Fitopatología. Nematodos fitopatógenos

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1 Universidad de Buenos Aires Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental, Carrera de Licenciatura en Ciencias Biológicas Fitopatología Nematodos fitopatógenos (vigésima edición) 2017 Daniel E Nahabedian DCB denaha@bgfcenubaar MATERIAL DE DOCENCIA SÓLO USO INTERNO 01 Nematodos fitopatógenos Introducción 02 Hasta aproximadamente mediados del siglo pasado (siglo XX), el estudio de los nematodos no constituyen una materia coherente, debido a que su estudio estaba condicionado al hábitat Así encontramos estudios sobre especies edáficas, marinas, zooparásitas, fitoparásitas, por separado Estos animales eran estudiados en forma separada por cada grupo de investigadores Alrededor de 1950 Homogeneidad morfológica Varios autores reúnen los conocimientos básicos y se comienza el estudio racional de estos animales En la segunda mitad del siglo XX se descubren la mayoría de las especies fitoparásitas Tres acontecimientos acrecentaron la necesidad de estudio sobre nematodos 1) Especialización regional de cultivo de plantas (monocultivos) > esto hizo más evidente el ataque de nematodos 2) Selección y mejoramiento de variedades de plantas más productivas > pero menos resistentes a nematodos 3) La circulación de plantas y productos vegetales sin control > dispersión de distintas especies de nematodos Consecuencias: Las especies de nematodos se volvieron cosmopolitas y muy bien adaptadas a cultivos específicos Morfología básica: Repaso: Animales bilaterales, triploblásticos, 03 Phylum: Nematoda (Gusanos cilíndricos) Recto Ano Intestino Son gusanos filiformes, no segmentados, de sección cilíndrica, que miden entre 0,3 y 4 milímetros de largo por 0,01 por 0,5 milímetros de ancho Hembra Sistema excretor glandular con canales de drenaje laterales Vulva Macho Cloaca Sistema reproductor Intestino protostomiados, pseudocelomados Cavidad bucal Faringe muscular Glándulas excretoras Glándulas faríngeas Boca Anillo nervioso circumentérico Con cuatro cordones o pliegues epidérmicos Morfología básica: 04 Corte transversal de Anatomía Cutícula gruesa con papilas sensitivas y órganos quimiorreceptores Sistema nervioso: anillo nervioso circumentérico y cordones nerviosos dorsal y ventral, por dentro de pliegues longitudinales epidérmicos H E 60X Epidermis Peculiaridad anatómica: las células musculares (sólo longitudinales), poseen proyecciones citoplasmáticas hacia los cordones nerviosos longitudinales, ventral y dorsal Pseudoceloma Intestino Sistema excretor glandular con canales de drenaje laterales, por dentro de pliegues longitudinales epidérmicos

2 Sistema reproductor: Recto Cloaca Gobernáculo 05 Adaptaciones I Qué hace que un nematodo sea fitoparásito? 06 Testículo (1) Espermatogonias Sistema reproductor macho Macho con dos orificios: boca y cloaca Intestino Oviducto Músculo retractor Intestino Vesícula seminal Espermiducto glandular Huevos (cigota encapsulada) Ovarios (2) Gonoporo femenino (vulva) Oogonias Útero Espermiducto muscular Espículas (2) Estructuras sensoriales Sistema reproductor hembra Puede haber uno o generalmente dos ovarios Receptáculo seminal Hembra con tres orificios: boca, vulva y ano Nematodos parásitos de vertebrados 8360 Nematodos parásitos de invertebrados 3500 Porcentajes de especies Nematodos parásitos de plantas 4110 Nematodos marinos 4070 Nematodos que pueden aparecer en la tierra (fitoparásitos + los de vida libre + los zooparásitos) Adaptación El grupo es de abolengo marino Las adaptaciones se pueden enmarcar en dos características: Nematodos de vida libre (tierra agua) Pueden llegar 6610 hasta un 40% A) Modificación del sistema de obtención del alimento B) Adaptaciones en el ciclo de vida Adaptaciones II Cómo obtienen el alimento? 07 A) Modificación del sistema de obtención del alimento A1) Estilete bucal (dos sistemas) A1a) Tubo hueco Sólo tubo hueco Clase Secernentea Orden TYLENCHIDA Musculatura protractora A1b) Aguja Sólo tipo aguja Los estiletes sólo se encuentran en los nematodos fitoparásitos Musculatura protractora Clase Adenophorea, Orden DORYLAIMIDA Adaptaciones III 08 A) Modificación del sistema de obtención del alimento A2) Faringe (esófago) A2a) Musculatura Faríngea A2b) Glándulas faríngeas Faringe Estilete Bulbo faríngeo Procorpus medio Estilete Metacorpus (bulbo medio) Anillo nervioso circumesofágico Doble bomba Istmo Glándulas faríngeas (una dorsal y dos ventrolaterales), ataca a la cebolla, y produce una licuefacción de los tejidos Intestino Secreción salivar : posee auxinas, enzimas digestivas (celulasa, quitinasa, Postcorpus invertasa) y enzima proteolíticas (protopectinasa) La faringe como las Existe una muy estrecha vinculación glándulas faríngeas entre la composición salivar y la no son considerados relación planta - huésped como elementos diferenciadores No sólo los fitoparásitos para la taxonomía presentan glándulas faríngeas

