Capítulo II: Extracción de compuestos polifenólicos

Transcripción

1 2.1.- Introducción Los compuestos polifenólicos son antioxidantes que constituyen una clase de metabolitos secundarios biosintetizados por el reino vegetal [1]. Debido a que los antioxidantes sintéticos utilizados en la industria tienen la desventaja de ser muy volátiles y se sospecha que son perjudiciales para la salud, existe en la actualidad un gran interés por la búsqueda de sustancias o compuestos alternativos, preferiblemente de origen biológico, que además de ser eficaces como antioxidantes, su aprovechamiento no impacte negativamente sobre el medio ambiente. Por otro lado, cada día se conoce más acerca de los beneficios del empleo de antioxidantes naturales en la salud humana e industria, por lo que es necesario explorar nuevas fuentes. Los residuos de la poda de olivo podrían resultar una excelente opción, ya que estudios recientes a nivel internacional evidencian la presencia de compuestos polifenólicos con propiedades antioxidantes en la hoja de olivo, lo que condujo a la comercialización de sus extractos debido a la gran utilidad en fitoterapia, cosmética y las industrias farmacológicas y de la alimentación. En contraste, apenas existen antecedentes sobre la composición fenólica en la madera de esta especie. Por lo expuesto y teniendo en cuenta que la provincia de Catamarca presenta una extensa área de cultivo de olivo, con perspectiva de crecimiento y consecuente producción de una biomasa de residuos de poda, actualmente sin aprovechamiento, surge la necesidad de desarrollar un método confiable que implique procedimientos de extracción y tratamientos de la muestra para extraer la mayor cantidad de fenoles presentes en las hojas y la madera de olivo, manteniendo algunas de las características beneficiosas de sus extractos, como ser el poder antioxidante. De acuerdo con lo presentado por Waterman y Mole (1994) [2], con respecto a los solventes y condiciones de trabajo para la extracción de CF de materiales vegetales y en función de los mejores resultados registrados en antecedentes que se refieren al poder extractivo de diferentes solventes orgánicos sobre la madera y la hoja de olivo [3], en el presente ensayo se aplica la extracción por maceración con etanol acuoso y acetato de etilo sobre residuos de poda de la variedad Arbequina del Valle Central de Catamarca para evaluar su poder extractivo y la actividad antioxidante de los extractos obtenidos. 53

2 2.2.- Objetivos del presente capítulo Seleccionar un solvente de extracción de sustancias fenólicas, presentes en hojas y madera procedentes de la poda de olivos de la variedad Arbequina cultivados en el Valle Central de la Provincia de Catamarca, en función de los mayores rendimientos alcanzados. Determinar el rendimiento en sólidos totales, polifenoles totales y ortodifenoles de los extractos de las hojas y la madera derivados de la poda de olivo de la variedad Arbequina, según el solvente utilizado en el proceso de extracción. Comparar el rendimiento en polifenoles de los residuos derivados de la poda de olivo de la variedad Arbequina, con antecedentes de antioxidantes provenientes de otras fuentes Materiales y métodos Preparación de las muestras: Obtención de los extractos Reactivos: Solución de etanol acuoso al 50% Acetato de etilo absoluto Agua bidestilada Los extractos en etanol acuoso al 50% y en acetato de etilo se obtienen utilizando una relación 1:10 p/v. Para ello se pesan, por quintuplicado, 5 g de muestra de hoja y 5 g de muestra de madera, por separado. Se adicionan 50 ml de etanol acuoso al 50%, se dejan macerar en vasos de precipitado, recubiertos con film y papel de aluminio, a temperatura ambiente, durante 24 hs. Posteriormente se filtran al vacío y al residuo remanente se le adicionan 50 ml de solvente fresco. Se repite el proceso estimando 48 hs de maceración. Los extractos obtenidos de la primera y segunda maceración se combinan y el volumen final de cada extracto se divide en dos alícuotas de 50 ml, medidos en matraz aforado. Una de las alícuotas se destina para la cuantificación de polifenoles, ortodifenoles y para calcular actividad antioxidante, la otra se utiliza para determinar la cantidad de sólidos totales. Las muestras se almacenan en recipientes ámbar para mayor protección contra la luz a una temperatura de 5-10 ºC. El procedimiento se repite para la obtención de los extractos con acetato de etilo (Anexo 4; Fotos A.4.7 a A.4.28). 54

