IV-Botero-Venezuela-1 DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE PARÁSITOS Y BACTERIÓFAGOS EN UN SISTEMA DE TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES

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1 IV-Botero-Venezuela-1 DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE PARÁSITOS Y BACTERIÓFAGOS EN UN SISTEMA DE TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES Ligia Botero de Ledesma (1) Lic. en Educación: Biología y Química. MSc. en Microbiología, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia. PHSc. en Virología, Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas, Caracas,Venezuela. Profesora Titular, Jubilada del Departamento de Biología de la Facultad Experimental de Ciencias de la Universidad del Zulia y Coordinadora del Lab. de Virología del Centro de Investigación del Agua de la Facultad de Ingeniería. La Universidad del Zulia. Maracaibo. Venezuela. Ivonne Arnedo. Licenciada en Biología, Universidad del Zulia. Mariangela Bracho González. Lic. en Biología. MSc. en Microbiología. Becario Academico del Lab. de Virología del Centro de Investigación del Agua de la Facultad de Ingeniería. La Universidad del Zulia Odelis Díaz de Suárez. Medico Cirujano. MSc. en Microbiología y Doctora en Ciencias Medicas, La Universidad del Zulia. Profesora Asociada y Jefe de la Sección de Parasitología, Instituto de Investigaciones Clínicas Dr. Américo Negrete. LUZ. Dirección (1): Telfax: ligiabotero@cantv.net.. RESUMEN El reuso de aguas residuales tratadas se ha sugerido para ciertas actividades domésticas, industriales, y agrícolas. Dentro de los patógenos trasmitidos por el agua, los virus y los parásitos se conocen por ser altamente resistentes a los sistemas de tratamiento. El objetivo de este trabajo fue detectar la presencia de parásitos y bacteriófagos de E coli C en una planta de tratamiento de aguas residuales y estimar la eficacia de la planta en la remoción de estos microorganismos. La presencia de los protozoos Giardia lamblia y Cryptosporidum parvum fue determinada por inmunofluorescencia, mientras que los helmintos fueron detectados por examen directo y los fagos fueron analizados empleando técnicas de la APHA. La concentración de protozoos en el efluente final fue de 2,7x 4 quistes/0l de G.lamblia, 7,7x 4 ooquistes/0l de C.parvum y 9,0 quistes/l de Entamoeba coli, mientras que la de los huevos del helmintos fue de 15,8 huevos/l de Áscaris sp, 13,3 huevos/l de Ancylostomideo sp. Los fagos de E coli C y los huevos de Trichuris y Hymenolepis que estaban presentes en la entrada de la planta no se detectaron en el efluente final. No se observó correlación entre la presencia de bacterias indicadores de contaminación y la presencia de fagos ni de parásitos. Los resultados indican que el vertido al ambiente de los efluentes de esta planta, podría ser una fuente potencial de infección humana con protozoarios y helmintos, lo que pone en evidencia la necesidad de establecer las concentraciones aceptables de parásitos y virus en aguas para ser reusadas y su control rutinario. Palabras Claves: Bacteriófagos, Bacterias Indicadoras, Parásitos, Aguas Residuales. INTRODUCCIÓN Los reservorios de agua deben ser protegidos de descargas de efluentes no tratados, que pueden presentar altas concentraciones de nutrientes y patógenos los cuales afectan el ecosistema de estos reservorios y pueden causar graves daños a la salud (León, 1995). Enfermedades entre ellas diarreas, gastroenteritis, fiebre tifoidea y paratifoidea, cólera, hepatitis infecciosa, amibiasis, giardiasis, cryptosporidiosis, helmintiasis y otras, pueden ser ocasionadas debido a la presencia de virus, parásitos y bacterias en el agua residual, que no ha recibido el tratamiento adecuado (CEPIS, 1995, Cifuentes, 2000). 1

