Mutaciones cromosómicas Poliploides aplicados a la MG

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1 INTRODUCCION AL MEJORAMIENTO GENETICO GUÍA DIDÁCTICAPARA CLASES TEÓRICAS (M.M. Mujica) Clase Mutaciones cromosómicas Poliploides aplicados a la MG En la clase anterior hemos iniciado el análisis de fuentes de variabilidad con algunas consideraciones sobre las denominadas mutaciones génicas, que implican cambios en la secuencia de bases del ADN, cuyo origen puede espontáneo o artificial. Las mutaciones tienen numerosas aplicaciones en la MG. Además de las mutaciones génicas también aportan a la variabilidad genética las denominadas mutaciones cromosómicas estructurales y numéricas. Estos cambios cromosómicos han generado la evolución de muchas especies vegetales. Los cambios cromosómicos estructurales implican cambios que afectan a sectores de cromosomas provocando alteraciones en su estructura. Estas generan cambios en el ordenamiento de los genes en el cromososma. Estos cambios pueden ser deficiencias o deleciones, duplicaciones, inversiones y translocaciones. Por otra parte, Los cambios cromosómicos numéricos suelen clasificarse en aquellos que afectan parcialmente a los genomas o series de cromosomas (aneuploides) y aquellos que afectan a genomas completos (euploides). De ellos, los más involucrados en la evolución de las plantas y el MG vegetal son los euploides. Revisión de algunos conceptos de citogenética: El número básico de cromosomas (x) es el n de cromosomas de 1 genoma o dotación básica de cromosomas. Los euploides son organismos que poseen múltiplos del n básico de cromosomas. Así, según el n de genomas presente en las células somáticas los organismos se clasifican en: diploides (2x); triploides (3x); tetraploides (4x); pentaploides (5x); hexaploides (6x) etc. Los organismos que presentan más de 2 genomas en sus células somáticas son poliploides Además, considerando el n cromosómico gamético (n) y el n cromosómico somático (2n), la fórmula cromosómica de un organismo diploide es (2n=2x; n=x) o de un tetraploide (2n=4x; n=2x). En la mayoría de las plantas y animales que se han estudiado, el n gamético y el nº básico coinciden (x=n) siendo por lo tanto (2n=2x) o sea, son diploides. En algunas plantas como el trigo pan (Triticum aestivum) es (2n=6x=42), por lo tanto es un hexaploide cuyo n básico es (x=7) y su n gamético será (n=3x=21) Monoploides. Son haploides de un diploide (2n=x). En la naturaleza se originan con muy baja frecuencia por alteraciones en la meiosis. Artificialmente se los puede obtener mediante cultivo de anteras. Son altamente infértiles debido a que la meiosis es totalmente irregular por la ausencia de cromosomas homólogos. Si se duplica su n cromosómico pasan a ser organismos diploides con una meiosis regular y totalmente fértiles. Ej mitosis de un monoploide normal y con duplicación cromosómica Fuente: Griffiths et al. 1

