Conservar según el tipo de muestra hasta proceder a su envío al laboratorio.

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1 Lunes a viernes 9:30 20 h/ Sábado 9:00 13:30 h Tlf: Envío de muestras La hoja de petición del laboratorio debe de cumplimentarse indicando las pruebas que se solicitan, rellenando la información de la clínica veterinaria y del paciente, e indicando observaciones en el caso de que sea necesario (relacionadas con la toma de muestra, historia clínica del paciente, etc). Una vez realizada la toma de muestras necesaria para las pruebas solicitadas se identifica la muestra con el sistema de etiquetas proporcionado. De esta forma se debe de colocar una etiqueta a la hoja de petición como a los viales (tubos, frascos, etc) de muestras del paciente para que queden identificadas de forma correcta. Conservar según el tipo de muestra hasta proceder a su envío al laboratorio. Finalmente, para el envío de muestras, los viales con sus correspondientes hojas de petición identificados correctamente deben introducirse en la valija de transporte. La bolsa de gel refrigerante debe de estar en contacto con los viales de muestra quedando estos últimos bien cerrados y evitando que queden dispuestos boca abajo para evitar derramamientos y alteraciones de la muestra. Para la recogida llamar al laboratorio TLF: Toda la información al respecto sobre toma de muestras, hojas de petición etc. Pueden encontrarla en Los resultados se enviarán por , también pueden consultarlos en nuestra INTRANET para más información llamar a Tlf: / Transporte El transporte va incluido en los precios de cada prueba. Para aquellas clínicas que no hubiera delegación de MRW en su zona, para evitar los costes por kilometraje, se deberá de solicitar la recogida de la muestra antes de las 11:30 h de la mañana, de no ser así la recogida se efectuará al día siguiente. Para envío de muestras por transporte URGENTE llamar a laboratorio.

2 Toma de muestras Pruebas generales Suero Requerido para pruebas de Bioquímica, Inmunología, Toxicología e Inmunoensayos. Siempre es recomendable tomar las muestras en ayuno de al menos 8 horas. La toma de muestra se realiza por punción venosa y transfiriendo la sangre a una tubo que no lleve anticoagulante. Se debe de dejar a temperatura ambiente hasta que se dé la retracción del coágulo. A continuación se debe centrifugar a o r.p.m. durante min. Finalmente separar el suero, si no se usan tubos con gel, introduciéndolo en un tubo sin aditivos, donde se enviará la muestra al Laboratorio. La muestra se debe mantener refrigerada a 4Cº hasta que se proceda al envío al Laboratorio. Sangre total Es la muestra requerida para las pruebas hematológicas. El anticoagulante de elección para el recuento de células sanguíneas y su evaluación en mamíferos es el EDTA. Es el tubo de tapón color lila. La muestra se toma extrayendo sangre por punción venosa evitando en la mayor medida de lo posible las extracciones de venas de pequeño calibre para evitar traumatismos los cuales dan lugar a coagulación. Desechar la aguja de la jeringuilla y trasvasar la muestra al tubo con EDTA de modo que la sangre deslice por las paredes del tubo. La mínima cantidad deseable y válida viene determinada con una marca en el tubo. Tapar y homogeneizar suavemente moviendo el tubo suavemente con movimientos giratorios para evitar la hemólisis. Plasma Citrato Requerido para las pruebas de coagulación. Se obtiene a partir de la mezcla de sangre con citrato sódico, en la proporción que indica el tubo (1:9) de tapón azul. Se homogeniza la dilución y se centrifuga inmediatamente para obtener el plasma, siempre antes de los 30 minutos de la extracción a o r.p.m. durante min. Refrigerar en caso de envío rápido y congelar en caso de que le envío se vaya a realizar después de las 4 horas, hasta 15 días como máximo. Los tubos de tapón negro también contienen citrato sódico, y es requerido con muestra de sangre para la prueba de velocidad de sedimentación globular (V.S.G.), en este caso en proporción (1:4). No se centrifuga.