2 Con relación a la presencia de virus en aguas residuales, existen más de 140 distintos tipos de ellos que son causa importante de síntomas gastrointestinales, resfriado y fiebre; además son reconocidos como un factor importante en infecciones agudas especialmente del Sistema Nervioso Central: meningitis y encefalitis, y en infecciones subagudas y crónicas del sistema cardiovascular: pericarditis, miocarditis y cardiomiopatias (Hot et al., 2003, Ashbolt., 2004). Los parásitos son otros de los microorganismos patógenos que se encuentran en las aguas residuales; dentro de estos, los protozoarios patógenos de mayor importancia en agua residual son: Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum y Entamoeba coli y los helmintos mas comúnmente aislados en aguas residuales incluyen: Áscaris lumbricoides, Ancylostomideos como Necator americano, Ancylostoma duodenales, Strongyloides stercoralis Trichuris trichiura, Hymenolepis diminuta entre otros (Caccio et al., 2003). Se conoce que las diarreas contribuyen a reducir el estado de nutrición frenando en gran medida el crecimiento y obstaculizando el desarrollo mental de los niños y son consideradas como causa principal de mortalidad y morbilidad infantil en los países en desarrollo (Minvielle et al., 2004). Debido a que no todos los patógenos presentes en el agua pueden ser investigados rutinariamente, porque son muy numerosos y cada uno requiere de métodos específicos para su detección (Huang y col., 2000), se ha venido empleando desde hace muchos años al grupo de bacterias coliformes como el principal indicador de calidad microbiológica de los distintos tipos de agua (USEPA, 2000). Sin embargo, en las ultimas décadas se han presentado pruebas fehacientes de que las bacterias coliformes no reflejan la presencia de bacterias patógenas, ni la de virus (Brassard et al, 2005) ni la de parásitos (Harwood et al., 2005), entre otras causas porque estos son muchos mas resistentes que ellas a los tratamientos de desinfección (Gantzer, 1998; Griffin, 1999), por lo que se ha sugerido el estudio de los bacteriófagos como indicadores mas adecuados de calidad sanitaria del agua (Brassard et al, 2005, Hot et al., 2003). Los bacteriófagos o fagos, son virus que se reproducen dentro de una célula bacteriana, además son relativamente fáciles de identificar y sus grupos son diferenciados por el uso de un hospedero especifico (Grabow., 2001); los fagos de E coli reflejan la existencia de esta bacteria, por lo tanto de contaminación con materia fecal, y son más resistentes que esta bacteria a las condiciones ambientales (Hot et al, 2003). Las técnicas para la identificación de estos microorganismos son mas rápidas, simples y económicas, y pueden ser realizadas en cualquier laboratorio de microbiología (APHA, 2000). En este trabajo se estudió en el Sistema de Tratamiento de aguas residuales de Maracaibo, denominado Planta de Tratamiento de Aguas Servidas Sur, la presencia de bacteriófagos y parásitos protozoarios y helmintos y se relacionó con la presencia de bacterias Indicadoras de contaminación. Este sistema fue diseñado para tratar un caudal de 3400l/s de agua, actualmente esta recibiendo 1200L/s proveniente de dos de las cuatro estaciones de bombeo, localizadas en Varadero (Centro de Maracaibo), Arreaga (Los Háticos), La Cañada, La Silva (San Francisco) y el parque Sur, cubriendo una población de mas de un millón de personas (Rodríguez et al., 2000). Esta planta de tratamiento funciona mediante lagunas de estabilización, que es uno de los sistemas mas adecuados para el tratamiento de aguas residuales, en regiones donde hay disponibilidad de grandes extensiones de tierra a costos razonables, alta incidencia de luz solar y temperaturas normalmente elevadas (Mezrioui et al., 1995; Tebbutt, 1993). Las ventajas de estos sistemas de tratamiento son: inversión de poco capital, bajos costos de operación, simplicidad en la operación y mantenimiento, constante disponibilidad de tratamiento, y la no necesidad de energía externa diferente a la energía solar (Tebbutt, 1993; Sáenz, 1997). La remoción de los patógenos que son endémicos en los países en vía de desarrollo, debe ser el objetivo prioritario del tratamiento de las aguas residuales que van a ser empleadas para riego o van a ser vertidas en los cuerpos de agua, y no la remoción de materia orgánica y nutrientes, que si es el principal objetivo del tratamiento en los países desarrollados (Sáenz, 1997). 2