2 Aplicaciones principales de los monoploides en MG: -Obtención de líneas puras en 1 sola generación sin recurrir a la autofecundación. Si por ej.se realiza un cruzamiento entre parentales elegidos por sus caracteres complementarios de interés, se obtiene un híbrido que combina las mejores características de ambos parentales. Mediante la aplicación de la técnica de cultivo de anteras, que implica lograr la germinación de los granos de polen, se obtienen plantitas monoploides. Estos monoploides presentan diferentes combinaciones génicas que son producto de la segregación gamética (granos de polen) del híbrido. Se cultivan las plantas monoploides obtenidas y se identifican aquellas que presentan combinaciones génicas favorables. Como ya sabemos, los monoploides son estériles. Luego, se duplica el n cromosómico mediante la aplicación de colchicina y así se obtiene un diploide que constituye una línea pura perfecta (100 % de homocigosis), perfectamente fértil y en 1 sola generación. Recordemos que como planteamos en la clase 3, a partir de una F1 (híbrido/heterocigota) necesitamos al menos 4 generaciones de autofecundación (S4) para que la proporción de homocigotas supere el 90%. -También los monoploides son utilizados en los procesos de mutagénesis artificial para facilitar las aplicaciones de mutantes beneficiosos. Así, se obtienen monoploides de interés, se aislan y se elimina la pared celular de sus células, se tratan con un agente mutagénico, se siembran en un medio selectivo (ej. un herbicida). A partir de las células sobrevientes (que son las resistentes), se regeneran por cultivo in vitro plantas que son monoploides. Finalmente, se duplica el n cromosómico con colchicina y se obtiene una LP resistente al agente selector (herbicida) Haploides: son organismos cuyo n cromosómico somático coincide con el n cromosómico gamético (2n= n). Un haploide de un organismo diploide es un monoploide (tiene un solo genoma en sus células somáticas, 2n=n=x ), mientras que los haploides de los poliploides (2n=n) son los polihaploides. Los haploides pueden aparecer espontáneamente o se pueden producir artificialmente mediante la técnica in vitro cultivo de anteras. La duplicación cromosómica de los haploides origina doble haploides con aplicación en MG (ver más adelante el método de obtención de doble haploides. Autopoliploides: poliploides cuyos genomas tienen su origen en una misma especie Alopoliploides: poliploides cuyos genomas tienen su origen en distintas especies Triploides: generalmente son autopoliploides y se originan del cruzamiento entre individuos 2n=4x (tetraploide) y 2n=2x (diploide) de la misma especie. Gametas 2x y x se unen para dar individuos 3x (triploides). Los triploides presentan muy elevada esterilidad debido a anormalidades en el apareamiento y la disyunción de cromosomas homólogos durante la meiosis, lo cual produce una segregación gamética desequilibrada. La probabilidad de que un triploide forme gametas equilibradas o fértiles (2n o n) es < a medida que es > el n de cromosomas del genoma. Esta probabilidad se calcula como (1/2) x-1 siendo x el n de cromosomas del genoma. Una aplicación práctica de esta situación de alta esterilidad de los triploides es la producción de frutos sin semillas como en las sandías y los bananos. Por qué son estériles los triploides? El apareamiento de cromosomas homólogos en un triploide presenta dos posibilidades durante la 1ª división meiótica: trivalente o bivalente + univalente a nivel de cada cromosoma homólogo. Ambas generan una segregación cromosómica desequilibrada a nivel del genoma completo, originando gametas no viables. 2

3 Fuente: A.J.F. Griffiths et al. Como ejemplos de triploides cuya esterilidad presenta una aplicación práctica se pueden mencionar los plátanos y algunas variedades de sandías sin semillas. Autotetraploides: Se producen naturalmente por duplicación accidental (formación de gametas no reducidas) en un organismo diploide (2n=2x) o también pueden ser producidos artificialmente. Para la producción artificial de poliploides el agente químico más utilizado es la colchicina. Se aplica en dosis apropiadas, que deben ser ajustadas para c/especie, en las zonas meristemáticas (yemas o ápices de raíces). Este agente poliploidizante afecta la normal división mitótica de las células. Hay separación de cromátidas hermanas pero sin migración a los polos. Esto ocurre como consecuencia de que la colchicina produce un efecto inhibitorio de la formación o ensamblado de los microtúbulos de las fibras del huso o aparato mitótico. En ausencia del aparato mitótico ocurre duplicación cromosómica sin división celular y, como consecuencia, la célula madre queda con los cromosomas duplicados y pasa a ser tetraploide (2n=4x). A partir de este cambio en el n cromosómico esta célula tendrá sucesivas mitosis normales originando un tejido tetraploide del cual se podrá regenerar un individuo 2n=4x. La colchicina normalmente se aplica en tejidos meristemáticos como las yemas donde se podrán formar quimeras que constituyen un mosaico de tejidos diploides y tetraploides que originarán ramas 2x y 4x, respectivamente. Luego se aplican técnicas de multiplicación agámica a partir de las ramas 4x que por ej. se colocan en condiciones de enraizamiento para obtener varias repeticiones de la planta tetraploide buscada. También se podría multiplicar mediante cultivo in vitro. Comparativamente con los diploides los autopoliploides presentan mayor tamaño en sus órganos (flores, hojas, frutos) y células. Es característico que los estomas y granos de polen sean de mayor tamaño. Otra importante diferencia es que los autopoliploides son menos fértiles que los diploides Por qué los autopoliploides tienen la fertilidad muy reducida? 3