3 Determinaciones analíticas a.- Sólidos totales Reactivos: hoja- etanol 50% (EHE) hoja- acetato de etilo (EHAc) madera- etanol 50% (EME) Extracto madera - acetato de etilo (EMAc) Se colocan 50 ml de cada uno de los extractos en cápsulas de porcelana previamente secadas y pesadas. Se llevan a baño maría hasta evaporación completa. Posteriormente se introducen las cápsulas en estufa a 105 ºC hasta sequedad, se enfrían en desecador y se efectúan pesadas hasta que la masa residual permanezca constante (Anexo 4; Fotos A.4.31 y A.4.32). Finalmente se realizan los cálculos correspondientes tomando la última pesada como referencia. Cálculo: ST = [(M 2 M 1 )/ M] x 100 Donde: ST: Sólidos totales M 2 : Peso de la cápsula más el residuo. M 1 : Peso de la cápsula vacía. M: Peso de la muestra. b.- Polifenoles totales Método de Folin Ciocalteu, a λ= 725 nm según Vázquez et al. (1975) [5]. Reactivos: Ácido cafeico Agua bidestilada hoja- etanol 50% (EHE) hoja- acetato de etilo (EHAc) madera- etanol 50% (EME) Extracto madera- acetato de etilo (EMAc) Folín Ciocalteu Solución saturada de carbonato de sodio I. Recta de calibrado Se prepara una solución de ácido cafeico de 210 ppm. A partir de ésta se calculan los volúmenes apropiados para preparar 25 ml de soluciones patrones de 0.0; 2.0; 4.0; 8.0; 12.0; 16.0 ppm (Tabla 2.1). Luego se llevan a matraz aforado de 25 ml en los que previamente se adicionan 10 ml de agua bidestilada, se someten a reacción con 1,25 ml de Folín Ciocalteu. Se agita 55

4 vigorosamente y se deja reposar 3 minutos. Por último se agregan 2,5 ml de Na 2 CO 3 saturado y se enrasa con agua bidestilada. Concentración (ppm) Volumen (ml) , , , , ,905 Tabla 2.1. Volúmenes para preparar 25 ml de soluciones patrones de PFT. Estas soluciones se mantienen en oscuridad durante una hora para que se complete la reacción. Se mide la absorbancia de cada muestra patrón en espectrofotómetro a longitud de onda de 725 nm. Una vez obtenidos los datos de absorbancia, se construye la recta de calibrado. II. Determinación de la concentración de polifenoles en los extractos de hoja y madera de olivo Se miden 10 ml de agua bidestilada, se llevan a matraz aforado de 25 ml y se adiciona 0,1 ml de extracto. Se agrega 1 ml de reactivo Folín Ciocalteu, se agita vigorosamente y se deja reposar por tres minutos. Por último se agregan 2,5 ml de Na 2 CO 3 saturado y se enrasan con agua bidestilada. Estas soluciones se mantienen en oscuridad durante una hora para que se complete la reacción. Se mide la absorbancia de cada muestra en espectrofotómetro a longitud de onda de 725 nm. Cálculo: ppm PFT = L x VD x VT/(VA x MM) Donde: L: Lectura de la curva en ppm. VD: Volumen de dilución. VT: Volumen total de extracto. VA: Volumen de la alícuota. MM: Masa de la muestra. c. Ortodifenoles Método de molibdato de sodio. Reactivos: Ácido cafeico Agua bidestilada hoja- etanol 50% (EHE) hoja- acetato de etilo (EHAc) madera- etanol 50% (EME) Extracto madera- acetato de etilo (EMAc) Solución de molibdato de sodio al 5 % en etanol al 50% 56