3 MATERIALES Y MÉTODOS Sitio de Muestreo El Sistema Tratamiento de Aguas Servidas Sur de Maracaibo, Estado Zulia, Venezuela, cual consta de tres etapas consecutivas: primaria (anaeróbica), facultativa y maduración (Figura 1). y recibe aguas residuales de los Municipios San Francisco y Maracaibo ambos de la ciudad de Maracaibo. Laguna de Maduración N 1 Laguna de Maduración N 2 Deposito de Efluente Lechos de Secado Salida al Lago Laguna Facultativa Módulo Canal de Entrada Sitio de Toma de Muestra Figura 1. Esquema de la Planta de Tratamiento Sur de la ciudad de Maracaibo. Toma de Muestras Se realizaron muestreos al azar, durante los meses de Junio y Julio de 2004, captando muestras en el canal de entrada, en los módulos primarios, en la laguna facultativa y en el efluente final, analizando un total de 40 muestras. Para la determinación del NMP de coliformes totales, coliformes termotolerantes y para bacteriófagos se tomaron muestras de 200 ml, todas en frasco de vidrio estériles de 500 ml de capacidad. Para el estudio de parásitos, se tomaron muestras de cuatro litros en recipientes plásticos previamente desinfectados. Todas las muestras se trasladaron al laboratorio en una cava con hielo para su procesamiento inmediato. Detección de bacteriófagos de E. coli C La detección de los bacteriófagos de E. coli C se realizó mediante la técnica propuesta en el Standard Methods (APHA, 2000). Cada una de las muestras se ensayó por duplicado usando para ello dos tubos con 5,5 ml de agar tripticasa soya modificado (MTSA), fluidificado y mantenido a +/-45 C en un baño de Maria. A cada tubo se le añadió 1,5 ml de la bacteria hospedera E coli C ATCC 15597, 1ml de muestra concentrada y 80 ul de cloruro de 2,35 Trifenil tetrasolio (TPTZ), al 1% en etanol. Después de colocar todos los componentes en el tubo, se mezclaron por agitación suave, y luego el contenido se vertió en placas de petri estériles, se dejaron solidificar y se incubaron a 37 C por 18 horas, al cabo de las cuales se contaron las zonas claras o de lisis y se reportaron los resultados como UFP/ ml. Detección de Parásitos Procesamiento de las muestras Una vez en el laboratorio, el envase que contenía cuatro litros de muestra, se dejó en sedimentación por 24 horas, se descartó el sobrenadante por succión, y se recuperó el sedimento, más aproximadamente 2 ml del sobrenadante. Este volumen se distribuyó en botellas de 200 ml de capacidad y se centrifugó a 2500xg durante 11 min. (Centrifuga Centra MPSR IEC). Al terminar la centrifugación, se eliminó el sobrenadante mediante succión y los sedimentos de cada botella se transfirieron a un único tubo de centrífuga de 50 ml. El sedimento obtenido se dividió en dos partes iguales en envases que contenían uno de ellos ml solución de formaldehído al % y el otro ml de dicromato de potasio al 2,5%. El primero de ellos se empleó para el estudio de los helmintos por la técnica de Sedimentación- 3

4 Centrifugación con Formol-Éter (Ritchie, 1948) y el segundo se utilizó para la detección de los protozoarios entéricos Giardia y Cryptosporidium. Visualización e Identificación de los Parásitos. La visualización y cuantificación de los parásitos se realizó por las técnicas de examen al fresco con solución salina fisiológica al 0,85% y coloración temporal con lugol a través de un microscopio de luz a una magnificación de X y 40X y utilizando la cámara de Sedwich-Rafther (NOM, 1998). Para la determinación de presencia de Giardia y Cryptosporidium se empleo la técnica de Inmunofluorescencia directa (Waterborne, INC, New Orleands, USA). La técnica de Inmunofluorescencia directa se llevó a cabo empleando los anticuerpos marcados con isotiocianato de fluoresceína: A300FL Giardi-a-GloTM (Waterborne, Inc. New Orleands, USA) para la determinación de Giardia lamblia, y A400FL Crypto-a-GloTM (Waterborne,INC. New Orleands, USA) para la determinación de Cryptosporidium parvum., de la siguiente manera: se colocó 30 µl de la muestra concentrada sobre un portaobjeto estéril, y se preparó el extendido en el centro del mismo. Se dejó secar completamente a temperatura ambiente, se agregó metanol sobre el extendido y se dejó secar, luego se cubrió completamente con el anticuerpo monoclonal específico para Giardia ó Cryptosporidium e inmediatamente se incubó por 30 minutos en cámara húmeda; al finalizar este tiempo, se lavó un minuto en PBS para remover el exceso de anticuerpo y por último se le agregó 1 gota de líquido de montaje (Waterborne, INC. New Orleands, USA). La muestra se observó con los objetivos de 200X, 400X y 00X utilizando un microscopio de epifluorescencia (Zeiss, West Germany) y siguiendo las instrucciones del fabricante. Determinación de CT. Para la determinación del Número Más Probable (NMP) de Coliformes Totales se siguió la técnica de fermentación de tubos múltiples, en tres series de cinco tubos, propuesta en el Standard Methods (APHA, 2000). Análisis fisicoquímicos Al momento de la toma de la muestra se determinaron los siguientes parámetros fisicoquímicos: ph, el cual se midió con un phmetro (HANNA); temperatura, mediante el empleo de un termómetro de mercurio que oscila entre O C y 150 C y la turbidez empleando un Turbidímetro 20 (HACH). RESULTADOS Y DISCUSIÓN En el 0% de las muestras de la entrada se determinó, como era de esperarse, la presencia de bacteriófagos, parásitos protozoarios entericos, helmintos y bacterias indicadoras de contaminación. En el efluente final se detectaron los protozoarios G. lamblia y C. parvum y los helmintos Áscaris y Ancylostomideos. Los demás microorganismos estudiados estuvieron ausentes (Tabla1). Con relación a la presencia de bacteriófagos de E.coli C, el promedio en la entrada de la planta fue de 1,5x 5 UFP/0 ml, en los módulos primarios de 3,6x 4 en la laguna facultativa de 3,4x 3 UFP/0 ml, no detectándose en el efluente final (Tabla 2). Estos resultados indican que el sistema fue capaz de reducir en un logaritmo la concentración de bacteriófagos en las aguas entre la entrada y los módulos primarios, así como entre los módulos primarios y la laguna facultativa. Entre la laguna facultativa y el efluente final redujo la concentración en 3 logaritmos, eliminando totalmente los fagos del efluente. Trabajos similares acerca de la reducción de fagos en sistemas de tratamiento de aguas residuales, han reportado resultados variables. Morillo (2003) obtuvo en un estudio realizado en este mismo sistema de tratamiento un promedio de fagos a la entrada y a la salida de 3.15x 3 UFP/0ml y de 1,3x 1 UFP/0ml respectivamente. León (2000) obtuvo un promedio de bacteriófagos a la entrada de 4,3x 5 UFP/0ml y 3,5x 2 UFP/0ml en la salida y González (2003) de 6,39x 4 UFP/0ml y 3,6x 2 UFP/0ml. Las diferencias observadas en la concentración de bacteriófagos estudiados, indica variabilidad en la presencia de ellos, incluso en un mismo sistema de tratamiento en diferentes momentos, lo que sugiere la necesidad del monitoreo periódico de fagos en estos sistemas. Las diferencias en las concentraciones de fagos 4