3 Adaptaciones IV Cómo viven? 09 B) Adaptaciones en el ciclo de vida B1) Modificación del ciclo de vida: B1a) Alargamiento: Ciclo de vida normal general: Huevo Huevo embrionado Eclosión 1 juvenil Objetivo: Conservación y sobrevida 1 Muda 2 Muda 2 juvenil 3 Muda 3 juvenil Reproducción sexual Adulto 4 Muda 4 juvenil El ciclo evolutivo de especies de vida libre esta entre: uno corto de aproximadamente 1 mes de duración, hasta largo de 3 o 4 meses de duración En las especies parásitas de plantas se encuentran ciclos de vida cercanos al año de duración, coincidentes con el ciclo anual de los hospedadores B1b) Aumento de la producción de huevos La fecundidad de los nematodos fitoparásitos es generalmente superior a la fecundidad de las formas de vida libres, pero inferior a la fecundidad de las especies zooparásitas Adaptaciones VII Quién más se enquista? 11 B3: Enquistamiento de la hembra Protección de huevos Hembra madura Pasa de una forma filiforme a una forma globosa Hembra grávida 6 años, con una apreciable sobrevida Retención de huevos por la hembra Se produce por una oxidación de los polifenoles de la cutícula Hembra madura Quiste Hembra grávida Adaptaciones V Cómo se defienden? 10 La conservación de la especie durante la ausencia de la planta - vector esta favorecida por adaptaciones particulares B2) Enquistamiento larvario: En 1743 Turberville Needham ( ), descubre en granos de trigo, unos gusanos que llamó anguilas Primera cita de nematodos fitoparásitos En 1771, Baker, trabajando sobre los mismo granos de trigo, del herbario de Needham, encuentra los mismos animales descriptos y los llama 27 años después Se ha contado hasta 39 años en Sólo los juveniles son los que sobreviven Anhidrobiosis o Anabiosis Juvenil enquistado Muda anterior Explicación: Los juveniles quedan envueltos en la muda del estado anterior Adaptaciones VIII De qué otra forma 12 protegen a los huevos? B4: La protección de los huevos Los huevos pueden ser puestos, por la hembra, en un saco de protección, llamado matriz, saco o masa gelatinosa Está formada por la secreción de un mucoide, que lo secreta las glándulas rectales Se presenta en Aísla al embrión del medio en forma eficaz, lo protege de la desecación y hasta del sulfuro de carbono Matriz, saco o masa gelatinosa Saco de protección y en los tilénquidos nacóbidos Glándula rectal

