DETERMINACIÓN DE ÁCIDO BENZOICO Y ÁCIDO SORBICO EN ALIMENTOS Método HPLC

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1 DETERMINACIÓN DE ÁCIDO BENZOICO Y ÁCIDO SORBICO EN ALIMENTOS ME Página 1 de 5 1. OBJETIVO Determinar ácido sórbico y ácido benzoico utilizado como agente de conservación en diversos alimentos por método HPLC. 2. CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE El método es aplicable a muestras de bebidas, jugos, productos de confitería, margarinas, salsas, derivados lácteos. 3. FUNDAMENTO Corresponde a la extracción del conservante desde el alimento, posterior filtración y cuantificación por Cromatografía Líquida de Alta Resolución utilizando detector UV a 232 nm. 4. DOCUMENTOS DE REFERENCIAS 4.1 Frans J. E. M. Kuppers Reserve-Phase Liquid Chromatographic Determination of benzoic and sorbic acids in fresh cheese J:A:O:A:C:, 71 N 5 (1988) 4.2 Hyoung S. Lee Liquid Chromatographic determination of benzoic acid in orange juice: Interlaboratory study, J:A:O:A:C:, 78, N 1 (1995). 5. TERMINOLOGÍA No aplica. 6. REACTIVOS, INSUMOS Y EQUIPOS 6.1 REACTIVOS Hexacianoferrato de potasio trihidratado Sulfato de zinc heptahidratado Metanol HPLC Fosfato de potasio dibásico trihidratado (K 2HPO 4)*3H 2O) Dihidrógeno fosfato de potasio (KH 2PO 4) Ácido fosfórico DUEÑO DE PROCESO: Encargado de Laboratorio de Nutrientes, Aditivos y Contaminantes. ESTE DOCUMENTO FUERA DE LA INTRANET O IMPRESO SIN TIMBRE DE DOCUMENTO CONTROLADO SE CONSIDERA COPIA NO CONTROLADA APROBADO: Jefe Subdepartamento Alimentos y Nutrición

2 ME Página 2 de INSUMOS Columna RP-18 (5um) en Lichrocart Membrana filtrante milipore GVWP, 47 mm de diámetro y de 0.22 um de poro para fase móvil Membrana filtrante milipore GVWP, 13 mm de diámetro y de 0.22 um de poro para muestras y estándares Material usual de laboratorio. 6.3 EQUIPOS Balanza analítica Cromatógrafo liquido con detector UV, lámpara de deuterio a 232 nm Equipo de filtración de solvente Equipo para filtración de muestras y estándares Baño ultrasonido Baño termoregulado a 60 C 7. DESCRIPCIÓN DE ACTIVIDADES 7.1 Muestreo/Muestra El ingreso de la muestra para su análisis debe cumplir con el Instructivo de Aceptación o Rechazo de muestras IT Preparación de Reactivos Estándar de ácido benzoico 1000 ug/ml: pesar 100 mg de estándar, disolver y llevar a 100 ml con agua desionizada. Considerar la pureza del estándar para determinar la concentración final Estándar de ácido sórbico 1000 ug/ml: pesar 100 mg de estándar, disolver y llevar a 100 ml con agua desionizada. Considerar la pureza del estándar para determinar la concentración final Estándar de ácido benzoico 100 ug/ml: tomar una alícuota de 10 ml de la solución de 1000 ug/ml y llevar a 100 ml con agua desionizada Estándar de ácido sórbico 100 ug/ml: tomar una alícuota de 10 ml de la solución de 1000 ug/ml y llevar a 100 ml con agua desionizada Reactivo Carrez I: pesar 36 g de hexacianoferrato de potasio trihidratado y llevar a un litro con agua desionizada Reactivo Carrez II: pesar 72 g de sulfato de zinc heptahidratado y llevar a un litro con agua desionizada.