5 pueden atribuirse a las características sanitarias de la población, las cuales son muy variables y determinan las condiciones microbiológicas del efluente (Rosillo, 2001). Tabla I. Sitio de muestreo, numero de muestras y número y porcentaje de muestras positivas para los microorganismos estudiados Número y porcentaje de muestras positivas Muestra Fagos Protozoarios Parásitos Helmintos Bacterias Sitio de muestreo Nº de Muestras E coli C C. parvum G. lamblia E. coli Áscaris sp Ancylostomideos T. trichiura H. diminuta Larvas Rabdithoides CT E (0) MP (0) LF (0) S _ (0) (0) (0) (0) (0) (0) (0) (0) 5 (50) (0) _ (0) 2 (20) 3 (30) (0) (0) 6 (60) _ (0) 3 (30) 4 (40) 4 (40) _ 1 () (0) (0) 9 (90) 2 (20) E= Entrada, M.P= Módulos primarios, L. F= Laguna facultativa, S= Salida, ( )= porcentaje de muestras positivas. En cuanto a la presencia de parásitos entéricos, en el efluente de la planta de tratamiento, se detectó G. lamblia y C. parvum en el 0% de las muestras, los helmintos Áscaris sp se determinaron en el 30%, los Ancylostomideos en un 40% y las larvas Rabdithoides en un %. Los huevos de Trichuris trichiura e Hymenolepis diminuta no se detectaron en la salida (Tabla1). El hecho de que los protozoarios entéricos G. lamblia y C. parvum hallan estado presentes en todas las muestras de la salida, se debe sin duda a su alta prevalencia en la población y a los tiempos de supervivencia de ambos parásitos en el agua. En el estado Zulia, la Giardiasis y la Cryptosporidiosis son unas de las afecciones más frecuentemente reportadas en las diferentes municipalidades (Díaz et al., 1996; Chacin et al., 1993) En Venezuela, los reportes de frecuencia de infecciones por Cryptosporidium sp. y Giardia sp. en las heces de individuos que padecen de infecciones gastrointestinales, oscilan entre 7,4% y 53,5%, siendo Giardia el protozoario intestinal de mayor prevalencia en el país (Miller et al, 2003). En relación a la supervivencia de estos dos protozoarios, Cryptosporidium se ha demostrado que en el agua sobrevive un año (Tamburrini, 1999), y Giardia de 2-3 meses (Adam, 2001). Las diferencias observadas entre la presencia de helmintos y de protozoarios en el efluente final, se debe a que los helmintos son menos resistentes que los protozoarios a las condiciones ambientales. Áscaris sobrevive de días, los Ancylostomideos alrededor de 25 días y las larvas Rabdithoides son capaces de sobrevivir 16 días en agua residual (Rosillo, 2001). Adicionalmente, los helmintos a consecuencia de su baja gravidez específica tienden a irse al fondo (Rose, 1986), lo que puede afectar su aislamiento al momento de la toma de muestras. El promedio de quistes de G. lamblia y ooquistes de C. parvum encontrado en el sistema fue de: 4,2x 5 quistes/0l y 8,1x 5 ooquistes/0l en la entrada, 1,3x 5 quistes/l y 3,0x 5 ooquistes/0l en los módulos primarios, 6,6x 4 quistes/l y 1,4x 5 ooquistes/0l en la laguna facultativa y 2,7x 4 quistes/l y 7,7x 4 ooquistes/0l en la salida (Tabla 2). Los resultados 5

6 obtenidos en los diferentes lagunas que conforman el sistema indican reducciones de 1 logaritmo en las concentraciones de quistes de G. lamblia entre la entrada y los módulos primarios y de C. parvum entre la laguna facultativa y el efluente final. Las concentraciones de protozoarios entéricos encontradas en esta investigación a la entrada de la planta de tratamiento son similares a las reportadas en aguas negras tanto a nivel regional (Botero y col., 1996), como a nivel internacional (Caccio y col., 2003). Tabla II. Valores promedios, mínimos y máximos de los microorganismos encontrados en el Sistema de Tratamiento Sur de Maracaibo. Sitio de muestreo (Min, Max, Prom) Fagos Protozoarios Helmintos Bacterias UFP/ Ooquistes/ Quistes/ Quistes/ Huevos/ 1L NMP/0 ml 0 ml 0L 0L 1L E. coli C C. parvum G. lamblia E. coli Áscaris sp Ancylostomideos T. trichiura H. diminuta Larvas rabdithoides CT E Min. 9,4x 4 4,6x 4 1,0X x 6 Máx. 1,9x 5 1,3x 6 9,3X ,4x 7 Prom. 1,5x 5 8,1x 5 4,2X 5 4,5 18,7 35,7 2,2 1,5 27,2 8,8x 7 M.P Min. 1,6x 4 1,4x 5 5,5X ,3x 6 Máx. 1,4x 4 6,2x 5 2,0X x 6 Prom. 3,6x 4 3,0x 5 1,3X 5 8, ,7x 6 L.F Min. 1,1x 3 7,5x 4 3,7X <2 Máx. 6,4x 3 2,6x 5 1,3X ,2x 5 Prom. 3,4x 3 1,4x 5 6,6X 4-22,7 47, ,2x 5 S Min. 0 2,5x 4 8X <2 Máx. 0 1,6x 5 8,3X x 4 Prom. 0 7,7x 4 2,7X 4 9,0 15,8 13, ,0 <2 E= Entrada, M.P= Módulos primarios, L. F= Laguna