4 Resumen: Adaptaciones 13 A) Modificación del sistema de obtención del alimento A1) Estilete bucal (dos sistemas) A1a) Tubo hueco A1b) Aguja Absorción de A2) Faringe (esófago) fluidos A2a) Musculatura faríngea (esofágica) A2b) Glándulas faríngeas (esofágicas) B) Adaptaciones en el ciclo de vida B1) Modificación del ciclo de vida B1a) Alargamiento B2) Protección B2a) Enquistamiento larvario B2b) Enquistamiento de la hembra B2c) La protección de los huevos Perforación de la pared celular Conservación y sobrevida B1b) Aumento de la producción de huevos Distribución: Es debida a la estructura y composición química del suelo, temperatura, humedad y ph Los fitoparásitos puede alcanzar 50% del total de nematodos del suelo Se encuentran en los primeros 15 centímetros de profundidad del suelo Decayendo el número cerca de la superficie y con la profundidad Generalmente, los que se alimentan de bacterias se presentan en gran número en los campos con estratos arbóreos, en los montones en descomposición (compost) y los que se alimentan de plantas se presentan generalmente en los prados y otros hábitat con vegetación densa Dependiendo de las condiciones ambientales, se puede encontrar entre 4 y 16 gramos de nematodo, por metro cuadrado de suelo; las cifras calculadas de nematodos, puede trepar hasta los 12 millones de individuos Los nematodos no pueden cambiar las propiedades físicas de los suelos como hacen las lombrices Acción: Importancia Ecológica: - Producción primaria - Descomposición primaria - Nivel de depredación 15 Destruyen una parte de la materia orgánica formada Consumen organismos muertos (aceleran procesos de degradación) Consumen bacterias y hongos degradadores (detienen los procesos de degradación) Bajan efectos de otras especies de metazoos Aspectos Ecológicos: Tres formas alimentación: 1) Saprófagos: Nutrición: 14 Nematodos que ingieren partículas de materia orgánica 2) Depredadores: Especies que se alimentan de bacteria, hongos y algas pequeñas (la mayoría de los nematodos del suelo) (Devoradores de microbios) y las que se alimentan de organismos relativamente grande como protozoos, nematodos, rotíferos, etc (Depredadores, propiamente dichos) 3) Fitoparásitos: Especies que necesitan alimento líquido, contenido celular o jugos vegetales obtenidos por perforación de las raíces o de las paredes celulares Desde el punto de vista del tipo de materia orgánica consumida, se pueden dividir en: Materia orgánica no estructurada Saprófagos Humedad: Inundado Materia orgánica estructurada (viva o muerta) Capacidad de campo Punto de marchitamiento permanente Depredadores Fitoparásitos Seco total Anhidrobiosis Enquistado Vida normal Hay una relación ajustada entre la cantidad de nematodos y la proporción de humedad La cantidad de agua que rodea las partículas del suelo, debe estar presente en cantidades que permita el desplazamiento de los animales Ciclos de Vida I 16 (hacia una clasificación general) Elementos a tener en cuenta: Condición Ectoparásitos Semiendoparásito Endoparásito Endoparásito Secundariamente Semiendoparásito Actitud en la dispersión Juveniles Sedentarios Juveniles Migradores Hembras Forma filiformes Forma globosas Puesta Fuera del hospedador Dentro del hospedador Hembra enquistada Lugar Sistema radicular Partes aéreas

5 Ciclos de Vida II Ejemplos: Formas 17 Ciclos de Vida III A clasificar Estiletes muy largos 18 1: Ectoparásitos 11: Sistema radicular 111: Migradores Este Orden es indicador de suelos no modificados Son polífagos, no específicos Ciclos de vida cortos (meses) Ectoparásito Semiendoparásito Endoparásito Estilos parasitarios Doriláimidos (todos): (, y Nivel de Orden Adultos Semiendoparásito Puesta externa Hembras globosas sin huevos Endoparásito Puesta externa Puesta externa Endoparásito Puesta interna Hembra enquistada Lugar de la puesta Lugar donde están los huevos Hembras globosas con huevos Endoparásito, secundariamente semiendoparásito legumbres de huerta Tilénquidos: ( y pinos, árboles frutales y cultivos diversos No quedan estacionarios Juveniles Atacan los distintos estados del ciclo de vida Daños generalizados Ciclos de Vida IV Más quietos 19 1: Ectoparásitos 11: Sistema radicular 112: Sedentarios Tilénquidos: Familia CRICONEMATIDAE (,,, ) hortalizas, florales y leñosas y PARATYLENCHIDAE ( ) plantas de ananá Nivel de Familia Esta Familia es indicadora de suelos modificados antrópicamente Tendencia a perder el estilete, en machos y juveniles No son polífagos, son algo específicos Ciclos de vida largos (meses) Rodean a las radículas y quedan estacionarios Ciclos de Vida V Hacia arriba 20 1: Ectoparásitos 12: Partes aéreas 121: Migradores (trigo) y Un sólo Género Suben por plántulas y permanecen como ectoparásitos, Migradores juveniles obligados en el segundo estadio larval Distribución pasiva de las larvas por rotulación del hombre El adulto se puede desplazar por la planta (cereal) agalla Ciclo sincronizado con el ciclo de vida de la planta Eventualmente (madurez sexual) penetran y hacen agalla aéreas Muy específico