4 Posibilidades de apareamiento cromosómico durante la meiosis de un autotetraploide Fuente: A.J.F. Griffiths et al. Posibilidades de apareamiento cromosómico durante la meiosis de un autotetraploide: - Dos bivalentes: originan gametas funcionales - Un cuatrivalente: - Un univalente + un trivalente: originan gametas no funcionales Las gametas serán realmente funcionales cuando se formen dos bivalentes o cuatrivalentes en todo el genoma. Esto explica la baja fertilidad de los autotetraploides Un ejemplo de halopoliploide natural es el Triticum aestivum (trigo pan) El siguiente cuadro muestra un diagrama propuesto por Griffiths et all que intenta explicar el origen y evolución del Triticumaestivum. Fuente: A.J.F. Griffiths et al. 4

5 Otro ejemplo son distintas especies del género Brassica que se han originado en la evolución por este camino de la halopoliploidía natural. Fuente: A.J.F. Griffiths et al. Alopoliploidía artificial. El ejemplo del Triticale El Triticale es un cereal forrajero, primer alopoliploide artificial creado por el hombre, producto del cruzamiento artificial entre el trigo y el centeno. El Triticale combina el potencial de rendimiento y buena calidad del trigo con la tolerancia a enfermedades y rusticidad del centeno. N cromosómico y fórmulas genómicas para los triticales hexaploide y octoploide y sus especies parentales Especies Núm. Cromosómico (2n) Genomas Nombres comunes Secale cereale 14 RR Centeno Triticum turgidum 28 AABB Trigo duro Triticum aestivum 42 AABBDD Trigo pan Triticocereale (hexaploide) 42 AABBRR Triticale Triticocereale (octoploide) 56 AABBDDRR Triticale Fuente: J.M. Poehlman y D.A.Sleper 5

6 Triticale hexaploide Parentales: Triticum turgidum X Secale cereale (trigo duro) (centeno) Fórm genómica: AABB RR Fórm. Cromos.: 2n = 4x = 28 2n = 2x = 14 F1 ABR 2n = 3x = 21 haploide estéril duplicacióncromosóm (colchicina) Triticocereale triticalehexaploide (fértil) AABBRR 2n = 6x = 42 Triticale octoploide Parentales: Triticum aestivum X Secale cereale (trigo pan) (centeno) Fórm genómica: AABBDD RR Fórm. Cromos.: 2n = 6x = 42 2n = 2x = 14 F1 ABDR 2n = 4x = 28 Híbrido estéril duplicacióncromosóm (colchicina) Triticocereale triticaleoctoploide(fértil) AABBDDRR 2n = 8x = 56 Algunas técnicas biotecnológicas aplicadas a la poliploidía inducida Las mismas ya fueron estudiadas en Genética y Fisiología Vegetal. Se destacan: Rescate de embriones, cultivo in vitro y duplicación cromosómica Germinación de polen, cultivo in vitro, obtención de monoploides, duplicación cromosómica, obtención de diploides LP Hibridación somática o hibridación de protoplastos Rescate de embriones: si el embrión no desarrolla normalmente en la planta se lo extrae tempranamente, se lo cultiva in vitro hasta completar la madurez y luego se lo multiplica in vitro. Para esto se aplican protocolos de laboratorio especialmente diseñados y ajustados para cada especie. 6

7 Multiplicación in vitro del embrión desarrollado normalmente en la planta: Si el embrión desarrolla normalmente en la planta pero la semilla híbrida no germina, se puede utilizar el cultivo de tejidos y la duplicación cromosómica con colchicina para obtener una planta híbrida fértil. Por ej.: Fuente: A.J.F. Griffiths et al. Obtención de una planta monoploide mediante cultivo de anteras Fuente: A.J.F. Griffiths et al. Hibridación somática o hibridación de protoplastos La hibridación de células somáticas implica la fusión fusión de protoplastos vegetales (células desprovistas de paredes celulares) de diferentes especies y la posterior regeneración de plantas híbridas a partir de los protoplastos fusionados. El uso de este método en MG está recomendado para obtener híbridos en los casos en que no es posible obtener semillas por hibridación sexual. 7