3 Plasma Heparina / Plasma EDTA Este tipo de muestra es requerida para algunas pruebas específicas. Se utiliza un tubo con el anticoagulante específico según la determinación. Una vez homogeneizada la muestra, se centrifuga y se separa el plasma. Normalmente debe congelarse rápidamente por la inestabilidad de las sustancias a analizar. Orina La muestra de orina es requerida tanto para su análisis, estudio de sedimento, o bien para realizar un cultivo microbiológico. Siempre debe ser recogida en un vial estéril. La cantidad mínima de orina adecuada para realizar un estudio de sedimento correcto es de 5 mililitros. Microbiología Orina (Urocultivo) Es importante que se indique la forma de obtención: micción, sondaje o punción. Bajo ningún concepto se debe recoger del suelo, ya que puede dar lugar a la interpretación errónea de los resultados. Es conveniente que las muestras tomadas por micción libre sean de la porción media de la micción, de modo que se deseche la primera parte de la orina y se recoja sólo el resto. Heces Análisis parasitológico: Es recomendable realizar la toma de muestra directamente del recto del animal a no ser que se observe en el acto de la defecación. Las heces se deben recoger en un frasco limpio y estéril para evitar alteración y contaminación de la muestra. Análisis bacteriológico (coprocultivo): El sistema de recogida es el mismo que en el caso anterior. Otro tipo de muestra para realizar coprocultivo es un hisopado rectal con medio de transporte Cary Blair, en el cual se conservan microorganismos anaerobios. Exudados y secreciones Este tipo de muestras deben tomarse con un hisopo estéril y remitir al Laboratorio refrigerados con medio de transporte Stuart o Amies para que la muestra no se deseque.

4 En algunos casos, dependiendo del origen de la muestra de exudado deben tenerse en cuenta diferentes consideraciones: - Exudado ocular: Es necesario realizar la toma de la muestra antes de la administración de analgésicos locales, colirios o antibióticos. Para la búsqueda de Chlamydia spp es conveniente verter el párpado y frotar la conjuntiva con un hisopo. - Secreción mamaria: Desechar las primeras gotas y tomar la muestra de la mitad de la secreción láctea para evitar contaminación. - Exudado faríngeo: tocar con la torunda cualquier zona con exudado, membranas o inflamación intentando evitar el contacto con zonas adyacentes, la lengua y mucosa oral. - Exudado Nasal: Introducir el hisopo lo más profundo posible. Si se realiza biopsia de masa intranasal enviar una porción para microbiología. Hemocultivo El cultivo de sangre se realiza cuando se sospecha de bacteriemia o septicemia. Se requiere una asepsia estricta para evitar resultados erróneos. El lugar de la punción debe ser afeitado y limpiado con jabón, desinfectar con alcohol etílico al 70% y posteriormente aplicar solución yodada. Dejar secar durante un minuto para que pueda ejercer su acción. Evitar el uso de catéteres para la extracción ya que puede darse contaminación. La muestra obtenida se inocula en frascos de hemocultivo. Retirar la cobertura más externa de las botellas (no desenroscar el tapón).desinfectar el tapón de goma con solución yodada y dejarlo secar al menos un minuto. Inocular la botella y mover los frascos para que la sangre y el medio se mezclen. Los frascos no se refrigeran.

5 El volumen de sangre dependerá de la talla del animal, por ello se debe de consultar con el laboratorio para recibir los frascos adecuados según la talla del animal, el volumen de sangre a extraer o si está en tratamiento antibiótico. Los diferentes frascos de los que se puede disponer son los siguientes: - Amarillo: hemocultivo pediátrico para animales pequeños con o sin tratamiento: 2-3 ml - Naranja: animales medianos o grandes con tratamiento: anaerobios: 5-10 ml - Verde: animales medianos o grandes con tratamiento: aerobios: 5-10 ml - Lila: animales medianos o grandes sin tratamiento: anaerobios: 5-10 ml - Azul: animales medianos o grandes sin tratamiento: aerobios: 5-10 ml Cultivo de muestras Anaerobias Las muestras habituales para cultivo anaerobio suelen ser líquidos articulares, líquido cefalorraquídeo (LCR), líquidos pleurales, líquidos peritoneales, pus o exudados procedentes de heridas profundas de lesiones o heridas quirúrgicas, abscesos, tejidos obtenidos por cirugía o por necropsia. Las muestras de líquido se obtienen con ayuda de una jeringa y aguja estériles, expulsando todo el aire contenido en ellas. Se debe el envío de agujas, y conveniente usar tapones especiales de jeringuillas. Para muestras de abscesos conviene tomarla de la cara interna de la cápsula intentando raspar en la mayor medida posible. En la obtención de muestras de lesiones o heridas cutáneas se debe aspirar con jeringa el pus presente debajo de un colgajo de piel o en cavidades profundas. En caso de que esto no sea posible, se puede utilizar un hisopo con especial cuidado de tomar la muestra de las áreas más profundas y evitando tocar las áreas adyacentes de la piel. En caso de muestras de tejidos de necropsias o de cirugía, conviene que sean de unos 2 cm de diámetro, y normalmente conservan un ambiente anaerobio en el centro de la pieza, por lo que pueden introducirse en un vial estéril y ser remitidas al laboratorio. Este tipo de muestras no se refrigeran, ya la absorción de oxigeno es mayor a menor temperatura. Conservar por tanto a temperatura ambiente. Lavados Traqueales o Broncoalveolares Enviar el material aspirado en un contenedor estéril mejor que con un hisopo. Lo ideal es realizar citología y microbiología al mismo tiempo.

