COLEGIO MEXICANO DE INGENIEROS BIOQUÍMICOS, A. C.

Transcripción

1 ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA Y ANTIRRADICALES LIBRES DE EXTRACTOS DE CORTEZA DE Lysiloma divaricata 1 Rosales Castro Martha, Ponce Rodríguez Ma. Del Carmen, Reyes Navarrete Ma. Guadalupe Instituto Politécnico Nacional. Centro Interdisciplinario de Investigación para el Desarrollo Integral Regional (CIIDIR) Unidad Durango. Av. Sigma s/n Fracc. 20 de Noviembre, Durango Dgo mrosa0563@yahoo.com, 1 Becaria de la COFAA-IPN RESUMEN Se obtuvieron extractos acetónicos, etanólicos y acuosos de la corteza de Lysiloma divaricata. Se evaluó la actividad antibacteriana sobre Staphylococcus aureus, Escherichia coli y Enterococcus sp. por el método de dilución en agar. La actividad antirradicales libres se evaluó por el método del 2,2,difenilo-1-picrilhidracilo (DPPH+) a cuatro concentraciones de extracto y se comparó con los antioxidantes catequina, ácido ascórbico y Butilhidroxitolueno (BHT). Los extractos etanólicos y acuosos mostraron la misma actividad sobre las bacterias, aunque a 500 ppm no tuvieron inhibición. El extracto acetónico tuvo la mayor inhibición del radical, a 750 ppm alcanzó el 85% de inhibición, similar a catequina y superior a ácido ascórbico y BHT. Palabras clave: Lysiloma divaricata, actividad antibacteriana, DPPH. ANTECEDENTES El descubrimiento de nuevos agentes naturales con actividad terapéutica es una de las principales metas de la humanidad desde tiempos prehistóricos. Existe un desarrollo considerable de productos de origen natural a los que se les han asignado títulos como productos de salud o productos antioxidantes, con lo que se pretende indicar la

2 capacidad de disminuir la concentración de radicales libres en el organismo humano, y por tanto, mejorar el estado de salud de quien lo consume 1. Para la elaboración de dichos productos se utilizan extractos obtenidos de especies vegetales, en las que se incluyen cortezas 2,3. De forma general las cortezas de árboles superiores son una fuente importante de metabolitos secundarios, y específicamente se reporta que las leguminosas contienen compuestos de tipo polifenólico 4, a los que se les atribuye diversas propiedades terapéuticas, tales como antimicrobianas, antioxidantes, antiinflamatorias y anticancerígenas 5,6,7. Los polifenoles son de carácter polar, por lo que pueden ser extraídos del material vegetal con acetona, diversos alcoholes, agua y/o mezclas de ellos 8. OBJETIVO El presente trabajo tiene como objetivo evaluar la actividad antibacteriana de extractos acetónicos, etanólicos y acuosos de las cortezas de Lysiloma divaricata, así como su capacidad inhibidora de radicales libres. MATERIALES Y MÉTODOS Se trabajó con la corteza de Lysiloma divaricata, conocida como mauto o tepemezquite. La especie utilizada fue colectada diversos Municipios del Estado de Puebla. La corteza se trituró en un molino de laboratorio y se tamizó hasta un tamaño de partícula de 40 mallas. Se realizaron extracciones con acetona acuosa al 70%, etanol acuoso al 50% y con agua caliente. Extracto acetónico y etanólico. A 30 g de corteza se le adicionó 150 ml del solvente, se maceraron de forma independiente a temperatura ambiente durante 24 h y se filtraron