facultativa, S= Salida, Min = mínimo, Max= máximo, Prom = promedio Con relación a la presencia de Áscaris sp, en la entrada, el promedio fue de 18,7 huevos/litro (Tabla 2), en la laguna facultativa 22,7 y 15,8 huevos /litro en el efluente final. No se detectó en el módulo primario. Estos valores son menores a los reportados por Valbuena (2001) quien en un sistema de tratamiento por lagunas ubicado en la misma ciudad, encontró un promedio de Áscaris sp de 156,9 huevos/litro en muestras de la entrada y 80,2 huevos /litro en el efluente final. Los huevos de Ancylostomideos por su parte se encontraron en las siguientes concentraciones: 35,7 huevos/litro en la entrada; 47,1 huevo/litro en la laguna facultativa y 13,3 huevos/litro en el efluente final. No se detectaron en los módulos primarios. Los valores encontrados a la entrada del sistema para estos parásitos se corresponden con los reportados en otras investigaciones (Valbuena., 2001; Rifaat, 1995). Los parásitos Trichuris trichiura y Hymenolepis diminuta que estaban presentes en la entrada, no se detectaron en el efluente final de la planta de tratamiento. 6

7 Era de esperarse que la cantidad de huevos de helmintos fuera mayor en las muestras de la entrada que en las otras muestras del sistema, sin embargo, en algunos casos la presencia de huevos de Áscaris y Ancylostomideos fue mayor en la laguna facultativa que en la entrada. Este hecho puede atribuirse a la presencia en las muestras, de sedimento, de detritus y a la sobreposición de estructuras, que pudieron dificultar la visualización, ya que los huevos se mimetizan fácilmente por su color con los detritos (NOM, 1996). Adicionalmente, el tiempo de retención del sistema de lagunas es de 20 días razón por la cual, las muestra analizada a la salida no se corresponde con la de la entrada tomada en el mismo muestreo (Rosillo, 2001), todo lo cual puede explicar la variabilidad en el número de huevos de helmintos encontrados en las diferentes etapas del sistema analizadas en un mismo muestreo. No debe existir la posibilidad de que la Planta de Tratamiento Sur este concentrando los huevos de helmintos debido a que de los diez muestreos realizados solo en cuatro se detectaron estos parásitos en las muestras de la salida del sistema. La presencia de huevos de helmintos en las aguas residuales estudiadas, se debe a que se ha demostrado que especialmente en la población infantil, existe una alta prevalencia de parásitos intestinales considerados endémicos de esta área (Chacin et al., 1993; Rivero et al., 1996; Páez et al., 1997; Simoes et al., 2000). En este sistema de tratamiento para el período estudiado se determinaron porcentaje de remoción entre la entrada y salida de: 0% para bacteriófagos de E coli C, 92,25% para G. lamblia y 90,06% para C. parvum. En el caso de los helmintos los porcentajes fueron de: 0% para T. Trichiura y Hymenolepis, 80% para Entamoeba coli 66% para Larvas Radithoide, 62% para Ancylostomideo y 15% para Áscaris. Los porcentajes de remoción entre la entrada y la salida obtenidos en este estudio indican que la Planta de Tratamiento Sur de la ciudad de Maracaibo, durante el período de estudio fue eficiente para la remoción de bacteriófagos de E coli C pero ineficiente para la eliminación de parásitos, presentando porcentajes de remoción de entre el 15 y 80% en el caso de los helmintos. En general se considera que las lagunas de oxidación capaces de producir remociones entre 90 y 99% son eficientes, pero en realidad aun estos porcentajes resultan bajos cuando lo que se quiere proteger es la salud pública. Una remoción del 99% representa un 1% de supervivencia de la población de patógenos que es la más resistente y ofrece mayor riesgo (Feachem et al., 1978). Los datos obtenidos de la evaluación de los parámetros fisicoquímicos se muestran en la Tabla Nº 3. Al comparar los resultados obtenidos del análisis fisicoquímico con los resultados obtenidos para