8 Fuente: J.M. Poehlman y D.A.Sleper A: células de las especies parentales; B: protoplastos (eliminación de pared celular); C: suspensión en PEG; D: protoplastos híbridos; E: planta híbrida regenerada a partir de protoplastos híbridos. Bibliografía 1- Cubero, J.I Introducción a la mejora genética vegetal. 2da edición. Ed. Ediciones Mundi-Prensa. Madrid, España. ISBN pp. 2- Griffiths A. J. F., J. H. Miller, D.T. Suzuki, R.C. Lewontin y W.M. Gelbart Genética. 5ta edición. Ed. McGraw-Hill / Interamericana de España, S.A.. Madrid, España. ISBN Harlan J. R Crops & Man. 2a edición. Ed. American Society of Agronomy, Inc., Crop Science Society of America, Inc.. Wisconsin, USA. ISBN pp. 4- Lacadena J.R Genética General. ConceptosFundamentales. Madrid. Editorial Síntesis S.A. ISBN: pp. 5- Sleper, D.A. y J.M. Pohelman Breeding field crops. 5ta edición. Ed. Blackwell Publishing. Iowa, USA. ISBN pp. 6- Strickberger, M.W Evolución. Ediciones Omega S.A. ISBN: pp. 8

9 CENTROS DE ORIGEN DE LAS PLANTAS CULTIVADAS Centro de origen de una planta cultivada: es el área geográfica donde ésta se originó por domesticación. Centro de diversidad: es el lugar donde se encuentra la más extensa variabilidad de las especies cultivadas y de las especies relacionadas (parientes silvestres) Vavilov (1951), luego de minuciosos estudios in situ propone 8 centros primarios de origen para las plantas cultivadas. Más tarde reconoce en 2 de ellos la existencia de centros 2 os. Para Vavilov los centros de origen coinciden con los centros de diversidad Fuente: J.M. Poehlman y D.A.Sleper Centros de origen y diversidad de las principales especies cultivadas identificados por NicolaiVavilov 1.- China: sésamo, soja, etc. 2.- India: arroz, caña de azúcar 2a.- Indomalasia: banana, coco 3.- Asia Central: lino, centeno, trigo pan, etc. 4.- Cercano oriente: alfalfa, cebada, etc. 5.- Mediterráneo: avena, trigo duro, etc. 6.- Etiopía: sorgo, lenteja 7.- Sur de Méjico y América Central: maíz, poroto 8.- América del Sur (Perú, Bolivia, Ecuador): poroto de lima, tabaco, tomate 8a.- Chiloé: papa 8b.- Brasilero-paraguayo: cacao, mandioca Posteriormente, Harlan discute el concepto de Vavilov y plantea que los centros de origen no siempre coinciden con las áreas de más amplia diversidad. Harlan argumenta que el origen de las plantas cultivadas en muchos casos puede haber sido difuso en tiempo y espacio. Plantea una clasificación simplificada en: 3 centros y 3 no centros (no centro = acentro = área difusa) 9

10 Centro: la domesticación ocurrió en áreas más restringidas ligada a poblaciones humanas concentradas y perdurables imperios agrícolas ej Egipto/Valle de Méjico Acentro: la domesticación ocurrió en áreas mucho más amplias y difusas (poblaciones menos densas y/o perdurables, ej sabanas africanas) Estos conocimientos sobre la ubicación de los centros de origen y diversidad son fundamentales para la MG actual y futura. Estas regiones en el planeta son fuentes naturales de variabilidad por excelencia en las que se pueden encontrar genotipos portadores de genes de utilidad (por ej para resistencia genética a plagas, enfermedades y estreses abióticos). Afortunadamente, gracias a la toma de conciencia post Revolución Verde, existen bancos de germoplasma organizados en una red internacional que asegura la concientización e inversión para garantizar la conservación y disponibilidad de recursos genéticos. Es importante destacar que la variabilidad genética presente en las regiones asociadas a los centros de origen debe continuar siendo explorada, estudiada y protegida in situ y ex situ. CONSERVACION DE RECURSOS GENETICOS (RG) (complementario de la bibliografía específica analizada en la actividad práctica de la clase 4) RG: material genético de valor real o potencial. Unidades de variabilidad heredable de valor presente o potencial (futuro). Los RG se componen de: -Variedades cultivadas actuales y variedades recién obtenidas -Variedades en desuso -Variedades primitivas (razas locales = landraces) -Especies silvestres y malezas, parientes cercanos de las cultivadas -Estirpes genéticas especiales (líneas utilizadas por los mejoradores) Tipos de colecciones de RG según su finalidad a) Colecciones de base: conservación de largo plazo (cerradas al intercambio) b) Colecciones activas: destinadas al intercambio c) Colecciones núcleo: (core collections) cantidad mínima de muestras que representan toda la variabilidad genética de la colección (aplicación de marcadores moleculares para detectar similitudes y diferencias genéticas entre accesiones o entradas ) d) Colecciones de trabajo: pequeñas colecciones formadas y mantenidas por los fitomejoradores Red mundial para la conservación de recursos genéticos El CGIAI (Grupo Consultivo de Investigación Agrícola Internacional), sostiene 15 centros independientes de investigación agrícola internacional. Son llamados "Los Centros para la Cosecha del Futuro". Algunos de los principales centros internacionales: -WARDA: Centro del Arroz de Africa (Bouaké) -CIAT: Centro Internacional de Agricultura Tropical (Cali, Colombia) -CIMMYT: Centro Internacional de Mejoramiento de Maíz y Trigo (Batán, Méjico) Mejoramiento de maíz, trigo, cebada y triticale. -CIP: Centro Internacional de la Papa (Lima, Perú). Mejoramiento de papa y batata. 10

