DETERMINACIÓN DE FÓSFORO TOTAL EN ALIMENTOS. Método Espectrofotométrico del molibdato de amonio (Basado en Método AOAC N ) ME-711.
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- José Ramón Crespo Miranda
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1 Página 1 de 5 OBJETIVO Determinar el contenido de fósforo total en alimentos e ingredientes alimentarios. 1. CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE El método es aplicable a alimentos en general, sólidos y líquidos. 2. FUNDAMENTO El método se basa en la formación de un complejo coloreado de fosfomolibdato [(MoO 2 4MoO 3 ) 2 H 3 PO 4 ] que en presencia de ácido ascórbico se reduce a azul de molibdeno y cuya absorbancia se lee a una longitud de onda de 660 nm. 3. DOCUMENTOS DE REFERENCIA 3.1 Official Methods of Analysis of AOAC International, 19th edition, Volume II. Editor: George W. Latimer, Jr. Chapter 45 p. 50, ( ) páginas Método Phosphorus (Total) in Foods, Colorimetric Method. 4. TERMINOLOGÍA No aplica. 5. REACTIVOS, INSUMOS Y EQUIPOS 5.1 REACTIVOS Ácido clorhídrico p.a. 37% Estándar de PO -2 4 de 1000 ppm (ug/ml) Acetato de sodio trihidratado Ácido acético glacial, Ácido ascórbico Ácido oxálico Ácido sulfúrico Molibdato de amonio. 5.2 INSUMOS Cápsulas de porcelana Vidrio reloj Matraz aforado de 100 Ml Probeta de 1000 ml. DUEÑO DE PROCESO: Encargado de Laboratorio de Nutrientes, Aditivos y Contaminantes. ESTE DOCUMENTO FUERA DE LA INTRANET O IMPRESO SIN TIMBRE DE DOCUMENTO CONTROLADO SE CONSIDERA COPIA NO CONTROLADA APROBADO: Jefe Subdepartamento
2 5.3 EQUIPOS Página 2 de Balanza analítica, sensibilidad 0,1 mg Mufla regulable a 550 ± 15 C Baño termorregulado Espectrofotómetro visible Placa calefactora Peachímetro. 6. DESCRIPCIÓN DE ACTIVIDADES. 6.1 Muestra Los requisitos de recepción, aceptación y rechazo de la muestra se encuentran documentados en el IT Preparación de Reactivos Solución 1, tampón ph 4: pesar 34 g de acetato de sodio trihidratado, disolver en agua y mezclar con 57 ml de ácido acético glacial, completar a 1 litro con agua destilada, llevar a ph Solución de ácido oxálico al 0,5%: disolver 0,5 g de ácido oxálico en agua destilada y llevar a un volumen final de 100 ml Solución 2 (ácido ascórbico): disolver 1 g de ácido ascórbico en solución de ácido oxálico 0,5% y llevar a un volumen final de 100 ml. *NOTA: preparar solución el día de su uso Solución 3 ( sulfúrico): preparar diluyendo 75 ml de ácido sulfúrico en 200 ml de agua, que son agregados a una solución que contiene 25 g de disueltos en 300 ml de agua. (575 ml volumen final). 6.3 Preparación de curva de calibración Solución estándar de trabajo de PO4-2 de 25 ppm (µg/ml): preparar una solución estándar secundaria de PO4-2 de 100 ppm (ug/ml), diluyendo la solución estándar de 1000 ppm 10 veces (por ejemplo, 10 ml en 100 ml). Luego, tomar 25 ml de la solución estándar secundaria de PO4-2 de concentración 100 µg/ml. y enrasar a 100 ml con agua desionizada. *NOTA: si no se dispone de solución estándar secundaria de PO4-2 de 100 ppm, esta se prepara pesando g de KH 2 PO 4 para luego disolver en 500 ml de agua desionizada Estándar de PO4-2 de 2,5 ppm (µg/ml): tomar 10 ml de la solución estándar de Estándar de PO4-2 de 6,25 ppm (µg/ml): tomar 25 ml de la solución estándar de