6 Ciclos de Vida VI Específicos y no tan específicos 21 1: Ectoparásitos 12: Partes aéreas 122: Sedentarios spp (alfalfa, arroz y plantas con bulbos) spp (crisantemo, narciso, fresias, orquídeas y arroz) spp (cítricos, muguete) (cocoteros) (nematodo de la madera de pino) Producen pudriciones, cortan la circulación Se ubican en región subcortical Migradores juveniles no obligados El juvenil es temporalmente ectoparásito, penetra en la planta El adulto no se desplaza por la planta Son polífagos, no específicos No desarrollan Varios Muchas generaciones agallas Género en un año Ciclos de Vida VIII Más polífagas? 23 2: Semiendoparásitos 22: Sedentarios TYLENCHULIDAE: Ciclos de Vida VII Empezamos otra vez 22 2: Semiendoparásitos 21: Migradores Subfamilia HOPLOLAIMINAE: (cereal, caña de azúcar, alfalfa); (plantas tropicales); y (plantas bajas) (tabaco, cereal, algodón) Estos animales penetran parcialmente en los tejidos del hospedador para nutrirse Se localizan especialmente en la zona epidérmica (cortical) del sistema radicular Cuando son juveniles migran y viven prácticamente como ectoparásitos Hay una tendencia al endoparasitismo Cuando las condiciones son adecuadas se multiplican por miles rápidamente Las hembras son filiformes y sólo penetran la corteza de las raíces cuando están maduras Cambian de lugar Son polífagos en general Ciclos de Vida IX No son semiendoparásitos? 24 3: Endoparásitos 31: Puestas externas (cítricos); También (leguminosas); y (maní) Con modificaciones del cuerpo Luego de la cópula, la hembra penetra en el tejido vegetal para alimentarse por poco tiempo, pierde la forma filiforme y sale para colocar la puesta Con puesta de huevos en el exterior de la corteza Son polífagas dentro de un grupo de plantas similares Masa gelatinosa La hembra saca sólo el extremo posterior del cuerpo en el momento de poner los huevos F! La parte posterior se hipertrofia Cosmopolitas Masa gelatinosa

7 Ciclos de Vida X Otra vez filiformes? 25 3: Endoparásitos 32: Puestas internas Ciclos de Vida XI Cómo, salen otra vez? 26 4: Endoparásitos, secundariamente semiendoparásitos 41: Puestas externas (sobre hortalizas, vid, cereales) Tilénquidos:, y (banana) Hembras filiformes sin modificación del cuerpo Específicos Hembras globosas sin huevos Masa gelatinosa La hembra pasa mucho tiempo como endoparásito Las hembras pueden ser notadas en las agallas o nódulos de la raíz antes de poner Ciclos de Vida XII Al fin 27 4: Endoparásitos, secundariamente semiendoparásitos 42: Enquistamiento (soja) (papa) Las hembras son fecundadas y aumentan de tamaño, quedando como pequeños quistes, en la zona cortical o subcortical Hembras globosas con huevos La larva infectiva es el segundo estadio larvario Los tejidos vegetales pueden desarrollar agallas Resumen: Ciclos de Vida 28 1: Ectoparásitos 11: Sistema radicular 111: Migradores 112: Sedentarios 12: Partes aéreas 121: Migradores 122: Sedentarios 2: Semiendoparásitos 21: Migradores 22: Sedentarios 3: Endoparásitos 31: Puestas externas 32: Puestas internas 4: Endoparásitos, secundariamente semiendoparásitos 41: Puestas externas 42: Enquistamiento