11 -ICARDA: Centro Internacional para la Investigación Agrícola en Zonas Aridas (Alepo, Rep. Arabe Siria) -ICRISAT: Instituto de Investigación Agrícola para Zonas Semi-Aridas (Patancheru, India) -IRRI: International Rice Research Institute (Los Baños, Filipinas). Instituto Internacional de Investigación en Arroz. Mejoramiento del arroz. -IPGRI: International Plant Genetic Resource Institute (Roma, Italia) El IPGRI (Instituto Internacional de Recursos Fitogenéticos), realiza, fomenta y apoya la investigación y otras actividades relativas a la conservación y al uso de la agrobiodiversidad Red nacional para la conservación de recursos genéticos Está conformada por Estaciones Experimentales del INTA Banco Base: Castelar Bancos Activos: -Bs As (Pergamino, Balcarce) -Córdoba (Manfredi, Marcos Juarez) -Misiones (Cerro Azul) -Chaco (Roque Saenz Peña) -Salta (Salta) -Mendoza (La Consulta) -La Pampa (Anguil) -Río Negro (Alto Valle) 11

12 Recursos genéticos y seguridad alimentaria Desde el comienzo de la agricultura (hace años) se han utilizado miles de especies vegetales para producir alimentos, forrajes y otros productos. Actualmente sólo alrededor de 150 cultivos abastecen la alimentación humana del planeta. Sólo 12 aportan el 80% de la E alimentaria. El 60% corresponde al arroz, trigo, maíz y papas.(ver clase 1) suelo + agua + recursos genéticos = base de la agricultura y ganadería = seguridad alimentaria mundial Todos los países aunque conserven recursos genéticos propios ex situ o in situ necesitan acceder a recursos externos en alguna medida, lo que es un derecho garantizado internacionalmente Bibliografía 1-Cubero, J.I Introducción a la mejora genética vegetal. 2da edición. Ed. Ediciones Mundi-Prensa. Madrid, España. ISBN pp. 2-FAO Conservación de la biodiversidad: Colecciones in situ y ex situ; el GCIAI. 12

13 3- FAO Los recursos zoogenéticos una red de seguridad para el futuro FAO Biodiversidad para la seguridad alimentaria y la nutrición Harlan J. R Crops & Man. 2a edición. Ed. American Society of Agronomy, Inc., Crop Science Society of America, Inc.. Wisconsin, USA. ISBN pp. 6-Sleper, D.A. y J.M. Pohelman Breeding field crops. 5ta edición.ed. Blackwell Publishing. Iowa, USA. ISBN pp. METODOS BASICOS DE MEJORAMIENTO GENETICO DE PLANTAS Sistemas de reproducción (tema ya tratado en Botánica y Fisiología Vegetal, ver bibliografía). El sistema genético (sistema de reproducción) de las plantas es considerado un carácter adaptativo por excelencia y condiciona fuertemente los procedimientos de MG Triángulo de Fixel G D E F A B C A: alogamia absoluta C: autogamia absoluta G: apomixis obligatoria B: parcialmente autógamas y parcialmente alógamas D, E y F: apomícticas facultativas Variedad o cultivar: Es un grupo de plantas genéticamente similar que puede ser identificado y distinguido de otros grupos dentro de una misma especie por caracteres heredables morfológicos, fisiológicos, químicos y agronómicos estables. En el sistema de clasificación de plantas cada grupo taxonómico es dividido en grupos por similitudes intra-grupo y diferencias inter-grupo Familias / Géneros / Especies / Variedades o cultivares Así por ej en el caso de la soja tenemos: Familia: Leguminosas; género: Glysine; especie: max; variedades: Dorada 48 (criadero Novartis), A5409 (Nidera) ACA 560 (ACA), ACA 530 GR (ACA), A5777 RG (Nidera), etc. 13

