DETECCIÓN N DE OOQUISTES DE CRYPTOSPORIDIUM PARVUM EN DEPOSICIÓN MEDIANTE TEST DE SCREENING Y TINCIÓN N DE ZIEHL NEELSEN

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1 DETECCIÓN N DE OOQUISTES DE CRYPTOSPORIDIUM PARVUM EN DEPOSICIÓN MEDIANTE TEST DE SCREENING Y TINCIÓN N DE ZIEHL NEELSEN. RIVERA N.; GUTIÉRREZ G.;OPAZO M.; ORREGO C.; ESPINOZA M.; HENRÍQUEZ D.; GUERRERO J.;BARRA A.;HINOJOSA M.; QUIROZ E.;ARAYA T.; SAN MARTIN A.; SOTO A.; ARRIAGADA R. nrivera@udec.cl Carrera de Tecnología Médica, Facultad de Medicina, Universidad de Concepción; Hospital Guillermo Grant Benavente; Hospital Higueras y Consultorio O Higgins

2 Introducción Descrito en niños solo desde mediados de la década de los 80. En el inmunocomprometido, especialmente en el SIDA, constituye una temible complicación, ya que se presenta con severidad y refractariedad al manejo. En el contexto de todas las etiologías de diarrea aguda en pediatría y en numerosos estudios Cryptosporidium, ocupa el cuarto lugar después de Rotavirus, Escherichia coli y Campylobacter.

3 Introducción Las personas más susceptibles son los niños, los ancianos y, principalmente, quienes presentan inmunodeficiencia Se ha demostrado la transmisión zoonótica y antroponótica de este parásito, pero no se conoce con exactitud la importancia relativa de cada una de ellas. 1-2 La presencia de Cryptosporidium (parvum, hominis), ha sido demostrada en Concepción, 3-4 no obstante su búsqueda no se hace rutinariamente. 1 Lippi E. y Castro P.Parasitol Latinoam58: ,2003 FLAP Pinilla y cols. Parasitología al Día 11:77-79, Rivera N y cols. Parasitología al Día 19:

4 Por qué no se diagnostica? Tinción de Ziehl Neelsen 1. Es muy poco solicitado por los médicos 2. Sólo se realiza, si el médico lo solicita. No obstante, sedimento fecal + lugol y observación con objetivo 40x 5 5 Ellen Jo Baron y cols. Comparison of Three Methods for detection of Cryptosporidium oocysts in a low-prevalence PopulationJ.Clin.Microb,Jan 1989,p

5 Objetivos. Validar la observación directa de sedimento fecal usando MIF o lugol como técnica de screening en la detección de ooquistes de C. parvum. Adiestrar a los alumnos de Tecnología médica en el diagnóstico de ooquistes de Cryptosporidium mediante Test de Screening y tinción de Z.N. Comparar con la tinción de Ziehl Neelsen Determinar prevalencia de C. parvum y otros enteroparásitos en Concepción.

6 Material y métodom METODO DE BURROW S Fase trofozoitica Fase quistica Tamizar Botar sobrenadante Colocar una gota de sedim ento fecal mas MIF MIF Lugol Lugol S.F 5m a 1800 rpm Concentrar E.E tionina Observar 10x y 40x Observar 100x Z.N. Muestras positivas a C. parvum para adiestramiento de los alumnos, en ambos métodos. Concentrados de deposición, Método de Burrows. Observación con objetivo 40x, con lugol y MIF (alumnos y Profesor) Tinción de Ziehl Neelsen

7 ZIEHL NEELSEN MODIFICADO PREPARACIÓN DE TINCIONES 1.Fucsina Fucsina básica 10g Alcohol etílico al 95% 100mL Fenol cristalizado 50mL Agua destilada c.s.p. 1000ml 2.Azul de Metileno Azul de metileno 2g Acido acético glacial 50mL Agua destilada c.s.p. 1000mL 3.Alcohol ácido ácido clorhídrico 30ml alcohol etílico 95% 970ml