8 Síntomas I (daño) 1) Alteraciones en las partes aéreas: DIRECTO Qué hacen? INDIRECTO 29 Síntomas II (daño) Y en la raíces? 30 2) Alteraciones del sistema radicular (directo): No confundir Necrosis locales por falta de irrigación, formación de agallas y ataque directa a meristemas CLOROSIS Asociado con animales que atacan desde el suelo Agallas de nematodos Nódulos de a) Raíces con nódulos (, ) b) Pudriciones o Necrosis superficial (,, ) c) Pudriciones o Lesiones internas (, ) d) Malformaciones: Raíces curvadas (curly tip) Raíces rugosas (coarse root) Soja Raíces erizadas (stubby root) Hoja normal Hoja atacada en las nervaduras Síntomas III (daño) Y en los tejidos? 31 3) Reacciones histológicas de los vegetales: a) Reacciones de defensa y aislamiento b) Hipertrofia del tejido parenquimal Síntomas IV (daño) Más 32 3) Reacciones histológicas de los vegetales: c) Necrosis d) Formación de agallas en tejido diferenciado Masa de nematodos d c Necrosis a Delaminación Tejido atacado Tejido hipertrofiado Raíz normal b Raíz atacada Meristema modificado

9 Síntomas V (daño) Y más 33 Hoja normal 3) Reacciones histológicas en los vegetales: Hoja modificada Hipertrofia Nervadura normal Nervadura modificada Resumen: Síntomas 34 1) Alteraciones en las partes aéreas: DIRECTO INDIRECTO 2) Alteraciones del sistema radicular: a) Raíces con nódulos b) Pudriciones o Necrosis superficial c) Pudriciones o Lesiones internas d) Malformaciones: Raíces curvadas Raíces rugosas Raíces erizadas 3) Reacciones histológicas de los vegetales: a) Reacciones de defensa y aislamiento b) Hipertrofia del tejido parenquimal c) Necrosis d) Formación de agallas en tejido diferenciado Síntomas en cultivos: 35 1) Debilitamiento: 2) Manchas de secado: 3) Raleo: Modificaciones en la fisiología del hospedador El ataque directo al sistema radicular trae aparejado problemas en el transporte de sustancias Falta de nutrientes Falta de agua 1) Disminución de la posibilidad de absorber ciertos minerales 2) Disminución de la vitalidad de reproducción Interacciones con otros agentes patógenos Daño mecánico De virus, bacterias, hongos y otros nematodo (complejos patogénicos) Ejemplo: Se ha demostrado la inoculación del Virus del tabaco es debido a y a El Virus del anillo negro del tomate, que también ataca a la lechuga y a la remolacha es transmitida por Camino para la infección SINERGISMO Pared celular 1 Virus 2 Bacterias 3 Micoplasmas 4 Protistas 5 Hifa de hongos 6 Nematodos Núcleo Cómo actúan? Pérdidas: entre el 10% (países desarrollados) y 15% (no desarrollados) 6 CLOROSIS Tamaños 4 5