5 I. Recta de calibrado Se prepara una solución de ácido cafeico de 210 ppm. A partir de ésta se miden los volúmenes apropiados para preparar 10 ml de soluciones patrones de 0.0; 2.0; 4.0; 8.0; 12.0; 16.0 ppm (Tabla 2.2). Concentración (ppm) Volumen (ml) , , , , ,760 Tabla 2.2. Volúmenes para preparar 10 ml de soluciones patrones de ODF. Luego se llevan a matraz aforado de 10 ml, en los que previamente se adicionan 5 ml de agua bidestilada, se someten a reacción con 1 ml de solución de molibdato de sodio al 5 % en etanol al 50%. Se agitan vigorosamente y se enrasan con agua bidestilada. Estas soluciones se mantienen en oscuridad durante 15 minutos para que se complete la reacción. Se mide la absorbancia de cada muestra en espectrofotómetro a longitud de onda de 370 nm. Una vez obtenidos los datos de absorbancia, se construye la recta de calibrado. II. Determinación de la concentración de ortodifenoles en los extractos de hoja y madera de olivo Se toman 5 ml de agua bidestilada, se llevan a matraz aforado de 10 ml y se adicionan 0,1 ml de extracto. Se agrega 1 ml de solución de molibdato de sodio al 5 % en etanol al 50%, se agita vigorosamente y se enrasa con agua bidestilada. Estas soluciones se mantienen en oscuridad durante quince minutos para que se complete la reacción. Se mide la absorbancia de cada muestra en espectrofotómetro a longitud de onda de 370 nm (Anexo 4; Fotos A.4.29 y A.4.30). Cálculo: ppm ODF = L x VD x VT/ (VA x MM) Donde: L: Lectura de la curva en ppm. VD: Volumen de dilución. VT: Volumen total de extracto. VA: Volumen de la alícuota. MM: Masa de la muestra. 57

6 2.4.- Resultados y Discusión Comportamiento de los extractos de hojas Los máximos, mínimos, medianas, medias, desviaciones estándar y coeficientes de variación de los rendimientos en sólidos totales (ST), expresados como porcentaje de extracción (%) y los rendimientos en polifenoles totales (PFT) y orto-difenoles (ODF), expresados como ppm de ácido cafeico (mg ácido cafeico kg -1 hojas), de cinco repeticiones de extracciones etanólicas y con acetato de etilo de hojas de olivo, se presentan en la tabla 2.3. Parámetros Medidas descriptivas HE HAc Máx 28,31 7,87 Mín 24,39 6,97 Sólidos Mediana 25,53 7,07 Totales Media 26,11 7,31 (%) DE 1,53 0,42 CV % 5,86 5,75 Máx 30020, ,15 Polifenoles Mín 24117, ,96 Totales Mediana 27467, ,84 (mg de ácido Media 27540, ,36 cafeico kg - 1 DE 2544,79 848,99 de hojas) CV % 9,24 8,09 Máx 21002, ,72 O-difenoles Mín 16022, ,16 (mg de ácido Mediana 17401, ,80 cafeico kg - 1 Media 18130, ,28 de hoja) DE 1904,85 810,09 CV % 10,51 15,91 Tabla 2.3. Medidas descriptivas de los rendimientos en ST, PFT y ODF de los extractos etanólicos y con acetato de etilo de hojas de olivo. Considerando los elevados valores de las DE obtenidos en la tabla 2.3, se decide trabajar con los datos de las medianas para realizar el análisis descriptivo y estadístico. En la tabla 2.4 se exhiben las medianas de los rendimientos en ST, PFT y ODF para los extractos etanólicos y con acetato de etilo con las diferencias estadísticas respectivas, calculadas mediante el análisis unilateral da varianza por rangos, de Kruskal Wallis (Anexo 3; Tablas A a A.3.3.3). Medianas* ST PFT ODF HE 25,53 A 27467,65 A 17401,08 A HAc 7,07 B 10562,84 B 5018,80 B % Diferencia de extracción por solvente 72,30 61,54 71,16 * Letras distintas indican diferencias significativas al 5% Tabla 2.4. Medianas de rendimientos en ST, PFT, ODF de los extractos etanólicos y con acetato de etilo de hojas de olivo. 58