la presencia de los microorganismos no se observó una relación estadísticamente significativa entre la turbidez y la presencia de bacterias, bacteriófagos y parásitos, lo que indica que este parámetro no puede ser empleado como un indicar de la presencia de contaminación microbiana en el agua. Por otra parte, los valores de temperatura y ph estuvieron ubicados dentro del rango establecido por la normativa venezolana (Gaceta Oficial de la Republica de Venezuela Nº 5.021) El promedio de NMP/0 ml de CT en las muestras colectadas a la entrada de la planta de tratamiento fueron de 8,8x 7, en los módulos de 1,7x 6, en la laguna facultativa fue 2,2x 6, mientras que en la salida el promedio fue <2 (Tabla 2). Como puede observarse el sistema fue capaz de reducir en un logaritmo la concentración de CT en las aguas entre la entrada y los módulos primarios, así como entre los módulos primarios y la laguna facultativa. Entre la laguna facultativa y el efluente final se redujo hasta su eliminación total la presencia de los CT en el 80% de las muestras. Las concentraciones de CT obtenidas a la entrada son similares a las reportadas en trabajos previos (Valbuena, 2001; León, 2000; Ávila et al. 1999, Morillo., 2003). La Norma Venezolana para la clasificación y el control de la calidad de los cuerpos de agua y vertidos o efluentes líquidos (Gaceta Oficial de la Republica de Venezuela Nº 5.021) establece en cuanto a los parámetros biológicos, que el promedio mensual de los CT no debe ser mayor de 00 por cada 0ml, en el 90% de una serie de muestras consecutivas y en ningún caso será superior a por cada 0 ml, en las aguas que son descargadas en forma directa o indirecta a los cuerpos de agua. Esta misma norma no indica nada en relación a presencia de parásitos. Los 7

8 resultados obtenidos en esta investigación indican que en ocho de los muestreos, estos microorganismos se encontraron en concentraciones menores de <2 (datos no mostrados), y por lo tanto, cumplían con lo establecido por la Normativa Venezolana (Gaceta Oficial Nº 5021, 1995), sin embargo, en estas ocho muestras se detectó la presencia de protozoarios y helmintos, por lo que puede afirmarse que el parámetro biológico (CT) establecido en la normativa venezolana no es adecuado para determinar presencia de parásitos. Los hallazgos reportados en este trabajo en relación con la presencia de parásitos en muestras de agua libres de coliformes no es un evento aislado, resultados similares han sido reportados en otros estudios a nivel mundial (Harwood et al., 2005; Kistemann et al., 2002, Bing- Mu Hsu et al., 2003). Tabla III. Parámetros fisicoquímicos determinados en muestras de la entrada, modulo primario, laguna facultativa y salida de la planta de tratamiento sur. Temperatura ( C) ph Turbidez (NTU) E Min 35 7, Max 35 8, Prom 35 7,45 161,8 M.P Min 32 7,27 72 Max 34 8, Prom 32,7 7, L.F Min 31 7,55 71,8 Max 33 9, Prom 32,2 8,46 7 S Min 31 8,60 81,6 Max 34,2 134 Prom 32 9,63 2,3 E= Entrada, M.P= Módulos primarios, L. F= Laguna facultativa, S= Salida. Min = mínimo, Max= máximo, Prom = promedio CONCLUSIONES Los efluentes de la Planta de Tratamiento Sur de Maracaibo al ser vertidos en los cuerpos de agua, representan un riesgo para la salud pública, ya que en ellos se detectaron parásitos protozoarios y helmintos. Las muestras que cumplían con el parámetro biológico para el vertido a los cuerpos de agua, presentaron en un 0% los protozoarios G. lamblia y C. parvum y en un 50% huevos de Áscaris sp y Ancylostomideos sp. Las variaciones en la presencia de los microorganismos estudiados sugiere la necesidad del monitoreo continuo de la presencia de fagos y parásitos en los sistemas de tratamiento de agua. AGRADECIMIENTO Este trabajo de investigación fue posible gracias al apoyo financiero otorgado por el Consejo Nacional de Desarrollo Científico y Humanístico de la Universidad del Zulia (CONDES- LUZ) y al Instituto para la Conservación y Control de la Cuenca del Lago de Maracaibo (ICLAM), por permitir el acceso a la Planta de Tratamiento Sur para la toma de muestras. 8