3 sobre papel filtro. Al material remanente se le adicionó 100 ml de solvente fresco y se repitió el proceso. Los extractos obtenidos de la primera y segunda maceración se combinaron y concentraron en rotavapor a 40 C aplicando vacío. El extracto remanente se liofilizó. Extracto acuoso. Se utilizaron 30 g de corteza y 10 g de hojas. Se les adicionó 150 ml de agua destilada, se calentó a ebullición con reflujo durante 30 min, se filtró sobre papel filtro. Los extractos fueron liofilizados para secarlos. La actividad antibacteriana se evaluó sobre los microorganismos Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Escherichia coli (ATCC 25922) y Enterococcus sp. Se utilizó el método de dilución en agar, con medio de cultivo agar Mueller-Hinton. Los extractos se probaron a concentraciones de 500, 5000 y ppm, disueltos en el agar. El inóculo se preparó a una densidad óptica aproximada de 10 8 unidades formadoras de colonias (UFC), comparando la turbidez con el estándar 0,5 de MacFarland. Se inocularon las placas tomando solución con un asa bacteriológica calibrada de ml y colocándola sobre la superficie del agar posteriormente se incubaron a 35 ºC durante 18 horas. Se midió el crecimiento (+++) o inhibición (---) de las bacterias sobre el agar. La capacidad atrapadora de radicales libres de los extractos se realizó por el método del radical 2,2, difenilo-1, picrilhidracilo (DPPH+). Se utilizó una solución 1x10-3 M del radical (DPPH+). Los extractos se prepararon a concentraciones de 250, 500, 750 y 1000 ppm, disueltos en los respectivos solventes, acetona, etanol o agua. Se utilizaron como estándares catequina, ácido ascórbico y Butilhidroxitolueno (BHT), a las mismas concentraciones de los extractos. A 40 μl del extracto o del estándar se le adicionaron

4 3 ml de la solución de DPPH, se agitaron y se leyó la absorbancia a 516 nm, 30 min después de la adición del radical. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Los extractos etanólicos y acuosos mostraron la misma actividad sobre S aureus, E. sp y E. coli, se inhibieron a 5000 y ppm. A 500 ppm no se tuvo efecto sobre ellas, Tabla 1. Tabla 1. Resultados del efecto antibacteriano Extracto ppm S. aureus E. sp E. coli Etanólico Acuoso Hubo crecimiento, --- Se inhibió el crecimiento Los extractos acetónicos y etanólicos tuvieron mejor inhibición del radical DPPH que el extracto acuoso, inhibieron de forma semejante al estándar catequina. Aunque la inhibición del extracto acuoso fue menor a las concentraciones de 250 y 500 ppm, todos los extractos alcanzaron una inhibición del radical igual o mayor al 80%, a concentración de 1000 ppm. A 500 ppm todos los extractos inhibieron mas del 50% del radical, de forma superior al estándar BHT, Figura 1.

5 CONCLUSIONES Los extractos de la corteza de Lysiloma divaricata no presentan buena actividad antibacteriana ya que se requiere altas concentraciones de extracto para inhibir las bacterias, sin embargo los extractos acetónicos y etanólicos presentan alta inhibición del radical % Inhibición Concentración ppm Acetona 70% Etanol 50% Acuoso Ac. Ascórbico BHT Catequina Figura 1. Inhibición del radical DPPH por efecto de los extractos

6 BIBLIOGRAFIA Índice de Trabajos en Extenso 1. Martínez, S. G., Delgado, H. R., Garrido, G., Guevara, G. M., García, R., Betancourt, P. E., Núñez S. A Vimang, nuevo producto natural antioxidante. Centro de Química Farmacéutica, La Habana, Cuba. 50 p. 2. Packer, L., Rimbach, G., Virgili, F Antioxidant activity and biologic properties of a procyanidin-rich extract from pine (Pinus maritime) bark, pycnogenol. Free Radical Biology & Medicine, 27(5/6): Núñez, S. A., Vélez, C. H., Aguero, A. J., González, G. J., Naddeo, F., De Simone, F., Rastrelli, L Isolation and quantitative analysis of phenolic constituents, free sugars, and polyols from mango (Magnifera indica L.) stem bark aqueous decoction used in Cuba as nutritional supplement. J. Agric. Food Chem. 50: Paredes,C., Quintanar, A. Pérez, C Histoquímica de la corteza de cinco angiospermas de una selva baja de Oaxaca. Madera y bosques 7(2): Marja, P., Aun, I., Heikki, J Antioxidant activity of plant extracts containing phenolic compounds. J. Agric. Food Chem. 47(10): Brandi, M. L The flavonoids: biochemical effects and therapeutic applications. Bone Miner. 19, S3-S Raj, N. K., Sripal, R. M., Chaluvadi, M. R Biflavonoids classification, pharmacological, biochemical effects and therapeutic potential. Indian Journal of Pharmacology, 33: Waterman, P. G., Mole, S Analysis of phenolic plant metabolites. Methods in ecology. Blackwell sci. pubs. 238 p.