6 Líquidos Corporales: Pleural, Ascítico, Articular, LCR Mantener las máximas medidas de asepsia y enviar al Laboratorio en un tubo estéril. Siempre será una muestra más representativa que en un hisopo. Cultivo Micológico Las muestras requeridas proceden de lesiones de piel, a partir de las cuales se pueden realizar un cultivo de hongos y observación directa. La muestra debe de tomarse exclusivamente a partir de los bordes de la lesión y deben de contener tanto pelos como escamas de piel. Estudio de Líquidos y Citologías Citologías Las muestras citológicas pueden obtenerse mediante un hisopo, por raspado o por aspiración mediante una aguja fina. En caso de que se obtengan con un hisopo, se debe rodar el hisopo sobre un portaobjetos limpio y seco, pero nunca se debe arrastrar. Si la toma de muestra se realiza mediante un raspado, se requiere una hoja de bisturí que se pasará sobre la zona de la lesión hacia arriba varias veces. El material obtenido sobre la hoja de bisturí se depositará sobre el portaobjetos. Las muestras obtenidas por punción se expulsan en el extremo del portaobjetos. Posteriormente se toma otro portaobjetos limpio y se coloca sobre su lado más estrecho encima del material extraído formando un ángulo de 45 grados. Realizar una extensión del material hacia delante a lo largo del portaobjetos hasta que la capa de células se vuelve más fina y se agota el material. Dejar secar la extensión durante 20 o 30 min. Fijar las extensiones con metanol (el primer líquido del Panóptico o Diff-Quick). El envío de los portaobjetos se realiza preferiblemente en contenedores especialmente diseñados para ello (plástico duro). Existen otro tipo de transportes pero si no van convenientemente protegidos existe un mayor riesgo de rotura. Líquidos Este tipo de muestras se emplean para recuentos celulares, citologías y cultivos microbiológicos. En caso de recuentos celulares, introducir el líquido en un tubo de EDTA. Para citologías y microbiología, seguir el protocolo que se indica en cada tipo de prueba.

7 Médula Ósea Para obtener extensiones de médula ósea se recomienda una técnica combinada, de modo que sea una parte por aplastamiento y otra por extensión. Para realizar un estudio completo se ruega que se envíe sangre completa con EDTA y a ser posible extensiones de sangre periférica en caso de que sea posible, en caso contrario se ruega que se remitan los resultados hematológicos obtenidos previos a la extracción de médula ósea. Necropsias En algunas ocasiones para realizar un examen completo post-mortem se requiere complementar con estudios histopatológicos y microbiológicos. El clínico realiza la necropsia enviando al laboratorio los órganos que considere más adecuados según lesiones macroscópicas y cuadro clínico. Las muestras obtenidas para examen bacteriológico deben mantenerse en condiciones de asepsia posibles, de modo que las piezas de los diferentes órganos se introducirán en envases estériles, separados y correctamente identificados. Para el examen anatomopatológico se pueden enviar los diferentes órganos en el mismo envase. Se recomienda que no sean piezas muy grandes ya que es más fácil que se produzca una incorrecta refrigeración y en lo que a respecta al estudio histopatológico, el formol no penetra profundamente en las porciones centrales. El tamaño de las piezas por lo tanto no debe superar los 2 cm de diámetro. Si son piezas mayores hacer varias porciones del tejido a estudiar.

8 Anatomía Patológica Requiere de muestras obtenidas a partir de biopsias. Las muestras de tejido obtenidas se introducen en formol (formaldehído) diluido al 10%, preferiblemente en agua destilada (una parte de formol y nueve de agua). La forma más pura de formaldehído líquido que se comercializa es de una concentración de 37-50%, a partir de la cual se realiza la dilución 1:10. El volumen de fijador debe ser unas 10 veces el volumen de muestra, por lo que conviene utilizar envases proporcionales al tamaño de muestra. Las biopsias endoscópicas deben viajar en contenedores de pequeño volumen, por ejemplo tubos eppendorfs, y deben de estar correctamente identificados. Las biopsias obtenidas a partir de tejido óseo se fijan por inmersión en formol como el resto de tejidos. Las biopsias de tejido musculares es conveniente fijarlas sobre un soporte físico (plástico, madera, porexpan) mediante agujas o hilo de sutura para evitar la hipercontracción de miofibras. Es importante no mezclar las piezas grandes de tejido con piezas pequeñas en un mismo contenedor ya que las pequeñas pueden pasar desapercibidas.

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