ESTUDIO SCIENTÍFICO COMO SUPERAR NOTABLEMENTE LAS EXIGENCIAS ALTAS DE LA NORMA ISO PARA PROTEÍNA CON UN SIMPLE MÉTODO KJELDAHL
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- Carmen González Cuenca
- hace 5 años
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1 ESTUDIO SCIENTÍFICO COMO SUPERAR NOTABLEMENTE LAS EXIGENCIAS ALTAS DE LA NORMA ISO PARA PROTEÍNA CON UN SIMPLE MÉTODO KJELDAHL
2 Resumen Con el objetivo de optimizar la repetibilidad de los contenidos de proteínas según el método Kjeldahl en la leche conforme a las normas oficiales como AOAC o ISO , se variaron los parámetros de digestión para obtener la repetibilidad (significativamente mejor que el 0,038 % de proteína) y recuperación más altas posibles. El valor óptimo se encontró a las 2 horas de digestión con una temperatura de 390 C en un bloque de digestión KJELDATHERM KBL20s. La repetibilidad entre las dos muestras similares fue significativamente mejor que el 0,038 % de proteína; esta repetibilidad puedo mantenerse incluso en una serie de 20 muestras similares. La única divergencia respecto a las normas aplicadas fue el estado de las muestras tras la digestión. Incluso cuando las normas describen una solución clara después de la digestión, el método aquí descrito puede oscurecer parcialmente las muestras después de la digestión. Los buenos resultados justifican desde nuestro punto de vista esta leve divergencia. La recuperación se comprobó con L-triptófano (AppliChem, mín. 99 %); el promedio de recuperación se situó en el 99,494 % con el método aquí realizado. De esta forma, la recuperación fue claramente más alta que el 98 % mínimo requerido en las normas. Datos del método y resultados Muestra: leche Número de registro: 3590,3667 Fecha: Tipo de muestra: leche Datos analíticos Agua: desmineralizada o destilada Ácido sulfúrico H2SO4, mín. 98 % Catalizador: Kjeltabs Cx análogo a Kjelcat Cu Solución alcalina NaOH, 32 % Ácido bórico H3BO3, 2 % Solución estándar: ácido clorhídrico HCI c= 0,1 mol/l o bien ácido sulfúrico H2SO4 c= 0,05 mol/l Todas las sustancias químicas utilizadas deben presentar calidad analítica. Aparatos Balanza analítica (0,0001 g) Bloque de digestión Kjeldahl KJELDATHERM KBL20s, lavador de gases TURBOSOG Sistema de destilación VAPODEST 50 s c Preparación de la muestra La leche se calienta a 38 C en un baño María de 40 C y se mezcla. A continuación se deja enfriar a temperatura ambiente. El peso de la muestra se determina mediante la pesada por diferencia con una jeringuilla desechable. El ácido sulfúrico se añade a través de las paredes del tubo de digestión para enjuagar los residuos de muestra de las paredes. Muestra: ~4 g Catalizador: 2 Kjeltabs Typ CX o bien 2 Kjelcat Cu H2SO4: 20 ml mín. 98 % 2