7 Capítulo II: Extracción de compuestos polifenólicos Los gráficos 2.1 y 2.2 muestran las medianas de los rendimientos en ST, PFT y ODF de los extractos etanólicos y con acetato de etilo de las hojas de olivo. HAc 7,07 HE HAc HE 25,53 ST/ % Gráfico 2.1. Medianas del rendimiento en ST de extractos de hoja. La extracción de los principios activos a partir de las hojas de olivo por maceración con etanol acuoso al 50 %, manifiesta un rendimiento significativamente superior en ST (p<0,0079) respecto de los macerados con acetato de etilo en un 72,30 % (Tabla 2.4; Gráfico 2.1). HAc 5018, ,84 PFT ODF HE 17401, ,65 Concentración/ ppm Ac. Cafeico Gráfico 2.2. Medianas del rendimiento en PFT y ODF de extractos de hoja. Igualmente, son los extractos etanólicos los que muestran rendimientos en PFT y ODF significativamente superiores (p<0,0079) que los macerados en acetato de etilo, tal como evidencian la tabla 2.4 y gráfico 2.2. La concentración de PFT registrada en los extractos etanólicos de hojas de olivo, se impone en un 61,54% sobre los fenoles 59

8 cuantificados para los extractos de acetato de etilo, obteniéndose 27467,65 mg y 10562,84 mg de fenoles totales por kilogramo de hoja respectivamente (Tabla 2.3; Gráfico 2.2). Asimismo, el contenido en ODF de los extractos etanólicos es estadísticamente superior a la concentración de ODF presentes en los extractos con acetato de etilo, en una proporción del 71,16 % (Gráfico 2.2; Tabla 2.3). Resulta importante señalar, que del total de los fenoles cuantificados, una proporción elevada de estos son ODF. En el extracto etanólico el 63,35% de los PFT son ODF, en tanto que, en el extracto de acetato de etilo el porcentaje diminuye a 47,51%. Esto resulta interesante si se tiene en cuenta que son los ODF quienes confieren, en gran medida, la valiosa bioactividad a las hojas de olivo [6; 7]. En síntesis, los extractos obtenidos a partir de hojas con etanol al 50% presentan un contenido en PFT, ODF y rendimiento en ST claramente superior al de los extractos de hojas con acetato de etilo; lo que permite deducir que desde el punto de vista de la capacidad extractiva del solvente, el etanol acuoso al 50% resulta ser el mejor de los solventes ensayados para la extracción de PF y ODF en hojas de olivo. Este comportamiento, además, permite predecir la naturaleza polar de los compuestos fenólicos presentes en este residuo agrícola. Es decir, que se pone en evidencia que la composición química de los extraíbles de las hojas de olivo serían en gran medida compuestos fenólicos hidrosolubles. Por otra parte, en función de estos resultados se puede considerar a las hojas de olivo de la variedad Arbequina procedente del Valle Central de la provincia de Catamarca, como una fuente importante de fitofenoles. Por lo que resulta importante el estudio de las propiedades antioxidantes de los extractos obtenidos, temática que se aborda en el capítulo 3 de la presente tesis Comportamiento de los extractos de madera Los valores máximos, mínimos, medianas, medias, desviaciones estándar y oeficientes de variación de los rendimientos en sólidos totales (ST), expresados como porcentaje de extracción (%), y los rendimientos en polifenoles totales (PFT) y o-difenoles (ODF), expresados como ppm de ácido cafeico (mg ácido cafeico kg -1 de madera), de cinco repeticiones de extracciones etanólicas y con acetato de etilo sobre madera de olivo, se presentan en la tabla

9 Parámetros Medidas descriptivas ME MAc Sólidos Totales (%) Polifenoles Totales (mg de ácido cafeico kg - 1 de madera) O-difenoles (mg de ácido cafeico kg - 1 de madera) Máx 18,07 3,64 Mín 13,88 2,34 Mediana 17,54 3,00 Media 17,21 2,96 DE 1,20 0,47 CV% 6,97 6,30 Máx 21246, ,78 Mín 18520, ,79 Mediana 18938, ,13 Media 19635, ,26 DE 1293,02 476,42 CV% 6,58 8,80 Máx 7708, ,18 Mín 7202, ,35 Mediana 7313, ,80 Media 7422, ,65 DE 278,76 762,31 CV% 3,76 22,07 Tabla 2.5. Medidas descriptivas de los rendimientos en ST, PFT y ODF de los extractos etanólicos y con acetato de etilo de madera de olivo. Analizando la tabla 2.5 se observa que las DE calculadas son elevadas y por ello se decide trabajar con las medianas para realizar el análisis estadístico. En la tabla 2.6 se exhiben las medianas de los rendimientos en ST, PFT y ODF para los extractos etanólicos y con acetato de etilo con las diferencias estadísticas respectivas, calculadas mediante el análisis unilateral da varianza por rangos de Kruskal Wallis. (Anexo 3, Tablas A a A.3.3.6). Medianas* ST PFT ODF ME 17,54 A 18938,85A 7313,85 A MAc 3,00 B 5395,13 B 3463,80 B % Diferencia de extracción por solvente 82,90 71,51 52,64 * Letras distintas indican diferencias significativas al 5% Tabla 2.6. Medianas de rendimientos en ST, PFT, ODF de los extractos etanólicos y con acetato de etilo de madera de olivo. Los gráficos 2.3 y 2.4 muestran las medianas de los rendimientos en ST, PFT y ODF de los extractos etanólicos y con acetato de etilo de madera de olivo. 61

