Palabras clave: Carcinosarcoma mamario Perra Inmunohistoquímica Citoqueratinas.

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1 Inmunomarcación intracitoplasmática fuerte generalizada de citoqueratinas (CK1/CK3) sobre tejido de neoplasia mixta maligna mamaria grado III en una perra Generalized big intracytoplasmatic immunostaining of cytokeratins (CK1/CK3) on malignant mixed mammary neoplasia tissue grade III in a bitch FRANCO PINEDA, Edwin 1* 1 Estudiante, programa Biología. Universidad de la Amazonia. Florencia, Caquetá Colombia. eduwinfranco01@gmail.com Resumen Las citoqueratinas resultan trascendentales sobre la integridad de las células eucariotas, en especial la animal dedibo a la ausencia de pared, ya que mediante la formación de los filamentos intermedios logran ofrecer estructura al citoesqueleto y éste a su vez aportar resistencia mecánica a la célula, participar en la mitosis y meiosis, comunicación celular, disposicion de proteínas y demás actividades de índole metabolica. Las citoqueratinas son abundantes en el tejido epitelial ergo han sido ampliamente estudiads y utilizadas como marcadores tumorales en entidades oncologicas con el fin de esclarecer la carcinogénesis. En el presente trabajo se identificó la expresión de los receptores de citoqueratinas sobre una neoplasia mixta epitelial y mesenquimal maligna en el tejido mamario de una perra mestiza. El estudio de inmunohistoquímica mostró una inmunomarcación intracitoplasmática fuerte generalizada de citoqueratinas (CKA1/CKA3) llevando a la ratificación del estudio anatomopatológico (carcinosarcoma mamario) y a la confirmación del origen epitelial de la neoplasia. Palabras clave: Carcinosarcoma mamario Perra Inmunohistoquímica Citoqueratinas. Abstract The cytokeratins are transcendental on the integrity of eukaryotic cells, especially the animal due to the absence of a wall, since by means of the formation of the intermediate filaments they manage to offer structure to the cytoskeleton and this in turn contributes mechanical resistance to the cell, participate in mitosis and meiosis, cellular communication, protein disposition and other metabolic activities. Cytokeratins are abundant in ergo epithelial tissue and have been widely studied and used as tumor markers in oncological entities in order to clarify carcinogenesis. In the present work, the expression of cytokeratin receptors on a mixed malignant epithelial and mesenchymal neoplasm was identified in the mammary tissue of a mestizo bitch. The immunohistochemical study showed a generalized big intracytoplasmatic immunostaining of cytokeratins (CKA1/CKA3) leading to the ratification of the anatomopathological study (mammary carcinosarcoma) and confirmation of the epithelial origin of the neoplasm. 1

2 Keywords: Carcinosarcoma mammary Bitch Immunohistochemistry Cytokeratins. Introducción El citoesqueleto es un complejo tramo de filamentos a lo largo del citoplasma que actúa de <huesos y músculos> de las células eucariotas y le permite propiedades de forma, organización y movimiento (Rojo et al.,2004). El citoesqueleto recobra mayor importancia biológica y funcional en la célula animal dadas las condiciones de ausencia de pared celular, situación esta que propicia la inadecuada consistencia celular (Megías et al., 2017). Puntualmente, Nieves et al., (2014) refiere que algunas funciones como apoyo estructural de la membrana plasmática, movimiento, polaridad, disposición de orgánulos, comunicación, exocitosis y endocitosis, meiosis y mitosis, anclaje y protección son propias del citoesqueleto. Mertínez & Martínez (2010) aseveran que el citoesqueleto se forma tras la unión y/o integración de los microtúbulos, microfilamentos y filamentos intermedios, siendo éstos últimos los mas rígidos y resistentes del citoesqueleto cuyas actividades se centran en la regulación de la localización de las proteínas y la transmisión de señales intracelulares. Martínez & Martínez (2011) manifiestan que según sea la localización, la nomenclatura de los filamentos intermedios puede cambiar a neurofilamentos (neuronas), gliofilamentos (microglia), desmina (músculo), vimentina (células mesenquimales) y citoqueratinas (células epiteliales). Según Aquino & Jurado (2008) las citoqueratinas son proteínas propias de los filamentos intermedios que se encargan del mantenimiento de la estructura epitelial, proteccion ante traumatismos y comunicación entre el citoplasma, siendo importante la diferenciación de la queratina hallada en uñas y pelo. Martínez & Martínez (2011) indican que las citoqueratinas asociadas al tejido mamario son las CK , epidermis CK 1-10, córnea CK 3-12 y esófago CK 4-13 además de mencionar su importancia en la prevención de la apoptosis y modulación de síntesis protéica. Sobre su rol como marcador tumoral Santiago et al., (2005) & Tapia et al., (2017) aseguran que el componente epitelial de carcinosarcomas es positivo para citoqueratinas, por lo cual infieren que las citoqueratinas confirman el diagnóstico de carcinosarcomas y en general de alteraciones oncológicas del tejido epitelial. La importancia del entendimiento de la carcinogénesis está canalizada en el pronóstico de la condición tumoral. El objeto del presente trabajo es el de ofrecer un referente de estandarización de casuísticas oncologicas en veterinaria además de aproximarse a la comprensión del origen tumoral mediante la identificación de la expresión de citoqueratinas en un tumor mixto de origen epitelial y mesenquimal de glándula mamaria de una perra mestiza. Materiales y metodología Para el estudio inmunohistoquímico de citoqueratinas (Imagen 1, 2 y 3) se embebió el bloque de la muestra del tejido tumoral en parafina y posteriormente se mezcló con fijador. La decalcificación se llevó a cabo con ácido fórmico al 5%. Se realizaron cortes de 5 կm de grosor del tumor embebido en parafina y se secó a temperatura ambiente 2