3 ME Página 3 de Tampón fosfato ph 6.5: disolver 1.9 g de fosfato de potasio dibásico trihidratado (K 2HPO 4)*3H 2O) y 2.5 g de dihidrogeno fosfato de potasio (KH 2PO 4) en matraz de 1 litro. Ajustar a ph 6.5 con ácido fosfórico al 5% en agua Fase móvil: mezclar 950 ml de tampón fosfato ph 6.5 con 50 ml de metanol. Filtrar la solución por membrana de 0.22 um. 7.3 Preparación de curva de calibración Mix de estándares de 10 ug/ml de ácido Benzoico y 5 ug/ml de ácido sórbico: tomar 10 ml de estándar de 100 ug/ml de ácido benzoico y 5 ml del estándar de 100 ug/ml de ácido sórbico y llevar a 100 ml con agua desionizada Mix de estándares de 20 ug/ml de ácido Benzoico y 10 ug/ml de ácido sórbico: tomar 20 ml de estándar de 100 ug/ml de ácido benzoico y 10 ml del estándar de 100 ug/ml de ácido sórbico y llevar a 100 ml con agua desionizada Mix de estándares de 40 ug/ml de ácido Benzoico y 20 ug/ml de ácido sórbico: tomar 40 ml de estándar de 100 ug/ml de ácido benzoico y 20 ml del estándar de 100 ug/ml de ácido sórbico y llevar a 100 ml con agua desionizada. Cada mix de estándares filtrar por membrana de 0.22 um y conservar por un periodo máximo de 1 mes refrigerado a 4 C. 7.4 Preparación de controles Para controlar el proceso de extracción de la muestra, se puede utilizar un material control (intercomparación), según disponibilidad, preparándolo en iguales condiciones que la serie de muestras a analizar. 7.5 Preparación de la Muestra o etapas previas a realizar la medición Pesar alrededor de 5 g de muestra previamente homogeneizada en el caso de muestras sólidas o semisólidas ó 10 ml si son muestras líquidas Disolver la muestra en matraz aforado de 100 ml con 20 ml de agua desionizada. Colocar el matraz en baño de agua a 60 C por 30 min. Enfriar y colocar durante 10 minutos en baño de ultrasonido y enfriar. Agregar 10 ml de reactivo de Carrez I y 10 ml de reactivo de Carrez II sucesivamente Enrazar la muestra a 100 ml (v) y agitar vigorosamente Filtrar la solución a través de papel filtro Antes de inyectar, filtrar a través de membrana filtrante de 0.22 um. 7.6 Análisis de la muestra o realización de la medición. Condiciones instrumentales Volumen de inyección: 20 ul Columna: Columna RP-18 (5um) en Lichrocart Flujo: 0,8 a 1,2 ml/minuto T del horno: Ambiente.

4 ME Página 4 de 5 Hacer la curva de calibración con método de estándar externo. Los tiempos de retención de ácido benzoico y sórbico son 6.6 y 9.1, respectivamente. 7.7 Cálculo de Resultados: Utilizar el integrador del equipo con el programa de cálculo de área con estándar externo y la tabla correspondiente que contiene la curva de calibración obteniendo directamente la concentración (c) en ppm (ug/ml) para cada conservante. c x v mg/kg para cada conservante = a Donde: c = concentración en ug/ml obtenido de la curva de calibración. v = volumen al que se diluye la muestra (100 ml en la presente técnica) a = masa de la muestra en g o volumen en ml, según el tipo de muestra. 7.8 Aseguramiento de la calidad del ensayo. Cada serie de diez muestras, realizar un análisis en duplicado. La diferencia de los resultados no deberá ser superior al 5% del promedio. 7.9 Expresión de los Resultados. El resultado será informado como el promedio de los valores obtenidos en mg/kg ó mg/l según el tipo de muestra con un decimal. 8. CONTROL DE REGISTROS No Aplica 9. CONTROL DE CAMBIOS VERSION FECHA PRINCIPALES PUNTOS MODIFICADOS RESUMEN DE MODIFICACIONES Se eliminan registros obsoletos Todos Cambio de formato a ME.

5 ME Página 5 de CUADRO DE RESPONSABILIDADES Ejecuta el método Técnico de Laboratorio Encargado de Laboratorio Nutrientes Aditivos y Contaminantes Elabora el informe de resultados Profesional encargado del Laboratorio Aprueba el informe de resultados Jefatura de Sub departamento Alimentos y Nutrición 11. ANEXOS No Aplica.