10 Capítulo II: Extracción de compuestos polifenólicos MAc 3,00 ME MAc ME 17,54 ST/ % Gráfico 2.3. Medianas del rendimiento en ST de extractos de madera. En los extractos de madera de olivo de la variedad Arbequina, la extracción con acetato de etilo es un 82,90% menor en ST que la obtenida con etanol acuoso al 50% y de acuerdo al análisis estadístico, existen diferencias significativas (p<0,0079) en el rendimiento de ST en relación a los solventes de extracción (Tabla 2.5 y Gráfico 2.3). A su vez, con acetato de etilo se extrae un 71,51% de PFT menos que con etanol agua 50%, registrándose valores de 5395,13 mg y 18938,85 mg de fenoles por kilogramo de madera respectivamente (Gráfico 2.4). Las diferencias de las medianas del contenido en PFT para los extractos tratados con etanol 50% y acetato de etilo resultan estadísticamente significativas (p<0,0079) (Tabla 2.6). MAc 3463, ,13 PFT ODF ME 7313, ,85 Concentración/ ppm Ac. Cafeico Gráfico 2.4. Medianas del rendimiento en PFT y ODF de extractos de madera. Un comportamiento similar se observa en los valores registrados en los rendimientos en ODF (Gráfico 2.4). El etanol acuoso extrae un 52,64% más de ODF que el acetato de 62

11 etilo. En este caso, a nivel estadístico, también se encuentran diferencias significativas (p<0,0079) entre las medianas de los extractos (Tabla 2.6). Contrariamente a lo manifestado por los extractos de hoja (Tabla 2.4), el acetato de etilo extrae mayor proporción de ODF en madera que el etanol acuoso. Los valores registrados en PFT y ODF (Tabla 2.6) señalan que sólo el 38,62% de PFT cuantificados en el extracto etanólico son ODF, en tanto que, en el extracto con acetato de etilo este porcentaje asciende al 64,20%. Como se señaló anteriormente, esto resulta interesante si se tiene en cuenta que el grado de hidroxilación y la posición de los grupos oxhidrilos en la molécula son factores importantes en la actividad antioxidante de los CF [6; 7]. En síntesis, para ambos extractos de madera se observa que los rendimientos en ST, PFT y ODF presentan variación con respecto al solvente de extracción, lo que puede explicarse en función a las diferentes afinidades de los compuestos bioactivos del leño y los solventes del ensayo. Se evidencia en este estudio, que la composición química de los extraíbles de la madera son en gran medida compuestos fenólicos hidrosolubles, ya que es el etanol-agua 50% el que exhibe extracciones superiores, obteniéndose los valores de las medianas de los rendimientos en ST, PFT y ODF significativamente más elevados. Sin embargo, es preciso resaltar que es el acetato de etilo el que extrae mayor proporción de ODF sobre los fenoles totales extraídos. Dado los resultados registrados se puede establecer que, desde la perspectiva de la capacidad extractiva, el etanol acuoso al 50% se revela como el mejor de los solventes empleados en la extracción de PFT y ODF originarios de la madera de olivo de la variedad Arbequina. Además, este residuo de poda se puede considerar como una fuente potencial de polifenoles naturales, resultando sumamente interesante investigar si estos biocompuestos, presentes en los extractos, exhiben propiedades antioxidantes, temática que se analiza en los capítulos 3 y 4 de la presente tesis Análisis comparativo de los residuos de poda de olivo Las medianas de cinco repeticiones de los rendimientos en sólidos totales (ST), expresados como porcentaje de extracción (%) y de los contenidos en polifenoles totales (PFT) y en ortodifenoles (ODF), expresados como ppm de ácido cafeico, de los extractos de hojas y de madera de olivo extraídos con acetato de etilo y etanol acuoso al 50%, se analizan aplicando la prueba de Kruskal Wallis, que resulta significativa al 5% (p<0,0079 a p<0,0159 respectivamente). En consecuencia, se utilizan las comparaciones 63

