significación= 95% Regla de decisión. X² = Σ (O E) 2 /E= ( ) 2 / ( ) 2 / ( ) 2 / ( ) 2 / 122= 0,02 17

18 Grados de libertad (v)= (Nº de filas 1) x (Nº de columnas 1)= 2 1 x 2 1 = 1 * Se acepta Ho si X² < X² (0,05 ; v) ; X² < 3,84 * Se rechaza Ho en caso contrario Toma de decisión. Como X² = 0,02 es menor a 3,84, según la regla de decisión, se acepta la Hipótesis Nula, es decir, no existe suficiente evidencia para afirmar que existe diferencia en el porcentaje de preñez con la inseminación a las 48 y 52 horas. Terneros en el momento de la Ecografía. Vacas utilizadas para el tratamiento. 18