3 durante 2 horas. Ulterior a ello, se realizó una fijación en acetona durante 5 minutos y se secó a temperatura ambiente por 30 minutos. Finalmente, el tejido fue incubado con el anticuerpo comercial Cytokeratin (34betaE12) Mouse Monoclonal Antibody. El método empleado para la detección de la inmunoreactividad fue el de estreptavidina-biotinaperoxidasa. El resultado de IHQ arrojó una inmunomarcación intracitoplasmática fuerte generalizada de citoqueratinas CK1/CK3 sobre la muestra de carcinosarcoma mamario. Imagen 1. Muestra control. IHQ Citoqueratinas (CK1/CK3). 400X. (Flechas rojas: marcación intracitoplasmática). 3

4 Imagen 2 y 3. Inmunomarcación fuerte de Citoqueratinas (CK1/CK3). 400X. (Flechas rojas: marcación intracitoplasmática). 4

5 Resultados y discusión A pesar del desconocimiento acerca del rol de las citoqueratinas en la carcinogénesis, se cree que intervienen en el comportamiento biológico natural de los tumores actuando ergo como indicador pronóstico (Aquino & Jurado, 2008). De igual manera, Rojo et al., (2004) manifiesta que las citoqueratinas son utilizadas en la clasificación de tumores poco diferenciados ya que su antigenicidad específica se preserva incluso durante la trasformacion a malignos. Reigosa et al., (2010) manifiesta que la expresión de citoqueratinas junto con el también marcador tumoral p63 está relacionada con tumores basales y luminales de la mama. Por su parte Herrera & Díaz (2011) afirma que los marcadores comunes de la mama son las citoqueratinas CK , calponina, p63, caderina, estrógeno, progesterona y HER2. Los resultados del presente trabajo concuerdan con los de Jaramillo et al., (2017) & Villalón et al., (2013) quienes corroboraron el diagnóstico histopatológico de carcinosarcoma al encontrar mediante IHQ positividad de CK1 y CK3 en tumores de mama con alto contenido epitelial. Las proteínas citoplasmáticas, que junto a los antígenos de superficie celular, enzimas y hormonas, son consideradas indicadores bioquímicos de presencia de tumor (Coronato et al., 2002), se encuentran distribuidas por la superficie de cada uno de los tres elementos del citoesqueleto. Las citoqueratinas CK, que son unas proteínas citoplasmáticas, son el componente principal de los filamentos intermedios, que a propósito predominan sobre las células animales (Nieves et al., 2014). Se destaca la relevancia de los filamentos intermedios en oncología dado que actúan en la organización del citoplasma de células diferenciadas, desensamble de la lámina nuclear y en la regulación de la actividad celular, por mencionar algunas principales (Martínez & Martínez, 2011; Megías et al., 2017; Rojo et al., 2004). Finalmente, se infiere que el estudio de citoqueratinas no limita su exclusividad al análisis de neoplasias mamarias puesto que autores como Molinié & Baumert (2007) han informado de la identificación de citoqueratinas Ck en tumores de prostata, Nieves et al., (2014) comunicaron de la expresión de CK en tumores odontogénicos y Tapia et al., (2017) asevera haber identificado una expresión fuerte de citoqueratinas en tumores de laringe. Conclusiones Los resultados obtenidos en el presente caso reafirman el rol de la IHQ en la oncología y mas concretamente en la carcinogénesis. La sobreexpresión de citoqueratinas supone un origen epitelial de las neoplasias además de ser sugestivo, en la mayoria de los casos, de neoplasias mixtas dado que generalmente la inmunotinción positiva de CK se acompaña de positividad de vimentina, que se expresa en tejido mesenquimal. El presente artículo deja las cartas abiertas para la comprensión biológica de los tumores en estos mamíferos <perros> entendiendo que se requiere de muchos mas estudios de IHQ con poblaciones estadisticamente significativas para contribuir a la estandarizacion de estas entidades oncologicas. 5