10 Acción del hospedador sobre los nematodos Cómo 37 resisten? Primero hay que definir tres palabras utilizadas indistintamente: Resistencia: es la acción de la planta sobre la reproducción del nematodo Una planta resistente no permite la reproducción del nematodo Tolerancia: se limita a los perjuicios medidos como los síntomas y daños producidos Una planta tolerante no muestra señales, ni síntomas, ni daños, de la infección por nematodos Incompatibilidad: son los mecanismo fisiológicos que impiden el normal desarrollo de los nematodos Una planta incompatible no admite el desarrollo de los nematodos en su medio interno Resistencia: Tolerancia: La tolerancia se debe en forma directa al daño producido, dependiendo en 1) Plantas absolutamente resistentes forma directa de la relación planta - 2) Plantas parcialmente resistente nematodo a) las larvas no se desarrollan b) las larvas se desarrollan pero se arrestan en un estadio c) las hembras son poco numerosas y poco prolíficas 3) Plantas sensibles, las hembras son prolíficas Incompatibilidad: El hospedador puede incidir sobre el desarrollo de los parásitos, mediante su fisiología, regulación metabólica, la producción de sustancias tóxicas o por vía inmunitaria Muestreo I Se trata de encontrar los daño característicos, agallas o 39 Qué busco? Muestreo en campo: Sacabocado nódulos típicos, los nematodos mismos o los quistes (hembras enquistadas) Cómo se muestrea? Se debe hacer una cuadrícula de muestreo, teniendo presente que los lugares deben estar distribuidos en forma pareja sobre el total del terreno y estar dispuestos al azar Se pueden agregar muestreos pilotos, indicativos o siguiendo un interés particular Métodos de control: Cómo se lucha? 38 Control gubernamental: regulación de la introducción y la diseminación de granos y plantas por medio de leyes internacionales Control Físico (tratamiento por calor): inyección de vapor a altas temperaturas Control químico: Se aplican en cultivos de alto valor A fumigantes del suelo (gas): [1,3 dicloropropeno (Telone II), cloropicrina (gas lacrimógeno), y dazomet (Basamid) bromuro de metilo] B no fumigantes (líquido o sólido): fenamifos (Nemacur) y aldicarb (Temik); son insecticidas (venenos nerviosos), no son tan efectivos Control biológico: otros nematodos, protistas (microsporidios) y hongos (hipomicetes) Métodos culturales: cuarentenas; barbecho; desecación; rotación de cultivo; utilización de razas resistentes; aislamiento del borde; inundación; eliminación de otras plantas; recuperación del suelo, etc Problemática actual: Portainjertos resistentes, para nematodos que atacan raíces Plantas nematicidas Sebos vegetales Biofumigación, aumento de la materia orgánica n Solarización, secado No siembra directa A Límites de tolerancia: nemátodos por 100 g de suelo t B Umbral Económico (UE): cantidad de nematodos donde se debe iniciar el control C Nivel de Daño Económico (NDE): cantidad de nematodos, cuando el rinde es igual a los gastos Realizar el tratamiento es aumentar los gastos Muestreo II Orden!!!!!!!!! 40 Muestreo en campos cultivados: Guarda recta y en zig-zag NDE UE La muestra se debe mantener viva, no fijarla y protegerla del exceso de calor o frío Se puede mantener a 4 C (heladera) Se puede considerar muestra a restos vegetales, o raíces de plantas supuestamente atacadas Levantar los datos necesarios (fecha, lugar, especie, ubicación, etc) Estas se tomarán en forma delicada, tratando que los terrones de tierra queden adheridos a ellas Lo ideal es acondicionar la muestra en bolsitas de plástico, herméticas; tratando de dejarles una trampa de aire, para que no se consuma el oxígeno y pueda protegerse de accidentes mecánicos Patrón para el muestreo doble en cultivos frutales y forestales Una muestra cercana al tronco y otra en el borde de la cobertura de hojas Detalle

11 Separación Luego del muestreo 41 Lámpara También, en el embudo se puede colocar un vaso de precipitado invertido, cubierto con una red y ajustado con una banda de goma De 24 o 48 horas Muñeca (Con tierra o raíces) Líquido Embudo de vidrio o plástico Manguera de goma Pinza Caja de Petri (Con fijador o líquido de cultivo) Embudo de Baermann Estativo Concentración I Filtrado diferencial 43 1) Preparación de la muestra Filtro de 150 micrómetros de diámetro Morterear levemente con agua Muestra de tierra o raíces 3) Filtrado fino Descartar Filtro de 4 milímetros de diámetro 2) Filtrado grueso Descartar Separación de nematodos vivos del suelo y 42 confección de preparados temporales Observación Montado y sellado Aparato de Baermann Observación Determinación Procedimiento general fijado Ver el apartado de Concentración Aclarado en lactofenol puro Lavado y filtrado Concentración II Centrifugado diferencial 44 Centrifugar a 3000 RPM 4 minutos 1) 1 centrifugación Luego del 1 y 2 paso del filtrado diferencial, de la pantalla anterior: muestra sin tierra gruesa Centrifugar a 3000 RPM 2 minutos Descartar el sobrenadante Descartar el precipitado Filtro de 150 micrómetros de diámetro Resuspender el precipitado con una solución de 45,5 % de azúcar 4) Lavado del filtro Se acondiciona en un vaso de Conservación a precipitado 4 C 2) 2 centrifugación Conservación a 4 C Nematodos limpios Filtrado y lavado del filtro