8 RESULTADOS Muestras analizadas durante el período de estudio (18 de Mayo al 17 de Junio 2004) Hospital Guillermo Grant Benavente Consultorio O Higgins Hospital Higueras C. Chiguayante C. Pedro de Valdivia C. Los Cerros C. Florida C. Sta. Sabina C. Copielemu C. Lorenzo Arenas C, Nonguen C. Tucapel C. Leonera C. Costanera C. Victor Manuel Fernadez 94 de 333 ( 28 %) 35 de 341 (10.3%) 15 de 29 52% 144 de %

9 OBSERVACIONES REALIZADAS TECNICA Utilizada Obs.objetivo40x Lugol y MIF Obs.objetivo 100x.Z.N. Falsos positivos 40x(Lugol-MIF) 100x(Z.N.) Falsos negativos 40x(Lugol-MIF) 100x(Z.N.) ALUMNOS + - Total n n n % % PROFESOR + - Total n n n %

10 Prevalencia de Enteroparásitos en 144 muestras ESPECIE Blastocystis hominis Giardia lamblia Entamoeba coli Endolimax nana Cryptosporidium parvum* Entamoeba histolytica/dispar Número de casos n % Total

11 Cryptosporidiosis Pacientes Edad Procedencia otros enteroparasitos Masculino 2 años Poli ninos HGGB Gl, Bh, Ec, Femenino 1 año C.Leonera -

12 COMPARACION DE RESULTADOS OBTENIDOS Y UN ESTUDIO SIMILAR REALIZADO EN CONCEPCION Enteroparasitosis en pacientes de Concepción 1 Enteroparásitos Giardia lamblia Ascaris lumbricoides Entamoeba coli Blastocystis hominis Endolimax nana Entamoeba histolytica Hymenolepis nana Trichuris trichiura Chilomastix mesnili Cryptosporidium sp. Número Rivera N. y cols. Parasitología al Día 19: %

13 Resultados Tabla 1 :Numero de casos positivos en 144 muestras analizadas Número de Parásitos por muestra Casos positivos Total Total 50 de % 66 La edad de los pacientes fluctuo entre 1 mes y 84 años

14 Conclusiones. La observación con objetivo 40x + lugol o MIF constituye un buen método de Screening, de bajo costo, para la detección de ooquistes de Cryptosporidium (2.7% de F+ y 0.69% F-). Se requiere un ojo adiestrado (Se sugiere adiestrar ya desde la etapa estudiantil) y... Confirmación con tinción de Ziehl Neelsen. Se demuestra una vez más, la presencia dcryptosporidium parvum en pacientes de Concepción.(similar prevalencia) Llama (+) la atención, el descenso de la prevalencia de enteroparásitos y, la ausencia de helmintos en las muestras procesadas en comparación con estudio anterior.

15 Impacto. Luego de concluido el estudio, se implementa la búsqueda rutinaria de ooquistes de Cryptosporidium en pacientes del Consultorio O Higgins mediante tinción de Z.N. en E.P.S.D. en menores de dos años, habiendo diagnosticado,en Julio, dos casos en hermanos. Los profesionales de los diversos laboratorios han solicitado muestras positivas a ooquistes de Cryptosporidium y los alumnos están contribuyendo a su adiestramiento.

16 DETECCIÓN N DE OOQUISTES DE CRYPTOSPORIDIUM PARVUM EN DEPOSICIÓN MEDIANTE TEST DE SCREENING Y TINCIÓN N DE ZIEHL NEELSEN. RIVERA N.; GUTIÉRREZ G.;OPAZO M.; ORREGO C.; ESPINOZA M.; HENRÍQUEZ D.; GUERRERO J.;BARRA A.;HINOJOSA M.; QUIROZ E.;ARAYA T.; SAN MARTIN A.; SOTO A.; ARRIAGADA R. nrivera@udec.cl Carrera de Tecnología Médica, Facultad de Medicina, Universidad de Concepción; Hospital Guillermo Grant Benavente; Hospital Higueras y Consultorio O Higgins