9 ÍNDICE DE REFERENCIAS 1. ADAM, R.D (2001) Biology of Giardia lamblia. Clin. Microbiol. Rev. 14: AMERICAN PUBLIC HEALTH ASOCIATION (2000) Standard Methods for the Examination of water and wastewater. 20 th Edition. USA. pp ASHBOLT, N (2005) Microbial contamination of drinking water and disease outcomes in developing regions. Technology. 198: ÁVILA, T., GONZÁLEZ, C., SÁNCHEZ, B., VARGAS, A (1999) Bacterias, Virus y Parásitos en Aguas Residuales Tratadas mediante Lagunas de Estabilización en Maracaibo, Estado Zulia. Tesis. Facultad de Medicina, Escuela de Bioanálisis. La Universidad del Zulia. Venezuela. 9 pp. 5. BING-MU HSU, HSUA-HSIEN YEH (2003) Removal of Giardia and Cryptosporidium in Drinking Water Treatment: a pilot- scale study. Wat. Res. 37: BOTERO, L., QUINTERO, W., MEDINA, A., OLIVEROS, C (1996) Quistes de Giardia en Aguas Negras. Kasmera 24: BRASSARD, J., SÉLLER, K., HOUDE, A., SIMARD, C., TROTTIER, Y (2005) Concentration and detection of Hepatitis A virus and rotavirus in spring water simples by reverse trasncription PCR. J. Virol. Methods CACCIO, S., GIACOMO DE M., AULICINO, F., POZIO, E (2003) Giardia Cysts in Wastewater Treatment Plants in Italy. Appl. Environ. Microbiol. 69: CENTRO PANAMERICANO DE INGENIERÍA SANITARIA Y CIENCIAS DEL AMBIENTE- CEPIS (1995) Procesos de Tratamientos de Aguas Residuales, Objetivos y Selección de Tecnologías en Función al tipo de Reutilización. Peru. pp CHACÍN, L., MEJÍA, M., CANO, G., GUANIPA, N., ESTÉVEZ, J., BONILLA, E. (1993) Cryptosporidium Infections in a suburban community in Maracaibo, Venezuela. Ame. J. Tropical Medicine Hygiene 49: CIFUENTES, E., GOMEZ, M., ROMIEU, I., RUIZ, V (2000) Risk Factors For Giardia Intestinalis Infection In Agricultural Villages Practicing Wastewater Irrigation In Mexico. Ame. J. Tropical Medicine Hygiene.62: DÍAZ, O., CLAVO, B., CALCHI, M (1996) Prevalencia de criptosporidiasis en niños menores de 6 años y su relación con los factores de riesgo. Kasmera. 29: FEACHEM, R., BRANDLEY, D., GARELICK, H., MARA, D. (1978) Aspectos de la Salud en el Manejo de Excretas. The World Bank. Washington. pp GACETA OFICIAL DE LA REPÚBLICA DE VENEZUELA (1995) N Extraordinario.18 de Diciembre. 15. GANTZER, C., MAUL, A., AUDIC, J., SCHWARTZBROD, L. (1998) Detection on infectious enteroviruses, enterovirus genomes, somatic coliphages, and Bacteroides fragilis phages in treated Wastewater. Appl. Environ. Microbiol. 64: RODRÍGUEZ, G. (2000) El Sistema del Lago de Maracaibo. Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas. 2 da edición. Caracas. Venezuela. 264 pp. 17. GONZÁLEZ, E. (2003) Evaluación de Colifagos en las Lagunas de Estabilización de la Universidad del Zulia. Tesis. Facultad Experimental de Ciencias. Universidad Del Zulia. Venezuela. pp GRABOW, W.O. (2001) Bacteriophages: update on application as models for viruses in water. Water SA. 27: GRIFFIN D, GIBSON C, LIPP E, RILEY K, ROSE J. (1999) Detection of viral pathogens by reverse transcriptase PCR y of microbial indicators by standard methods in the canals of the Florida Keys. Appl. Environ. Microbiol. 65: HARWOOD V, LEVINE A, SCOTT T, CHIVUKULA V, LUKASIK J, FARRAH S, ROSE J (2005) Validity of the Indicator Organism Paradigm for Pathogen Reduction in Reclaimed Water and Public Health Protection. Appl. Env. Microbiol. 71: HOT D, LEGEAY O, JACQUES J, GANTZER C, CAUDELIER Y, GUYARD K, LANGE M, ANDRE H (2003) Detection of somatic phages, infectious enteroviruses and enterovirus genomes as indicators of human enteric viral pollution in surface water. Wat Res. 37: HUANG P, LABORDE D, LAND V, MATSON D, SMITH A, JIANG X (2000) Concentration and detection of caliciviruses in water samples by reverse transcription PCR. Appl. Environ. Microbiol. 66:

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