12 Mantenimiento y verificación de la presencia de fitoparásitos Para planta supuestamente enferma 45 Estudio de la penetración y ubicación de los fitoparásitos en la planta huésped Para tomate u otra planta 46 4 C dilacerado filtrado Semilla de tomate Inóculo lavado Planta de soja Inóculo Determinación Caja de Petri Lámina de plástico gruesa Observación dilacerado filtrado Conservación a 4 C lavado t no mayor a Filtro de 150 micrómetros una semana de diámetro Lámina de plástico fina Procedimientos 47 Soluciones Verificación de quistes (hembras grávidas) Método del vaso: se disgrega el suelo en agua y se mezcla bien Se deja reposar y se coloca y se saca verticalmente y de forma rápida, un papel de diario junto a la pared del vaso Los quistes quedan adheridos a él Método de la botella: mediante un embudo se llena una botella con la muestra, se llena de agua hasta un 75% y se agita durante 5 minutos Se deja reposar Se agrega agua hasta el borde Los quistes flotan en la superficie Lavado Los nematodos admiten ser lavados dentro del tamaño del tamiz correspondiente, por soluciones de hipoclorito de sodio al 2,5 % en solución acuosa (agua lavandina diluida 11 veces), durante 5 minutos Anestesiado Dos gotas de éter etílico en 50 mililitros de agua declorada, en frasco cerrado Desanestesiar en agua declorada Fijación - FAA: 2 mililitros de alcohol etílico; 6 de formol solución comercial; 1 de ácido acético glacial; 40 de agua destilada - Ácido acético glacial al 0,5%, entre 60 y 80 C Pasar a solución de formaldehído al 5%, salado (36 por mil) y neutralizado ph 7 Observación Primero en cajas de Petri, para microscopio estereoscópico; luego en portaobjetos Coloración En masa", con verde luz, azul de Nilo o azul de anilina Para preparados semidefinitivos: azul de algodón - lactofenol Clave I Determinación (nivel alto) 48 Ausente Estilete Nematodos no parásitos Presente SECERNENTEA TYLENCHIDA Presente Nematodos parásitos de plantas Bulbo faríngeo medio Ausente ADENOPHOREA DORYLAIMIDA

13 Clave II Determinación (nivel bajo I) 49 ADENOPHOREA DORYLAIMIDA Pequeño (menos a 1 mm) Estilete corto y curvo Tamaño Grande (mayor a 1 mm) Estilete largo y recto Engrosamiento basal del estilete Presente doriláimidos Ausente Clave III Determinación (nivel bajo II) 50 Globoso Forma del cuerpo Presente Filiforme Anillación Redondeada Ausente Forma de la cola SECERNENTEA TYLENCHIDA tilénquidos Aguzada Presente Raíz del estilete Ausente Grande (> a 1 mm) Tamaño Pequeño (< a 1 mm) Louis Pasteur ( ) Robert Koch ( ) La Argentina tiene un déficit acentuado de estudios sobre nematodos 51 Postulados de Koch: 1 El agente patológico debe estar presente en cada caso de la enfermedad en las condiciones apropiadas y ausente en los organismos sanos 2 El agente no debe aparecer en otra enfermedad de manera fortuita o saprófita 3 El agente debe ser aislado del cuerpo en un cultivo puro a partir de las lesiones de la enfermedad 4 El agente debe provocar la enfermedad en un organismo susceptible al ser inoculado 5 El agente debe ser aislado de nuevo de las lesiones producidas en los organismos de experimentación En sí, en la Argentina se desconoce sobre la microfauna del suelo, su composición y su acción; cuál es la incidencia mutua entre los organismos del suelo y los cultivos; etc Fitopatología Nematodos fitopatógenos (vigésima edición) Gracias por Daniel E Nahabedian DCB MATERIAL DE DOCENCIA SÓLO USO INTERNO