Procesado de muestras en el laboratorio de la clínica (I)

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1 12.prevención de la salud Procesado de muestras en el laboratorio de la clínica (I) A lo largo de esta primera parte veremos como realizar un manejo correcto de las muestras de sangre, orina y líquidos orgánicos. Dejamos la citología para nuestro próximo número.

2 13 La fiabilidad de un análisis y su interpretación dependen en gran medida de la calidad de la muestra que se analiza o que se envía al laboratorio. El manejo adecuado de las muestras desde que se obtienen hasta que El EDTA es el anticoagulante de elección para hacer el hemograma y el frotis sanguíneo se procesan es muy importante para poder realizar un análisis correcto y no tener resultados erróneos. Para poder realizarlo la sangre tiene que conservar sus características Repasaremos algunas normas de manejo de muestras que son bastan- quida. físicas y químicas, es decir no puede coagularse, debe permanecer lítes generales y que nos pueden servir tanto si los análisis se hacen en la clínica como si se envían fuera, a laboratorios externos. La muestra que necesitamos es sangre entera recogida en tubos con anticoagulante EDTA ya que es el anticoagulante que mejor conserva la morfología de las células sanguíneas. Análisis de sangre La primera regla para poder realizar correctamente el hemograma es Análisis hematológico: hemograma que la sangre que vamos a echar al tubo con anticoagulante EDTA no puede tener ningún coágulo. El hemograma nos proporciona el recuento de glóbulos rojos, blancos y plaquetas. La segunda regla a tener en cuenta es que es muy importante ajustar la cantidad de sangre que se echa al anticoagulante que hay en el tubo (los tubos vienen ya preparados con el anticoagulante). Normalmente los tubos vienen con una línea que indica la cantidad de sangre que hay que adicionar. Es fundamental respetar la recomendación ya que un defecto o exceso de sangre según la proporción de anticoagulante del tubo va a producir alteraciones hematológicas.

3 14 Si hay demasiada sangre y sobrepasa el nivel indicado en el tubo, la Lo dejamos secar al aire, y luego lo fijamos introduciéndolo en un po- muestra se coagulará. La muestra no será apta para realizar el análisis cillo que contenga metanol y después se tiñe. El frotis se examina con hematológico. un microscopio, se cuentan los distintos tipos de glóbulos blancos y se examinan las células. Al observar esta extensión de sangre se buscan Si hay poca sangre y no llega al nivel indicado se producirán falsos valo- también posibles parásitos sanguíneos que pudieran aparecer. res del hematocrito y alteraciones de la morfología de las células. Los frotis sanguíneos también deberían ser preparados inmediatamente después de haber obtenido la muestra o como máximo transcurridas 2 La cantidad de sangre que hay que adiccionar a cada tubo viene marcada en el propio tubo. Es muy importante respetar esa recomendación para que no haya resultados erróneos horas tras la extracción de la sangre. Así se evitan los problemas derivados de que la sangre esté mucho tiempo en el anticoagulante como el deterioro de las células. El hemograma se puede realizar en muestras recogidas en tubos con otros anticoagulantes como la heparina, pero este anticoagulante conserva peor la morfología celular y favorece que las plaquetas formen grupos (agregación plaquetaria) lo cual altera su contaje. Cómo conservar la muestra de sangre si no se puede hacer el análisis inmediatamente? Si no hacemos el hemograma en dos o tres horas la sangre debe ser refrigerada a 4º C (debe estar en nevera). El recuento de glóbulos rojos, la hemoglobina y el hematocrito no sufren modificaciones si la sangre se refrigera durante unas 24 horas. Además de realizar los recuentos celulares, para completar un análisis hematológico debemos realizar también un frotis sanguíneo. Hay que extender una pequeña gota de sangre sobre una lámina de vidrio (portaobjetos) para formar una película delgada (frotis sanguíneo).

4 prevención de la salud.15 Si el frotis, una vez hecho, no puede teñirse inmediatamente, es importante por lo menos fijarlo sumergiéndolo en metanol durante dos minutos. Las células fijadas se conservan durante mucho tiempo. Análisis bioquímicos Recordemos que la sangre es un tejido líquido, formado por dos partes, las células y el líquido en el que sobrenadan, el plasma. El plasma se obtiene tras centrifugar la sangre introducida en un tubo con anticoagulante. Contiene factores de la coagulación (fibrinógeno). Si ponemos sangre en un tubo de ensayo sin anticoagulante y dejamos pasar unos minutos se forma un coágulo. Posteriormente, el coágulo se contrae y se separa de un líquido ambarino y transparente, el suero sanguíneo. El suero se obtiene dejando que se produzca la coagulación espontáneamente en un tubo, preferentemente de vidrio, en el que no se ha puesto anticoagulante y después centrifugando. El plasma se obtiene tras centrifugar la sangre que se ha introducido en un tubo con anticoagulante La mayoría de las pruebas bioquímicas que se hacen en el laboratorio de análisis clínicos pueden realizarse en muestras de suero. Muchas de estas determinaciones pueden realizase también en muestras de plasma teniendo en cuenta que el anticoagulante que usemos no interfiera en la prueba. Como hemos dicho para obtener suero para hacer las pruebas bioquímicas la muestra de sangre debe introducirse en un tubo seco sin anticoagulante. Las muestras así obtenidas se dejan a temperatura ambiente en posición vertical hasta que se coagulen y se inicie la retracción del coágulo (30-40 minutos después de obtener la muestra). Posteriormente se centrifugan los tubos a rpm (5-10 min) para separar el suero del coágulo. Esta separación conviene realizarla dentro de las 2 horas después de la toma de muestras para evitar el intercambio de compuestos entre las células y el suero y que la muestra se deteriore. Para obtener el plasma, las muestras se han de recoger en tubos que contengan heparina, preferentemente de litio, ya que este anticoagulante interfiere en muy pocas determinaciones bioquímicas. Igual que para hacer el hemograma es muy importante adicionar al tubo el volumen de sangre indicado en el mismo.

5 16 congelar el suero/plasma a -20º C: hay muy pocos compuestos que no son estables a esta temperatura durante largo tiempo Análisis de orina Las muestras de orina se han de recoger en recipientes limpios, secos y estériles. Es preciso conocer y apuntar la técnica de obtención (micción espontánea, sondaje uretral, cistocentesis) ya que los valores de referencia del sedimento difieren en los distintos tipos de técnicas. También es importante realizar el análisis cuanto antes, pues muchos componentes se alteran desde que la orina sale al exterior, especialmente bajo temperaturas de almacenamiento elevadas, ph alcalino y en las orinas muy diluidas. Las muestras de orina se conserva correctamente: 30 minutos a temperatura ambiente 12 horas a 4º C Líquidos orgánicos Cuando tenemos un líquido orgánico (pleural, peritoneal, pericárdico, El plasma se obtiene centrifugando la muestra a rpm sinovial, cefalorraquídeo) las muestras se han de recoger en distintos (5-10 min). Al igual que el suero, conviene separar el plasma de las célu- tubos dependiendo de las pruebas que queramos hacer: las dentro de las 2 horas después de la toma de muestras. Tubo con anticoagulante EDTA: Conservación suero/plasma Si las determinaciones no se realizan inmediatamente después de ha- Tubo sin anticoagulante o con anticoagulante heparina de litio: ber obtenido el suero o plasma: conservar el suero/plasma a 4º C: la mayoría de los compuestos se Tubo estéril sin anticoagulante: conservan bien a esta temperatura al menos durante 3 días. recuento de células nucleadas y estudio citológico parámetros bioquímicos cultivo microbiológico.

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