Práctica Nº 2 Pruebas para determinación del riesgo de caries dental

Transcripción

1 Universidad de Los Andes Facultad de Odontología Microbiología Postgrado en Rehabilitación Bucal 2011 Práctica Nº 2 Pruebas para determinación del riesgo de caries dental Profesores: Lic. Leonidas E. Urdaneta P. M.Sc. en Microbiología Clínica Profesor Agregado Introducción La caries dental es una de las enfermedades infecciosas con mayor prevalencia mundial, siendo los países en vía de desarrollo los que se ven más afectados por este fenómeno. El tratamiento de la caries dental hace de esta enfermedad una de las más costosas, motivo por el cual el mayor reto se ha establecido en lograr una adecuada prevención que abarate los costos de control y evite las pérdidas posteriores de tiempo y productividad de los pacientes. Por otra parte, a pesar que el diagnóstico de la caries dental, como entidad clínica establecida, depende más de una adecuada evaluación clínica, se han ideado diversidad de pruebas microbiológicas con la finalidad de favorecer y simplificar la determinación del riesgo de aparición de esta patología, que es realmente el punto de ataque más importante. Entre esas pruebas podemos mencionar el Test de Snyder y el Test de Alban, basados en la determinación de la capacidad acidogénica de las bacterias presentes en el medio bucal de los individuos. Cada una de estas pruebas posee en su composición fuentes de carbohidratos e indicadores de ph que favorecen tal tarea. De las dos, el Test de Snyder tuvo mayor aplicabilidad y aceptabilidad durante mucho tiempo, pero en la actualidad no es una prueba determinante por lo cual ha sido dejada en el olvido.

2 La creación de nuevos medios de cultivo mucho más selectivos y diferenciales para la flora bacteriana cariogénica de cavidad bucal ha conllevado a extrapolar la determinación de riesgo de caries a otro tipo de pruebas, también sencillas pero más específicas, como lo son la cuantificación de unidades formadoras de colonia por mililitro de saliva, de bacterias tales como Streptococcus mutans y Lactobacillus acidophilus. El conocimiento de los fundamentos y procedimientos para realizar estas pruebas garantiza al laboratorio microbiológico y al odontólogo un medio simple y apropiado para predecir el riesgo bacteriológico de padecer caries dental, siempre y cuando se correlacionen, de manera adecuada, los resultados obtenidos con otros factores participantes en la aparición de este tipo de lesiones en el esmalte dentario, es decir todos aquellos factores indicados en la tríada modificada de Keyes (Fejerskov). Objetivos: Describir una de las pruebas más utilizadas para evaluar el riesgo de caries dental. Aplicar la metodología de semicuantificación de colonias de Streptococcus mutans para la evaluación del riesgo de caries dental. Interpretar los resultados obtenidos en la prueba. PRUEBA Nº 1: SEMICUANTIFICACIÓN DE COLONIAS DE Streptococcus mutans Fundamento de la prueba: Streptococcus mutans es una bacteria relativamente exigente que necesita de condiciones adecuadas para su crecimiento y desarrollo, el medio Mitis Salivarius con Bacitracina y Sacarosa además de brindar los nutrientes requeridos, es un medio selectivo diferencial que dificultará el crecimiento de otras bacterias no mutans por la alta concentración de sacarosa y de bacitracina. Además las colonias de Streptococcus mutans son fácilmente reconocibles por ser desprendibles, brillantes y tomar el color azul del medio. Medio de cultivo: Agar Mitis Salivarius con Bacitracina y Sacarosa

3 Composición en gramos por Litro de medio preparado: Digerido pancreático de caseína Peptona de proteosa Nº 3 Peptona de proteosa Dextrosa Sacarosa Fosfato dipotásico Azul de tripano Violeta cristal Agar 6,0 g 9,0 g 5,0 g 1,0 g 50,0 g 4,0 g 0,075 g 0,0008 g 15,0 g Además de los componentes señalados, se le agrega como complemento: Bacitracina Sacarosa 0,2 U/ml 20 g ph final: 4.8 ± 0.2 Muestra: Saliva Procedimiento: - Recolectar la muestra de saliva en envases estériles con tapa de rosca para lo cual se le dará al paciente el recipiente y un tiempo de 5 minutos para recolectar toda la saliva que produzca en condiciones basales. - Con el asa en aro calibrada de 5 µl, colocar una muestra de saliva en el centro del medio de cultivo y diseminarla haciendo uso de la técnica de semicuantificación de colonias. Dicha técnica explica que se traza una línea desde el centro a la periferia regresando para atravesar el diámetro de la placa de Petri para luego hacer un estriado compacto y parejo sin levantar el asa y de extremo a extremo de la placa de petri sobre la superficie del medio de cultivo, cubriendo la misma. Se levanta el asa y posteriormente se procede a girar la placa 90º y a realizar otro estriado en ángulo recto con respecto al inicial (figura 1). - Incubar horas a 35 ± 1 ºC, con atmósfera de 5% de CO 2 (microaerofilia) - Cuantificar visualmente el número de colonias haciendo uso de la cuadrícula anexa y realizar los cálculos respectivos para conocer el número de UFC/ml de saliva. - Comparar los resultados obtenidos con la tabla de riesgo anexa.

4 Figura 1. Esquema de la técnica de cultivo para semicuantificacion de colonias: Paso 1 Paso 2 Paso 3 Paso 4 Paso 5 Interpretación de resultados: De acuerdo a la tabla y a los factores predisponentes asociados. Se debe recordar que un (1) mililitro (ml) corresponde a mil (1000) microlitros (µl). Los cálculos para la interpretación se realizan con una regla de tres simple. Control de calidad: Control de viabilidad para el crecimiento de S. mutans en el medio especificado y control de esterilidad del medio preparado previo al desarrollo de la prueba Limitaciones del procedimiento: - Método sujeto a capacidad visual y concentración del operador. - La presencia de altas cuentas bacterianas no es un criterio único y suficiente para garantizar el desarrollo de caries dental. Tabla de Resultados Recuento de S. mutans en saliva UFC/mL Riesgo Cariescreen Dentocult SM Bajo < < Medio Alto > > Fuente: Negroni, 1999

5 Cuadrícula