14 El cultivar (cv) es equivalente a una unidad taxonómica desde el punto de vista agronómico La figura siguiente muestra distintas variedades modernas de soja fácilmente diferenciadas por caracteres morfológicos como: tipo de crecimiento (determinado/indeterminado), arquitectura de planta (ramificaciones), etc. Fuente: INTA Cerro Azul Los cultivares deben tener 2 atributos fundamentales: IDENTIDAD (caracteres morfológicos, fisiológicos, etc. diferenciales y estables = alta heredabilidad) Identificación por caracterización molecular REPRODUCIBILIDAD o REPETIBILIDAD en distintas generaciones y ambientes Introducciones (variedades introducidas) Se refiere a la acción de ingresar/importar semillas de variedades obtenidas en el extranjero. Ocurrió desde las 1as corrientes inmigratorias con nuestros principales cultivos. Es una vía para complementar y contribuir a la MG local. Si la importación de variedades está sobreestimulada (Ej. década del 90) es perjudicial para el desarrollo de la MG nacional con implicancias negativas en el autoabastecimiento (autonomía, desarrollo local) y potencial de exportación de tecnología genética Posibles destinos de las introducciones Evaluación y multiplicación de semilla de las de mejor comportamiento FV para futuros programas de MG 14

15 Selección dentro de variedades-población Hibridación con variedades locales adaptadas Pautas y consideraciones generales pertinentes a la MG -Disponer de una fuente de variabilidad (FV) integrada por recursos genéticos (RG): solicitud de muestras a bancos de germoplasma, colecta en PN (domesticación), introducción de variedades, variedades antigüas, etc -Problema fundamental de la mejora: identificar al fenotipo portador del mejor genotipo (F = G + E). Herramientas para mejorar la eficiencia de la selección: selección estratificada, pruebas de descendencia (análisis de descendencias de autofecundación y cruzamiento de prueba) y marc. moleculares -Conocimiento amplio de la especie a mejorar -Conocimiento del sistema de reproducción -Selección en el ambiente de uso o similar -Minimizar efectos de la heterogeneidad del suelo (selec. Estratificada) -Si son forzadas la autogamia o la alogamiaal final siempre se recupera el sistema natural de reproducción -Conocimiento de la h 2, en el lugar de la selección, de los caracteres agronómicos de interés -Inferencias sobre el genotipo mediante herramientas para mejorar la eficiencia de la selección: -pruebas de descendencia -marcadores moleculares (la mejor alternativa aunque no siempre disponible por razones económicas o falta de protocolo ajustado para la especie) -Tipos de selección presentes en los distintos procedimientos básicos de mejora: -Selección natural en grado cómo actúa? (revisar dinámica de genética de poblaciones) -Selección artificial (+) implica la identificación y aislamiento de genotipos superiores -Selección artificial (- ) implica la eliminación de genotipos indeseables -Selección automática, especialmente en la domesticación de nuevas especies. No es selección artificial ni natural. Revisar concepto en Guía de teóricos, Clase 1. -ECR en distintos ambientes (localidades y años) -Inscripción en el Registro de Cultivares de INASE (Instituto Nacional de Semillas) -Protección de propiedad intelectual (opcional) y en el Registro de la Propiedad de Cultivares (obligatorio) también se realiza en INASE -Producción de semilla comercial 15

16 -Promoción y difusión del nuevo cultivar -Mantenimiento de la pureza varietal Bibliografía 1- Allard, R. W Principles of Plant Breeding. 2da edición. Ed. John Wiley & Sons, Inc.. New York, USA. ISBN pp 2- Cubero, J.I Introducción a la mejora genética vegetal. 2da edición. Ed. Ediciones Mundi-Prensa. Madrid, España. ISBN pp. 3- Mayo, O The theory of plant breeding. 2da edición. Ed. Clarendon Press. Oxford, New Cork, USA. ISBN pp. 4- Sanchez-Monge E Fitogenética. Instituto Nacional de Investigaciones Agrarias. Madrid. España. ISBN X. 456 pp. 5- Sleper, D.A. y J.M. Pohelman Breeding field crops. 5ta edición. Ed. Blackwell Publishing. Iowa, USA. ISBN pp. 16