12 múltiples y se obtienen los resultados (Anexo 3, Tablas A.3.7 a A.3.12) que se presentan en la siguiente tabla: Sólidos totales (%) Polifenoles totales (mg de ácido cafeico kg - 1 de residuo) O-difenoles (mg de ácido cafeico kg - 1 de residuo) HE 25,53 A 27467,65 A 17401,08 A ME 17,54 B 18938,85 B 7313,85 B % Diferencia de extracción por material vegetal 31,30 31,05 57,97 HAc 7,07 A 10562,84 A 5018,80 A MAc 3,00 B 5395,13 B 3463,80 B % Diferencia de extracción por material vegetal 57,57 48,92 30,98 * Letras distintas indican diferencias significativas al 5% Tabla 2.7. Medianas de los rendimientos en ST, PFT, ODF de los extractos HE, ME, HAc y MAc. En etanol la hoja presenta un rendimiento en ST un 31,30 % superior al de la madera, de igual forma, en acetato de etilo las extracciones en hoja tienen un rendimiento mayor comparado con los extractos de madera en un 57,57%, estas diferencias resultan estadísticamente significativas (p<0,0079) (Tabla 2.7). Asimismo, el extracto etanólico de hoja presenta un 31,05% más de PFT que el de madera y comparando los extractos con acetato de etilo, el de hoja es un 48,92% superior. Los contenidos de ODF en hoja, para el etanol acuoso y acetato de etilo, presentan incrementos de 57,97% y 30,98% comparados con los de madera respectivamente. El hecho de que las hojas de olivo exhiben rendimientos mayores con ambos solventes de extracción en los parámetros analizados, confirma lo publicado en otras investigaciones acerca de que las hojas presentan naturalmente mayor contenido en PFT que la madera [3]. Sin embargo, comparados con otras fuentes alternativas de CF [4] (Tabla 2.8), tanto las hojas como la madera de olivo de la variedad Arbequina procedente de la poda, pueden ser consideradas excelentes fuentes de PF naturales con posibles propiedades antioxidantes [3]. Polifenoles totales (ppm) Etanólico de porotos de soja 343 Metanólico de porotos de soja 320,8 Con acetato de etilo de poroto de soja 23,1 Etanólico en salvado de avena 287,5 Metanólico en salvado de avena 278,1 Con acetato de etilo en salvado de avena 44,3 Tabla 2.8. Contenido de compuestos fenólicos en extractos vegetales. Fuente: Revista A&G [4]. 64

13 Capítulo II: Extracción de compuestos polifenólicos De acuerdo con el análisis estadístico el rendimiento en PFT y ODF del etanol acuoso es significativamente superior al acetato de etilo tanto en hoja como en madera de olivo (p<0,0079, en ambas variables) (Tablas 2.4 y 2.6). El mayor poder extractivo del etanol frente al acetato de etilo sobre compuestos fenólicos de diferentes fuentes vegetales fue registrado recientemente por otros autores para madera y hoja de olivo cultivado bajo las condiciones edafoclimáticas del mediterráneo [3] y sobre soja y salvado de avena [4] (Tabla 2.8), coincidiendo con los resultados obtenidos en la presente tesis para residuos de poda de Arbequina, cultivadas en zonas cálidas. MAc 3,00 HE ME HAc 7,07 HAc MAc ME 17,54 HE 25,53 ST/ % Gráfico 2.5. Medianas de los rendimientos en ST de los extractos MAc, HAc, ME y HE. MAc 3463, ,13 ODF HAc 5018, ,84 PFT ME 7313, ,85 HE 17401, ,65 Concentración/ ppm Ac. Cafeico Gráfico 2.6. Medianas de los rendimientos en PFT y ODF de los extractos MAc, HAc, ME y HE. En función de lo expuesto, se puede concluir que existe una mayor afinidad entre las estructuras fenólicas presentes en los dos residuos vegetales y el etanol acuoso al 50 %, lo que confirma la naturaleza polar de los fenoles presentes en ambos materiales. Queda 65