3 Parámetros KJELDATHERM KBL 20s: Tiempo Temperatura Observaciones [min] [ C] 390 Las muestras se añaden a un bloque precalentado Pasadas 2 horas, la muestra y el análisis se enfrían Especialmente al comienzo de la digestión las muestras pueden formar espuma; la espuma no debería superar 2/3 de la altura del tubo de digestión. En ese momento pueden quedar residuos de muestra pegados a las paredes del tubo; estos pueden enjuagarse durante la digestión mediante el uso de ácido sulfúrico de condensación. La muestra debería ser clara tras la digestión pero en realidad suele presentar un color ligeramente oscuro tras la digestión. Esto no tiene ningún efecto negativo en los resultados, como muy bien muestran los datos de análisis adjuntos. Parámetros VAPODEST 50sc: Añadir H2O ~90 ml Añadir NaOH ~80 ml Tiempo de reacción 0 s Tiempo de destilación 240 s Fuerza de vapor 100 % Succionar muestra 30 s H3BO3 ~80 ml Succionar matraces de 30 s vidrio Valoración Ceq = 0,1 Método Posición Serie Fecha Muestra Peso (g) Valor del Leche : ,9856 0, ,9352 0,5194 3,3137 Leche : ,0618 0, ,2158 0,5193 3,3133 0,0004 Leche : ,9331 0, ,7559 0,5199 3,3172-0,0039 Leche : ,7237 0, ,9711 0,5197 3,3154 0,0018 Leche : ,8159 0, ,2849 0,5186 3,3088 0,0066 Leche : ,9434 0, ,8061 0,5204 3,3199-0,0111 Leche : ,2094 0, ,7451 0,5187 3,3095 0,0104 Leche : ,0130 0, ,0824 0,5210 3,3239-0,0144 Leche : ,7047 0, ,8856 0,5191 3,3118 0,0121 Leche : ,1220 0, ,4467 0,5196 3,3149-0,0032 Leche : ,2383 0, ,9304 0,5213 3,3260-0,0110 Leche : ,8869 0, ,6354 0,5218 3,3289-0,0030 Leche : ,0947 0, ,3363 0,5193 3,3129 0,0160 Leche : ,0010 0, ,0150 0,5202 3,3188-0,0058 Leche : ,9217 0, ,6804 0,5188 3,3097 0,0091 Leche : ,8691 0, ,5212 0,5200 3,3179-0,0082 Leche : ,0271 0, ,0520 0,5181 3,3055 0,0124 Leche : ,1710 0, ,6061 0,5188 3,3102-0,0047 Leche : ,1738 0, ,6212 0,5190 3,3112-0,0010 Leche : ,2412 0, ,8801 0,5193 3,3131-0,0019 Valor máximo 0,5218 3,3289 Valor medio 0,5196 3,3151 Valor mínimo 0,5181 3,3055 Alcance variaciones 0,0037 0,0235 3
4 Valor del Método Posición Serie Fecha Muestra Peso [g] Leche : ,1874 0, ,5790 0,5159 3,2914 Leche : ,3487 0, ,9050 0,5172 3,2996 Leche : ,2927 0, ,0820 0,5197 3,3154 Leche : ,0159 0, ,0300 0,5188 3,3099 Leche : ,7109 0, ,8520 0,5170 3,2983 Leche : ,1427 0, ,4550 0,5173 3,3001 Leche : ,9277 0, ,6950 0,5185 3,3080 Leche : ,9669 0, ,8390 0,5184 3,3076 Leche : ,7556 0, ,0450 0,5180 3,3049 Leche : ,8642 0, ,4520 0,5182 3,3060 Leche : ,2394 0, ,9070 0,5204 3,3201 Leche : ,6609 0, ,7220 0,5190 3,3114 Leche : ,8367 0, ,3120 0,5168 3,2972 Leche : ,9995 0, ,9060 0,5166 3,2958 Leche : ,9099 0, ,6550 0,5194 3,3139 Leche : ,8849 0, ,5140 0,5177 3,3027 Leche : ,1005 0, ,2740 0,5164 3,2946 Leche : ,9932 0, ,9290 0,5182 3,3061 Leche : ,1403 0, ,4080 0,5160 3,2920 Leche : ,0088 0, ,9780 0,5179 3,3041 Valor máximo 0,5204 3,3201 Valor medio 0,5179 3,3040 Valor mínimo 0,5159 3,2914 Alcance variaciones 0,0045 0,0288-0,0082 0,0056-0,0019 0,0004-0,0011 0,0087 0,0014 0,0113-0,0115-0,0121-0,0158 0,0116-0,0078 0,0026-0,0142 0,0142-0,0182 0,0080 0,0141 Leche : ,1337 0, ,6018 0,5218 3,3292 Leche : ,1002 0, ,4660 0,5214 3,3268 Leche : ,9186 0, ,7417 0,5197 3,3158 Leche : ,1053 0, ,4515 0,5203 3,3195 Leche : ,2131 0, ,8274 0,5195 3,3143 Leche : ,6923 0, ,9341 0,5209 3,3235 Leche : ,8203 0, ,3501 0,5187 3,3095 Leche : ,9688 0, ,8952 0,5186 3,3084 Leche : ,0099 0, ,0945 0,5202 3,3189 Leche : ,9603 0, ,9183 0,5205 3,3207 Leche : ,1726 0, ,6498 0,5186 3,3084 Leche : ,1243 0, ,5270 0,5205 3,3205 Leche : ,1194 0, ,4634 0,5189 3,3107 Leche : ,1454 0, ,5674 0,5192 3,3123 Leche : ,1413 0, ,5274 0,5183 3,3070 Leche : ,8252 0, ,4547 0,5219 3,3297 Leche : ,2073 0, ,7720 0,5184 3,3071 Leche : ,9366 0, ,7825 0,5188 3,3098 Valor máximo 0,5219 3,3297 Valor medio 0,5198 3,3165 Valor mínimo 0,5183 3,3070 Alcance variaciones 0,0036 0,0227 0,0024-0,0037-0,0092 0,0011-0,0018-0,0121-0,0017-0,0227-0,0028-0,0003 0,0110 0,0052 0,0141-0,0105 0,0123 0,0099 0,0053 0,0226 Método Posición Serie Fecha Muestra Peso [g]or del blanco Consumo [ml] N [%] P [%] 4
5 Valor del Método Posición Serie Fecha Muestra Peso [g] Leche : ,4133 0, ,8085 0,5173 3,3005 Leche : ,6963 0, ,8524 0,5173 3,3002 Leche : ,5943 0, ,5570 0,5204 3,3204 Leche : ,8219 0, ,2929 0,5164 3,2947 Leche : ,6595 0, ,7306 0,5178 3,3036 Leche : ,7314 0, ,0334 0,5192 3,3125 Leche : ,5626 0, ,3612 0,5174 3,3008 Leche : ,8268 0, ,3613 0,5183 3,3065 Leche : ,8050 0, ,2601 0,5175 3,3016 Leche : ,4999 0, ,8589 0,5185 3,3079 Leche : ,0541 0, ,2076 0,5184 3,3076 Leche : ,9354 0, ,8308 0,5207 3,3218 Leche : ,5699 0, ,4644 0,5204 3,3199 Leche : ,9336 0, ,7559 0,5182 3,3063 Leche : ,9511 0, ,8226 0,5183 3,3068 Leche : ,8191 0, ,3456 0,5187 3,3095 Leche : ,9122 0, ,6109 0,5159 3,2913 Leche : ,8360 0, ,4045 0,5186 3,3086 Leche : ,8617 0, ,5230 0,5194 3,3140 Leche : ,9812 0, ,9423 0,5186 3,3086 Valor máximo 0,5207 3,3218 Valor medio 0,5184 3,3071 Valor mínimo 0,5159 3,2913 Alcance variaciones 0,0048 0,0305 0,0003 0,0257-0,0089-0,0056-0,0062-0,0142 0,0135-0,0027-0,0173 0,0054-0,0202-0,0089 0,0117 0,0048 0,0003 0,0019-0,0004 0,0182-0,0054 Método Posición Serie Fecha Muestra Peso [g] Valor del [eche : ,7384 0, ,0532 0,5190 3,3110 [eche : ,9010 0, ,7057 0,5208 3,3225 [eche : ,8669 0, ,5834 0,5209 3,3235 [eche : ,8625 0, ,5464 0,5202 3,3187 [eche : ,9185 0, ,7356 0,5195 3,3144 [eche : ,7295 0, ,0657 0,5207 3,3219 [eche : ,1781 0, ,7384 0,5208 3,3230 [eche : ,0103 0, ,1072 0,5206 3,3214 [eche : ,0094 0, ,0517 0,5188 3,3097 [eche : ,9677 0, ,8945 0,5187 3,3091 [eche : ,9054 0, ,7275 0,5210 3,3237 [eche : ,1788 0, ,7528 0,5212 3,3255 [eche : ,1184 0, ,5028 0,5204 3,3200 [eche : ,0040 0, ,0695 0,5201 3,3182 [eche : ,0282 0, ,1327 0,5192 3,3123 [eche : ,1692 0, ,6593 0,5193 3,3131 [eche : ,9925 0, ,0162 0,5197 3,3158 [eche : ,1946 0, ,8242 0,5217 3,3282 [eche : ,9430 0, ,9214 0,5229 3,3360 [eche : ,2586 0, ,0484 0,5212 3,3252 Valor máximo 0,5229 3,3360 Valor medio 0,5203 3,3197 Valor mínimo 0,5187 3,3091 Alcance variaciones 0,0042 0,0268-0,0115 0,0048-0,0075 0,0016 0,0006-0,0018 0,0018-0,0009-0,0124 0,0107-0,0010 0,0043-0,0011 0,0116-0,0146 0,0055 0,0059-0,0027-0,0078 5
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