6 Referencias 1. Aquino, C; Jurado, F Citoqueratinas en dermatología. Dermatología Rev Mex, 52(6). Pp Coronato, S; Lauguens, G; Spinelli, O; Girolamo, W Marcadores tumorales en cáncer de mama. MEDICINA (Buenos Aires). 62: Herrera, O; Díaz, J Inmunohistoquímica en patología de mama. Diferenciación de lesiones complejas benignas y malignas de mama: un reporte de caso y revisión de la literatura. Revista Colombiana de Obstetricia y Ginecología, 62(3). Pp Jaramillo, L; Mesa, C; Mesa, F; Alba, V Carcinosarcoma, un tumor bifásico. Caso clínico. Dermatología CMQ, 15(4). Pp Martínez P, J; Martínez R, J Revisión sobre filamentos intermedios, con especial referencia a las citoqueratinas. Revista Complutense de Ciencias Veterinarias, 4(2). Pp Martínez P, J; Martínez R, J El citoesqueleto celular en la glándula mamaria y su aplicación diagnóstica. Sanid. Mil, 67(2). Pp Megías, M; Molist, P; Pombal, M Atlas de Histología Animal y Vegetal. Universidad de Vigo. Disponible en: 8. Molinié, V; Baumert, H Nuevos marcadores en las biopsias de próstata. Actas Urol Esp, 31(9). Pp Nieves, S; Apellaniz, S; Tapia, G; Maglia, A; Mosqueda, T; Bologna, R Citoqueratinas 14 y 19 en quistes y tumores de origen odontogénico. Una revisión. Odontoestomatología, 16(24). Pp Reigosa, A; Fernández, A; Gutiérrez, D; Caleiras, E; Herdisson, D; Espig, H Expresión de p63 y citoqueratina 5/6 en los diferentes tipos moleculares del carcinoma de mama. Rev Esp Patol. 43: Rojo, D; García, L; Hernández, M; Álvarez, M Proteínas asociadas a los componentes del citoesqueleto. Revista CENIC Ciencias Biológicas, 35(2). Pp Santiago, J; Pérez, M; Rivera, A; Gil, D Carcinosarcoma de la mama: un tumor de histogénesis controvertida. Clin Transl Oncol, 7(6). Pp Tapia, M; Ortega, P; Urra, A; Ayres, G; Sepúlveda, I Carcinosarcoma de laringe: Reporte de dos casos. Rev. Otorrinolaringol. Cir. Cabeza Cuello. 77: Villalón, J; Souto, R Carcinosarcoma mamario una rara entidad con pronóstico fatal. A propósito de un caso. Cir Cir. 81: REDVET 2018 Vol. 19 Nº 6 Este artículo Ref _REDVET (Ref. prov _inmunomarcacion, Recibido 02/04/2018, Aceptado 28/05/2018, Publicado 01/067/2018) está disponible en concretamente en REDVET Revista Electrónica de Veterinaria está editada por Veterinaria Organización. Se autoriza la difusión y reenvío siempre que enlace con Veterinaria.org y con REDVET - 6