14 comprobado además, que los residuos foliares del cultivar Arbequina presentan un rendimiento significativamente superior en ST (p<0,0079), PFT (p<0,0079) y ODF (p<0,0079 y p <0,0159), tanto en etanol acuoso al 50% como en acetato de etilo que la madera de la misma variedad (Tabla 2.7 y Gráficos 2.5 y 2.6). Un análisis más profundo de los rendimientos fenólicos revela que en los extractos la mayor proporción de ODF no siempre coincide con la mayor concentración en PFT y en ODF. Así, en el caso de los extractos MAc, que registra concentraciones en PFT y ODF inferiores al resto de los extractos ensayados, es el que contiene mayor proporción de ODF, ya que un 64,20% de los fenoles totales cuantificados resultan ser ODF, por lo que se esperaría que este extracto manifieste la mejor propiedad antioxidante frente a un sistema radicalario. El extracto HE, con los contenidos más elevados en PFT y ODF es el que le sigue en este aspecto al extracto MAc con un 63,35% de ODF sobre el total de PFT. En el caso del extracto HAc un 47,51% de los PFT son ODF y en ME este porcentaje baja a un 38,62% (Tabla 2.4 y 2.6). En síntesis, en base a los resultados registrados en el presente estudio, se puede estimar que con acetato de etilo se puede llegar a extraer por kilogramo de residuo 18,94 g de PFT en hoja y 5,40 g de estos compuestos bioactivos en la madera. En tanto, con el etanol acuoso puede llegar a obtenerse para la hoja y madera respectivamente 27,48 g y 10,56 g de fitofenoles por kilogramo de residuo, lo que incrementa el interés del estudio de la potencialidad de los extractos para contrarrestar la acción de RL sobre diferentes sustratos. Por otra parte, cabe señalar que desde el punto de vista de las posibles aplicaciones de los extractos como conservantes de productos alimenticios o su empleo en la industria farmacológica y cosmetológica, el mayor poder extractivo de la mezcla etanólica acuosa resulta positivo debido a la inocuidad del etanol y la toxicidad e inflamabilidad del acetato de etilo. Resta comprobar la actividad antioxidante de los extractos sobre distintos sistemas radicalarios. En los capítulos 3 y 4 se analiza la incidencia de las propiedades antioxidantes de los extractos frente a dos sistemas radicalarios diferentes, solución metanólica de DPPH y aceite de oliva virgen sometido a condiciones forzadas de oxidación, respectivamente. 66

15 2.5.- Citas bibliográficas [1]. Wood J., Senthilmohan S., Peskin A. (2001). Antioxidant activity of procyanidincontaining plant extracts at different phs. Food Chemistry. Vol. 77. Pp [2]. Waterman P y Mole S. (1994). Methods in ecology. Analysis of phenolic plant metabolites. Blackwell Scientific publications. Pp.237. [3]. Pérez-Bonilla M., Salido S., Linares P., van Beek T., Altarejos J., Nogueras M., Sánchez A. (2003). La madera de olivo como nueva fuente de antioxidantes naturales. Foro de la tecnología oleícola y la calidad. Código TEC-26. Disponible en: < C>. [4]. Janczuk L., Gutiérrez M., Della Rocca P. (2007). Antioxidantes naturales en aceites comestibles. Revista aceites y grasas. Vol. 2. Nº 67. Pp [5]. Vázquez A., Janer del Valle C., Janer del Valle M. (1975). Polifenoles naturales y estabilidad del aceite de oliva. Grasas y Aceites. Vol. 26. Pp [6]. De la Torre Carbot K. (2007). Efecto del consumo del aceite de oliva sobre la composición de las lipoproteínas de baja densidad en individuos de diferentes países europeos. Tesis de Doctorado. Universidad de Barcelona. Cap. II. Pp [7]. Oliveras López J. (2005). Calidad del aceite de oliva virgen extra. Antioxidantes y función biológica. Tesis de Doctorado. Universidad de Granada. Cap. I. Sección 2. Pp