3 Página 3 de Estándar de PO4-2 de 12,5 ppm (µg/ml): tomar 50 ml de la solución estándar de Para cada una de las concentraciones de estándar, y previo al momento de la lectura, agregar 10 ml de la solución 1, luego 1 ml de la solución 2 y finalmente 5 ml de la solución Mezclar después de cada adición y aforar a 100 ml con agua. 6.4 Preparación de controles. No aplica. 6.5 Preparación de la Muestra o etapas previas a realizar la medición Pesar 1 a 5 g de muestra previamente homogenizada Precalcinar y luego calcinar a 550 C por 8 horas hasta la obtención de cenizas blancas Tratar las cenizas en el crisol a temperatura ambiente con 5 ml de agua y 5 ml de ácido clorhídrico concentrado. Cubrir con vidrio reloj y hervir cuidadosamente 5 min. en placa calefactora, evitando que se seque Una vez alcanzada temperatura ambiente, transferir cuantitativamente a un matraz aforado de 100 ml con agua destilada y aforar Medir 5 ml de la solución muestra, agregar 10 ml de la solución 1, luego 1 ml de la solución 2 y finalmente 5 ml de la solución 3. Mezclar después de cada adición y aforar a 100 ml con agua y leer a los 30 minutos 6.6 Análisis de la muestra o realización de la medición Leer la absorbancia del blanco y la curva de concentraciónes de 2.5, 6.25 y 12.5 ppm de solución estándar de PO4-2 en un espectrofotómetro UV/VIS a una de Long de onda de 660 nm A continuación, leer las muestras. *NOTA: La medición de la curva estándar como de las muestras, debe realizarse a los 30 minutos transcurridos luego de la adición de la solución Cálculo de Resultados El cálculo de resultados se determina según la siguiente ecuación: g de fósforo = Am x C As x a x P x 10
4 Página 4 de 5 Donde: Am: Absorbancia muestra. As: Absorbancia estándar. C: Masa en µg del estándar. a: Alícuota muestra, ml. P: Peso muestra, g. 10: factor asociado al peso de 5g de muestra Para expresar g de fósforo en g de PO 4, el resultado en g de fósforo se multiplica por el factor Para expresar g fósforo en g de P 2 O 5, el resultado en g de fósforo se multiplica por el factor Aseguramiento de la calidad del ensayo Para asegurar la calidad de los ensayos, se debe tratar la solución estándar de igual forma que la muestra y a los mismos tiempos, se debe realizar todo en duplicado evitando que la diferencia en la repetibilidad supere el 5% 6.9 Expresión de los Resultados Los resultados se expresan en en g de fósforo / 100 g de muestra. 7. CONTROL DE REGISTROS IDENTIFICACION RESPONSABLE TIEMP O ALMACENAMIENTO MEDIO SOPORTE LUGAR RESPONSABLE/ RECUPERACION DISPOSICION Registro de análisis proximal en alimentos RG Encargado de laboratorio de Nutrientes, aditivos y Contaminantes. 5 años papel Laboratorio de Nutrientes, Aditivos y Contaminantes Luego de 5 años eliminación basura común o reciclaje de papel blanco.
5 Página 5 de 5 8. CONTROL DE CAMBIOS VERSION FECHA PRINCIPALES PUNTOS MODIFICADOS RESUMEN DE MODIFICACIONES Cambio de referencia bibliográfica. 1 Todos Cambio de formato.de PRT a 9. CUADRO DE RESPONSABILIDADES Ejecuta el método Técnico de Laboratorio Encargado de Laboratorio Elabora el informe de resultados Aprueba el informe de resultados Encargado de Laboratorio Jefe Subdepartamento 10. ANEXOS No Aplica
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